УДФ-галактоза ферментативные реакции

Используя предыдущие соображения, можно теперь легко объяснить ферментативный катализ соединение субстрата с активным центром увеличивает частоту возникновения редких переходных состояний. С этой точки зрения можно считать, что активный центр р-галактозидазы имеет предпочтительное сродство к молекулам лактозы, находящимся в переходном состоянии. Следовательно, р-галактозидаза лолжна выбирать из раствора редко встречающиеся молекулы лактозы, находящиеся в гидролитическом переходном состоянии, и держать их в этой реакционноспособной форме в течение гораздо большего времени, чем они могут существовать в этом состоянии в свободном растворе. Теперь проанализируем, что означает число оборотов, равное для Р-галактозидазы 4000 молекул лактозы на 1 молекулу фермента за 1 с. Это число означает, что если молекула лактозы в переходном состоянии уже выбрана активным центром фермента, то в среднем пройдет 1/4000 с до того, как эта молекула будет гидролизована на галактозу и глюкозу. Переходное состояние фигурирует также и в обратной реакции, которая заключается в образовании лактозы из глюкозы и галактозы. Поэтому избирательная стабилизация ферментом этого переходного состояния ускоряет также и обратную реакцию. В результате, как уже говорилось, присутствие фермента не влияет на состояние равновесия реакции гидролиза. [c.107]

Сочетание сенсора Кларка с ферментным слоем обсуждается в разд. 7.8.3 на примере определения глюкозы с глюкозооксцдазой. Эту схему можно перенести на другие окислительные ферментативные реакции, например, определения галактозы с галактозооксвдазой или мочевой кислоты с помощью уриказы. [c.504]

Основные научные работы — в области биохимии углеводов. При изучении метаболизма жиров впервые получил бесклеточный препарат, способный окислять жирные кислоты in vitro. Изучал механизм артериальной гипертонии почечного происхождения. Доказал существование гуморального фактора, повышающего кровяное давление. Открыл (1951) первый сахарный нуклеотид — уридинди-фосфатглюкозу. Изучил его функции в превращениях сахаров в биосинтезе углеводов. Доказал, что для превращения галактозы в глюкозу необходима предварительная чпи-меризация у четвертого углеродного атома выделил особый фермент, вызывающий это превращение. Открыл (1950-е — 1960-е) несколько десятков других нуклео-тиддифосфатсахаров (НДФ-саха-ров), относящихся к пуриновым и пиримидиновым производным. Нашел основной тип ферментативных реакций, ведущих к образованию НДФ-сахаров. Благодаря этим открытиям объяснил механизм биосинтеза многих углеводов, в частности гликогена (1959) и крахмала (1960). [c.292]

У. к. играют важную роль в обмене углеводов, являясь коферментами многих важнейших реакций в метаболизме этого класса соединений, в частности в изомеризации галактозы в глюкозу (см. Изомеразы) и в окислении глюкозы до глюкуроновой к-ты, а также в биосрштезе ди-, олиго- и полисахаридов, где У. к. являются донорами гликозильных остатков. Так, наир., биосинтез лактозы в организме осуществляется путем ферментативного переноса остатка галактозы от УДФ-галактозы на глюкозо-1-фосфат. Аналогичную роль УДФ-сахара играют в биосинтезе сахарозы, [c.181]

Роль УДФГ в ферментативном превраш,ении галактозы в глюкозу заключается в анионном обмене с галактозо-1-фосфатом с образованием уридиндифосфогалактозы [120] и последующей инверсией при Q-атоме гексозы через промежуточное 4-кетопроизводное [121—123]. Несмотря на то что в этой окислительно-восстановительной реакции участвует связанный с белком никотинамидадениндинуклеотид, попытки уловить восстановленную форму нико-тинамидного кофермента или ввести тритий в гексозу при помощи НАД (или его восстановленной формы), меченного тритием в пара-положении, были безуспешными [124, 125]. [c.202]

Нейтральные гликолипиды, биосинтез — ферментативный процесс образования производных глицерина, начинающийся с переноса гликозильного остатка от УДФ-производного (например галактозила от УДФ-галактозы). Дигалактозилглицериды образуются в реакции переноса галактозила от УДФ-галактозы на моногалактозил-диглицерид. [c.241]

ЭТОГО накопления продуктов гидролиза лактозы больше не происходит. Объясняется это следующей причиной. На данной стадии реакции в растворе образуется настолько высокая концентрация продуктов гидролиза (глюкозы и галактозы), что их соединение с образованием лактозы протекает точно с такой же скоростью, с какой происходит гидролиз 0,001 М оставшейся в растворе лактозы. Иными словами, реакция достигает равновесного состояния. Наиболее характерная черта всех видов катализа, в том числе и ферментативного катализа, состоит в том, что присутствие катализатора может влиять лишь на скорость, с которой реакция достигает равновесия, но никогда не влияет на само состоиние равновесия. Поэтому добавление к раствору лактозы Р-галактозидазы приводит к тому, что гидролиз достигает равновесия не за годы, как при спонтанной реакции, а за минуты. Однако остаточный уровень лактозы в растворе после достижения равновесия при каталитической реакции в точности равен тому уровню, который устанавливается в состоянии равновесия при спонтанной реакции. Это обусловлено тем, что фермент во столько же раз ускоряет гидролитическое расщепление лактозы на глюкозу и галактозу, во сколько раз он ускоряет обратную реакцию образования лактозы из продуктов реакции при их высоких концентрациях. Таким образом, ферменты вовсе не совершают химических чудес, которые без них были бы невозможны. Они просто увеличивают скорость химических реакций, которые происходят и спонтанно, но которые в отсутствие фермента не достигли бы равновесия и за время нашей жизни. [c.106]

Методика иммуноферментного анализа. Смешивают в стеклянных пробирках (16X100 мм) по 20 мкл стандартных растворов или образцов плазмы с 30 мкл буфера А. Осторожно перемешав, прогревают растворы в кипящей водяной бане 10 мин. После охлаждения добавляют 0,4 мл буфера Б и 0,1 мл раствора конъюгата. Растворы перемешивают и добавляют 0,1 мл антисыворотки против кортизола в разведении 1 500 (конечное разведение 1 3000) и инкубируют при комнатной температуре в течение 60 мин. После добавления 100 мкл нормальной сыворотки кролика, разведенной в 40 раз, приливают 100 мкл раствора козьих антител против иммуноглобулинов кролика. Смесь перемешивают на вортексе, инкубируют 2 ч при 4°С, затем центрифугируют 10 мин при 2000 g. Осадок дважды промывают буфером Б, Активность фермента в осадке определяют с использованием в качестве субстрата о-нитрофенил-p-D-галактоз и да. Время инкубации при измерении ферментативной активности 1 ч. Количество образовавшегося к концу реакции о-нитрофенола определяют спектрофотометрически при 420 нм. [c.268]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология