Носители лигандов

Частицей — носителем лиганда з реакциях замещения может быть не только комплекс (например, МА ), но и некомплексная частица, при расщеплении которой возникает лиганд. Так, при реакции [c.47]

Иммобилизация лиганда на носителе. Лиганд, выбранный в зависимости от специфических взаимодействий, которые могут установиться с подлежащими очистке молекулами, по их размеру, структуре и химическим реагирующим группам, закрепляют на носителе. Этот носитель, подобранный по способности связывать лиганд непосредственно или с помощью связывающих спейсеров, вначале приводят в действие активирующим агентом, и лишь затем происходит связывание лиганда. [c.81]

Носитель лигандов, сорбент [c.62]

Иммобилизация нейтральных комплексов металлов осуществляется путем связывания их с закрепленными на носителе лигандами. Для этой цели используют модифицированный фосфи- [c.210]

Модификацию носителя иногда проводят путем ковалентной пришивки к его поверхности молекул, являющихся специфическими лигандами иммобилизуемого фермента. Иммобилизация с использованием таких носителей достигается за счет образования прочного нековалентного комплекса между ферментом и связанным с носителем лигандом. Этот метод иммобилизации, получивший название аффинной сорбции, широко используется в лабораторной практике, например, для избирательного выделения ферментов из сложных смесей (аффинная хроматография). [c.54]

При установлении констант равновесного связывания по данным хроматографии с зональным элюированием весьма важно, чтобы емкость колонки и сродство подвижного компонента к иммобилизованному лиганду соответствовали друг другу, только тогда можно получить в течение разумных промежутков времени вполне четкие кривые элюирования. Получение четких кривых элюирования зависит от ряда параметров, таких, как размер шариков и пор матрицы, диаметр и длина колонки и скорость потока [11, 12]. Кроме того, удерживание подвижного компонента непосредственно зависит от количества лиганда, присоединенного к матрице [1, 3]. При постоянной скорости потока и постоянном объеме колонки зоны подвижного компонента, введенного на матрицу с меньшим количеством иммобилизованного лиганда, элюируются в виде более острых пиков при меньших объемах элюирования. Увеличение количества иммобилизованного лиганда приводит к более широким пикам и большим объемам элюирования. Для установления соответствующей концентрации иммобилизованного лиганда для данной серии экспериментов обычно прибегают к методу проб и ошибок. Концентрация присоединенного к твердому носителю лиганда может первоначально контролироваться путем введения в реакцию с активированным твердым носителем определенных количеств лиганда. Дальнейшим исследованием ряда препаратов матрицы с различной плотностью лиганда можно опреде- [c.225]

Выделение клеток с флуоресцентными активированными клеточными сортерами (ФАКС) требует дорогостоящего оборудования и малопригодно для рутинных экспериментов, особенно при необходимости получения большого числа клеток. Следовательно, существует необходимость в более широко доступных и воспроизводимых методах разделения клеток. Аффинная хроматография в принципе представляет собой идеальный метод для очистки клеток он заключается в иммобилизации на твердых носителях лигандов, избирательно узнающих компоненты мембран. [c.243]

Наибольший интерес представляют ФАП на основе нейромедиаторов. Это связано с тем, что последним соответствует обширная группа рецепторов разнообразной локализации, поэтому, изменяя относительное сродство к различным видам рецепторов и избирательно воздействуя на рецепторы данного вида определенной локализации (например, рецепторы на поверхности мембран), можно ожидать возникновения новых эффектов. Под ответом рецептора на действие того или иного вещества подразумевают два последовательных акта специфическое связывание с рецептором и индуцирование физиологического ответа. Если вещество специфически (с точки зрения структуры) связывается с рецептором (является его лигандом) и вызывает характерный физиологический ответ за счет обратимых изменений в рецепторе, то его называют агонистом. Если имеет место только первая стадия — связывание, а вторая-ответ — не наблюдается, то вещество называют антагонистом данного рецептора. В тех случаях, когда антагонист связывается с рецептором сильнее, чем обычные агонисты, его называют блокатором (конкурентным или неконкурентным — в зависимости от способности вытеснять агонист из рецептора). Связывание полимера с рецептором еще не означает физиологического ответа (т. е. активности), а активность сама по себе не доказывает связывания полимера с рецептором, так как может вызываться адсорбированным на полимере или выделившимся в результате гидролиза ФАВ. Только обнаружение физиологической активности полимера при безусловном отсутствии примесей низкомолекулярного ФАВ свидетельствует в пользу проявления активности полимером как таковым. Для ФАП прививочного типа это означает способность ковалентно связанного с полимером-носителем лиганда — ФАВ — взаимодействовать с рецептором и вызывать специфический физиологический ответ. [c.79]

В аффинной — на биоспецифическом взаимодействии компонентов с аффинным лигандом, ковалентно связанным с нерастворимым носителем. Лигандами могут выступать, например, ингибиторы, кофакторы, субстраты, а носителями — силикаты, полиалкиламиды, декстрины, целлюлоза, хитин, крахмал. [c.9]

Биоспецифические сорбенты (БСС) образуются в результате закрепления на поверхности носителя веществ (лигандов) с определенной биохимической специфичностью. Связанный с носителем лиганд сохраняет, по крайней мере частично, способность к взаимодействию со строго определенными веществами. Результатом этого взаимодействия является адсорбция веществ на БСС. Адсорбция имеет обратимый характер вещество можно десорбировать посредством изменения ионной силы раствора или же специфическими элюентами. Первые БСС получены Аксеном, Поратом и Эрнбаком в 1967 г. (А х e n R., Porath J., Ernba k S., Nature, 1967, v. 214, No. 5095, p. 1302—1304). [c.219]

Проблеме создания селективного рСа-ИСЭ посвящено большое число работ, ввиду того что ион кальция играет исключительно важную роль в физиологических процессах. Все рСа-ИСЭ могут быть разбиты по типу жидкого ионообменника на три группы 1) на основе ди- (алкил, арил) фосфорных кислот 2) на основе р-дикетоиов и 3) на основе нейтральных носителей-лигандов типа оли-гооксаалканов. [c.283]

Если необходимо прикрепить к сефарозяому носителю лиганд, имеющий фенольную или нмидазольную группу, используют бромацетил<ефарозу, которую получают, обрабатывая аминоэтил-сефарозу раствором [c.222]

И существуют некоторые готовые нерастворимые материалы имитирующие субстрат или являющиеся настоящими субстрата-тами, например крахмал (для амилаз — ферментов, участвующих в метаболизме гликогена), целлюлоза (для целлюлаз) и. фосфоцеллюлоза (см. выше), во всех остальных случаях аффинные адсорбенты необходимо синтезировать, ковалентно соединяя лиганд с подходящим носителем. При выборе носителя руководствуются теми же соображениями, что и при использовании его в качестве ионообменника — а именно носитель должен быть пористым гидрофильным полимером, который можно производить в виде частиц нужного размера, что обеспечивает свободный доступ макромолекул к соединенному с носителем лиганду и адекватный поток буфера в наполненной этим носителем колонке. При работе с глобулярными белками очень широко используются сферические гранулы агарозы, имеющие предел исключения, равный примерно 10 дальтон однако применяются и другие адсорбенты, которые в ряде случаев могут обладать теми или иными преимуществами. В настоящее время все большее распространение получают поперечно-сшитые гранулы агарозы, так как они не разрушаются и сохраняют свои размеры как под давлением, так и при смене буфера или растворителя. Обычно применяются сефароза-4В и сефароза L6B (Pharma ia), а также агарозы фирмы Bio-Rad. Здесь мы только кратко коснемся методов присоединения лиганда к матрице более полно этот вопрос освещен в последних публикациях, посвященных исключительно технике аффинной адсорбции [71—73]. Ниже перечислены основные требования к аффин-ной адсорбции. [c.147]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология