Иммуносорбция

Помимо ферментов, методом А, х. можно выделять также токсины, рецепторы, ингибиторы, транспортные белки и др. биологически активные в-ва. Высокой избирательностью отличается т.наз. иммуносорбция, при к-рой в кач-ве лиганда используют антитела, обладающие специфичностью к выделяемым белкам особенно эффективны моноклональные антитела. [c.221]

Возможность сорбции на ионообменных материалах различных биологически активных веществ с сохранением их биологического действия — новая область применения ионитов (см. раздел X. 4). Химизм взаимодействия органического вещества с ионитом может быть различным (ионный обмен, комплексообразование с противоионом или с функциональными группами полимерного каркаса, молекулярная сорбция), но в конечном итоге должен обеспечивать необходимую прочность связи. Иммобилизованные ферменты можно применять для проведения сложных каталитических реакций, пропуская раствор, биологическую жидкость, кровь через колонку с сорбентом без введения вещества-катализатора в реакционную среду. Показана перспективность применения иммобилизованных антител для воздействия на антигены (соответственно — иммобилизованных антигенов для специфического связывания антител) при непосредственном взаимодействии с кровью (иммуносорбция) ] 625, с. 136]. [c.390]

Помимо технических существуют сложности и другого рода. Как уже отмечалось в предыдущем разделе, использование калибровочной зависимости правомерно лишь в тех случаях, когда соединения в стандарте и образце идентичны по способности к связыванию. Выделение же чистых антител иммуносорбцией, проводимое чаще всего при экстремальных значениях pH или ионной силы, может приводить к изменению их константы связывания с антигеном. Таким образом основное условие применения калибровочной зависимости может нарушаться. [c.261]

При использовании аффинной хроматографии для выделения антигена из раствора используют антитела, иммобилизованные на нерастворимом носителе. При этом ключевым параметром иммуносорбции становится аффинность моновалентного взаимодействия [17]. Благодаря высокой концентрации МКА, присоединенных к гелю, связывание антигена, как правило, происходит достаточно быстро, и лишь в исключительных случаях кинетические параметры иммуносорбции требуют скорости потока меньшей, чем обычно используемая — один объем колонки в час. Выявление МКА обычно основано на поливалентном связывании с антигеном (см. рнс. 5.1), в котором участвуют как низко-, так и высокоаффинные антитела. Однако для аффинной хроматографии требуются антитела, обеспечивающие моновалентное связывание. Поэтому среди имеющихся МКА необходимо провести дополнительный отбор препаратов, обладающих нужной аффинностью. Это можно сделать, например, по способности МКА вызывать иммунопреципитацию антигена или по торможению растворимым (одновалентным) антигеном связывания с поливалентным антигеном, иммобилизованным на поверхности клеток или пластиковых панелей [17]. На рис. 5.2 схематично изображены взаимодействия, возможные при реакции торможения. Очевидно, торможение происходит лишь в том случае, если время диссоциации 50% моновалентных связей примерно равно или превышает время проведения самого анализа. Антитела, у которых 1./, составляет более 10 мин. [c.171]

Для иммуносорбции антигена можно не пропускать экстракт через колонку, а смешать большой его объем с МКА-сефарозой L-4B и инкубировать, перемешивая, в течение ночи при 4°С. Затем гель отделяют от супернатанта на фильтре из микропористого стекла и помещают в колонку для отмывания и элюирования антигена. Основное преимущество данного метода состоит в том, что он позволяет очень быстро выделить антиген из большого объема экстракта — чтобы пропустить такой объем через колонку, требуется гораздо больше времени. [c.177]

Выделение антител методом иммуносорбции. Специфичность сыворотки проверяется в реакциях с используемым для иммунизации препаратом антигена и с набором близких ему по структуре химических соединений. В случае недостаточнр очищенного антигена возможны неспецифические реакции, обусловленные наличи- [c.154]

В отличие от В-лимфоцитов не все субпопуляции Т-лимфоцитов способны связывать водорастворимые антигены. Этими свойствами не обладают Т-хелперы и Т-кпл-леры. Рецепторы этих клеток распознают антигенную детерминанту в сочетании с детерминантами антигенов основного комплекса гистосовместимости, например макрофагов, процессировавших антиген (см. гл. 10). Напротив, Т-супрессоры, очевидно, имеют достаточно большое и поэтому убедитечьно регистрируемое сродство к растворимым антигенам и гаптенам. Сказанное выше объясняет причины значительных трудностей в химическом изучении структуры антигенсвязывающих рецепторов Т-лимфоцитов. Все же благодаря применению методов аффинной хроматографии (иммуносорбция) клеток на твердофазном сорбенте, содержащем известные гаптены, [c.200]

Продуцируемые Т-супрессорами факторы неоднородны и по структуре, и по функции. Так, очищенные с помощью иммуносорбции факторы, взаимодействующие с азофеииларсаниловой кислотой и подавляющие иммунный ответ на эту детерминанту, можно разделить на два основных типа. Один из них рестриктирован в отношении генов основного комплекса гистосовместимости (активен при совпадении клеток по 1-району), другой действует в обход барьера гистосовместимости. Наконец, есть супрессорный фактор, который распознает не антигенную детерминанту, а идиотипическую детерминанту антигенсвязывающпх рецепторов В-клеток (возможно, и Т-хелперов). [c.221]

В период становления техники иммуносорбции (конец 50-х годов) внимание специалистов привлек амино-полистирол — коммерческий препарат низкой стоимости, который без особых затрат и потери рабочего времени мог быть использован в качестве носителя для фиксации белковых антигенов. В самом деле, аминогруппы амино-полистирола можно диазотировать нитритом натрия в разбавленной соляной кислоте. Затем с помощью реакции азосочетания в слабощелочной среде к полихмеру можно ковалентно присоединить любые белки, содержащие тирозин. Однако полученные таким способом иммуносорбенты связывали неспецифически значительные количества сывороточных иммуноглобулинов, видимо, за счет гидрофобных взаимодействий. От этого полимера как носителя пришлось отказаться. [c.244]

Часто радиоиммунный анализ основан 11а принципе конкуренции меченого антигена с немеченым. Например, требуется установить, содержится ли в изучаемом препарате данный антиген Существует тест-система, состоящая из такого же антигена, меченного радиоактивным г одом, и антител к нему. Исследуемый препарат инкубируют первоначально с антителом, а затем добавляют меченый тест-антиген. Затем иммунный комплекс осаждают либо сульфатом аммония, либо антииммуноглобу-линовой сывороткой. Если радиоактивность в опытной пробе ниже, чем в контрольной (где содержатся только компоненты тест-системы), значит п изучаемом образце содержится антиген, сходный или идентичный радиоме-ченому антигену тест-системы. Тот же метод может быть построен на принципах иммуносорбции с использованием иммобилизованных антител. При этом отпадает необходимость осаждения иммунного комплекса. Методы, основанные на принципе конкуренции, нетрудно выполнить на количественной основе. Именно таким способом могут определяться различные гормоны, причем в количе- [c.261]

Специфическую антисыворотку можно добавить прямо к лизату (Brown et al., 1974). Можно также обработать лизат иммуносорбентом (например, антисывороткой, конъюгированной с сефарозой), колоночным или бесколоночным (Ballou et al., 1976). способом. Невыгодная сторона применения иммуносорбента (по сравнению с простой иммунопреципитацией) — то, что здесь требуется большее количество антисыворотки, но есть и важное преимущество элюат почти не содержит балластных белков. Кроме того, иммуносорбция происходит очень быстро, и это уменьшает опасность протеолиза в процессе очистки. Однако в наших опытах выход антигена был выше при специфической иммунопреципитации, чем при использовании иммуносорбента. Еще один крупный недостаток иммуносорбции — необходимость концентрировать элюат. [c.189]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология