Иммуносорбенты

Для иллюстрации изложенных в предыдущем разделе обш их соображений и возможностей использования различных аффинных сорбентов рассмотрим определенное число примеров, отобранных из периодической научной литературы последних трех лет. Большая их часть относится к очистке ферментов клеточного метаболизма (и отдельно — белков, регулирующ,их активность нуклеиновых кислот). Далее будут приведены примеры аффинного фракционирования и очистки самих нуклеиновых кислот, в том числе на иммуносорбентах. Основное внимание уделим более простому и универсальному методу — неспецифической элюции, однако био-снецифическая аффинная элюция белков тоже будет представлена несколькими типичными примерами. Рассмотрение начнем с использования сорбентов с индивидуальной специфичностью, ограничившись здесь тремя примерами, поскольку нет смысла пытаться сколько-нибудь полно иллюстрировать бесчисленное разнообразие возможных сорбентов этого типа. Аффинная хроматография белков клеточного метаболизма на сорбентах с групповой специфичностью будет иллюстрирована подробнее, а затем последуют два примера использования ковалентной хроматографии. [c.412]

Гетерогенность участков связывания в антителах приводит к набору констант диссоциации для комбинаций антиген — антитело. При иммобилизации антигена на нерастворимом носителе образуется специфический иммуносорбент, который должен обладать следующими свойствами [c.114]

ПОЛУЧЕНИЕ ИММУНОСОРБЕНТОВ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДЛЯ ОЧИСТКИ АНТИТЕЛ [c.304]

Успехи в развитии И. позволили создать в 1975 принципиально новую биотехнологию произ-ва высокооднородных в хим и иммунологич. отношениях антител (С. Мильщтейн, Г. Келер), названных моноклональными. Углубленное изучение строения антигенов послужило основой для создания синтетич. аналогов антигенных детерминант и их использования для разработки биотехнологии синтетич. вакцин. Применение моноклональных антител и синтетич. антигенов позволяет создавать эффективные методы иммунодиагностики, напр, таких массовых инфекц. заболеваний, как СПИД Широкое применение получили моноклональные антитела (в виде т наз. иммуносорбентов) для извлечения [c.218]

Иммуносорбенты для очистки крови от ядов и токсинов [c.351]

Углеродные адсорбенты, полученные на основе продуктов полукоксования асфальтитов, оказались эффективными иммуносорбентами [198]. Они имеют наиболее высокое содержание мезопор и необходимое количество транспортных пор, что дает возможность удерживать на их поверхности до 50—80 % белка, т. е. они являются наиболее перспективными носителями иммунных сывороток (табл. 122). Адсорбенты, полученные из сополимеров асфаль- [c.353]

В медицине адсорбенты применяют с нанесенным на них кофеин-бензоатом натрия для извлечения из крови токсина — билирубина. Не менее важной задачей медицины является удаление из организма токсинов белковой природы. Введение лечебных сывороток непосредственно в организм человека часто осложнено аллергическими реакциями, поэтому иммунные белки (чаще всего глобулины) наносят на адсорбенты и через полученный иммуносорбент пропускают кровь. При этом важно, чтобы глобулин не только эффективно сорбировался адсорбентом, но и удерживался на нем. [c.601]

Иммобилизованные ферменты могут быть использованы в качестве иммуносорбентов для выделения из антисыворотки специфических антител на эти ферменты. Эффективность адсорбции антител, количество адсорбированных антител и условия их элюции зависят от свойств иммуносорбента от количества связанного с матрицей белка-антигена, прочности связи антиген—носитель, конформации антигена и числа вовлеченных в ковалентное связывание субъединиц антигенов-олигомеров. [c.304]

ОЧИСТКА АНТИГЕНОВ НА ИММУНОСОРБЕНТЕ [c.325]

Очистка антигена. Цитозольную фракцию из мозга свиньи (с. 379) пропускают через колонку с иммуносорбентом (1x2 см) в фосфатном буфере (pH 7,4) и колонку промывают тем же буфером. Элюцию проводят 2 М глициновым буфером (pH 2,8), фракции нейтрализуют 2 М трис-НС1 буфером, pH 8,6 Определяют концентрацию белка, цАМФ-связывающую активность (с. 331) она не должна быть ниже 12 нмоль/мг. Проверяют чистоту полученного препарата регуляторной субъединицы (м. м.=56 ООО Да) методом электрофореза (с. 119). Таким же способом, имея моноклональные или поликлональные антитела к соответствующим антигенам, можно получить гомогенные препараты этих антигенов. [c.325]

И. растворение интерферона, пропускание раствора через колонку с иммуносорбентом (пришитыми моноклональными антителами, рис. 159). [c.560]

Использование белков-антигенов в качестве лигандов для очистки специфических антител на иммуносорбентах было описано в предыдущей книге этой серии [Остерман, 1983]. Там же была рассмотрена возможность связывания любых антител на матрице, несущей белок А из Staphylo o us aureus. Обе эти системы с полным правол можно включить в перечень аффинных хроматографических систем. Естественно, что иммуносорбенты используются и в обратном варианте, когда с помощью лигандов-антител производится очистка антигенов белковой природы пли гаптенов. [c.362]

То, что речь может идти именно о порядках величин, видно нз следующего сопоставления (Turkova, 1978]. Для взаимодействия фермента с субстратом в большинстве случаев s 10 М. Для пары антиген — антитело на иммуносорбенте вариации могут быть. [c.400]

Хилл [17] осуществил элюирование антител с иммуносорбентов с помощью смесей диоксана со слабыми органическими кислотами. Использование сшитой агарозы для приготовления иммобилизованного группового вещества крови А позволило Кристиансену [23] применить для элюирования хаотропные ионы, а именно роданид, трихлорацетат и трифторацетат. Эффективность хаотроп- [c.271]

Пример 4. Очистка некоторых мембранных белков на иммуносорбенте [S hneider et al., 1982]. [c.415]

Многочисленные примеры из обширной области использования иммуносорбептов обоих типов (с иммобилизованными антптеладпт и антигенами) были приведены в предыдуш ей книге данной серии [Остерман, 1983], поэтому мы ограничимся лишь тремя примерами, относящимися к рассматриваемой проблеме аффинной очисткп нуклеиновых кислот, С помощью иммуносорбентов здесь удается решить довольно своеобразные задачи. [c.449]

Иммуносорбенты на основе иммобилизованной глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы из дрожжей получают при степени активации сефарозы 150 мг Br N на 1 г геля. [c.298]

Цель задачи — исследовать эффективность очистки антител из антисыворотки на иммуносорбентах, полученных при иммобилизации глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы на препаратах сефарозы, активированных при разной концентрации Br N. [c.304]

Препараты сефарозы с глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназой, иммобилизованной при разной степени активации, помещают в колонки (размер 0,5x3 см) и уравновешивают 0,15 М раствором Na I. Затем при комнатной температуре через колонки пропускают антисыворотку до полного насыщения иммуносорбента антителами (т. е. до прекращения адсорбции антител на сорбенте при пропускании дополнительных порций антисыворотки). Иммуносорбент отмывают от балластных белков 0,15 М раствором Na l до исчезновения поглощения при длине волны 280 нм в элюате. [c.304]

Приготовление иммуносорбента. Br N-активированную сефарозу (I г) обрабатывают, как обычно (с. 297). Полученный гель (3,5 мл) быстро промывают бикарбонатным буфером (pH 8,3) и вносят в раствор антител (20 мг антител в 10 мл бикарбонатного буфера). Инкубируют 2 ч при комнатной температуре, осторожно перемешивая механической мешалкой. Гель промывают в 100 мл того же буфера и переносят для блокирования оставшихся активных групп матрицы в 20 мл глицинового буфера 0,2 М, pH 8. Инкубируют 2 ч при комнатной температуре, постоянно осторожно перемешивая механической мешалкой. На воронке гель отмывают от несвязавшихся иммуноглобулинов и глицина бикарбонатным буфером (pH 8,3), затем ацетатным буфером, pH 4. Цикл повторяют, затем отмывают фосфатным буфером и хранят в нем при 4 С. [c.325]

Выделение чистых И. проводится с помощью ионообменных смол с послед, гель-фильтрацией. Для мн. целей используют препараты миеломных И., особенно минорных классов. Антитела выделяют с помощью иммуносорбентов - фиксированных на нерастворимых носителях (напр, целлюлозе) антигенов. Обнаружение и количеств, определение И. разных классов проводят иммунологич. методами с помощью соответствующих антисывороток. Для определения кол-ва антител используют методы преципитации (иммунная р-ция осаждения антигена антителом), агглютинации (взаимод. антитела с двумя клетками), нейтрализации бактерий и вирусов и др. Широкое распространение получают радиоиммунные и ферментно-иммунные методы, обладающие исключительно высокой чувствительностью и позволяющие определять очень малые кол-ва антител (или антигенов) в смесях с др. в-вами. [c.217]

Для селективного выделения пептидов можно использовать иммуносорбенты, представляющие собой антитела ковалентно присоединенные к нерастворимому полимеру-иосителю. Среди последних нашли распространение носители на основе производных бром-ацетилцеллюлозы и гелей агарозы с ковалентно присоединенными антителами к 2,4-динитрофенолу, Такие носители применяются для выделения функционально важных пептидных фрагментов, содержащих реакционноспособные аминокислотные остатки после их селективного динитрофенилирования. Разработаны методики присоединения 2,4-дннитрофенильной группы к остаткам цистеина, метионина лизина и триптофана. [c.56]

Новые возможности для специфичного выделения отдельных фрагментов белка открылись а связи с разработкой техники моноклональных антител (рис. 15). Иммуносорбенты на основе моноклональных антител к различным участкам белковой молекулы могут быть использованы для селектианого выделения пептидных фрагментов, несущих антигенные детерминанты этих антител. Поскольку в основном антигенные детерминанты находятся во фрагментах полипептидной цепи, располагающихся на поверхности глобулы, метод применяется также для изучения топографии белков. [c.56]

Развитая мезопористая структура образца с 60,5 % обгара дает возможность использовать его в качестве гемосорбента и иммуносорбента (табл. 10.81). [c.601]

Пептиды из нитрованного лизоцима, содержащие остатки нитротирозина, выделяли на сефарозе (Sepharose) с иммобилизованными антителами [45] (рис. 34.16). Антитела получали иммунизацией кроликов и коз комплексом нитротирозин—белок. Антитела выделяли из сыворотки методом аффинной хроматографии на сефарозе с фиксированным нитро-у-глобулином [46]. После десорбции 0,1 М уксусной кислотой антитела конденсировали с сефарозой, получая, таким образом, иммуносорбент. Последний использовали для выделения в одну стадию пептидов с остатком нитротирозина. [c.415]

В основе принципа аффинной хроматографии лежит отличительная особенность биологически активных веществ образовывать стабильные, специфические и обратимые комплексы. Если иммобилизовать один из компонентов комплекса, то получится специфический сорбент для второго его компонента, при этом, разумеется, предполагается, что соблюдаются все условия, необ.ходимые для образования этого комплекса. Связывающие участки иммобилизованных веществ должны сохранять хорошую стерическую доступность для второго участника комплекса даже после связывания с нерастворимым носителем и не должны деформироваться. Примерами первых специфических сорбентов, приготовленных путем ковалентного связывания с нерастворимым носителем, были иммобилизованные антигены (Кемпбелл и др. [5]) . Методы, созданные для присоединения антигенов и антител к нерастворимым носителям, были сразу же применены для получения иммобилизованных ферментов. В то же время ранее предложенный азидный способ привязки ферментов к целлюлозе [25] стал использоваться для приготовления иммуносорбентов. Параллельное развитие обоих направлений, основанных на использовании связывания биологически активных веществ с нерастворимыми носителями, наглядно демонстрируют названия первых обзорных статей Реакционноспособные полимеры и их использование для приготовления смол с антителами и ферментами (Манеке [23]), Водонерастворимые производные ферментов, антигенов и антител (Сильман и Качальский [39]) и Химия и использование производных целлюлозы для изучения биологических систем (Великий и Витол [47]). Оба направления продолжали развиваться параллельно и после открытия других более эффективных носителей и разработки методов связывания, позволяющих сохранять свойства иммобилизуемых веществ в растворе. [c.11]

Биологическая химия (2002) -- [ c.248 ]

Биоорганическая химия (1987) -- [ c.55 , c.56 , c.58 ]

Хроматографические материалы (1978) -- [ c.119 , c.125 ]

Аффинная хроматография (1980) -- [ c.114 , c.115 ]

Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам Часть 2 (1982) -- [ c.33 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология