Электрофорез в нанесение образца

Нейтральные аминокислоты не разделяются ни в одном из этих буферных растворов, но их фракционирование можно осуществить при последующем электрофорезе в других условиях, а также с помощью хроматографии. Перенос фракции нейтральных аминокислот в другую систему очень удобно сделать путем пришивания (фиг. 19). Для полной идентификации аминокислот гидролизаты наносят на сухую фильтровальную бумагу. Чем меньше площадь, которую занимает нанесенный образец на бумаге, тем лучше будет [c.101]

Насыщенный буфером носитель, на который нанесен образец, обычно располагают горизонтально горизонтальный электрофорез) на плоской поверхности изолирующего материала, например плексигласа (рис. 4.1), При горизонтальном Электрофорезе разделение можно проводить на бумаге, ацетате целлюлозы, в гелевых пластинах и в тонком слое, хотя работа с тонкими слоями при более высоких напряжениях требует применения металлических охлаждающих пластин, как при высоковольтном электрофорезе (разд. 4.4.1), Иногда гели и тонкие слои прикрывают пластиной из изолирующего материала, чтобы предотвратить испарение. Для работы с низким напряжением имеется простое оборудование для вертикального электрофореза (рис, 4.2) можно использовать пластины крахмального геля, помещая их вертикально в специальные камеры. [c.120]

Наиболее простым способом гибридизации является проведение ее с образцом, нанесенным в виде пятна на некоторую подложку (дот-гибридизация, от англ. dot — пятно). Этот тип гибридизации фактически уже описывался на примере анализа на содержание гена энтеротоксина, Разрешающая сила метода повышается, если анализируемый образец предварительно подвергнуть гель-электрофорезу. В этом случае полезно перенести материал с геля на более удобный для проведения гибридизации материал, приведя гель в контакт с целлюлозным или нейлоновым фильтром. Добавление меченых зондов позволяет обнаружить полосы, несущие определяемые последовательности. Этот метод известен как гибридизация по ay зерну. [c.263]

Каждому варианту свойственны собственные преимущества и недостатки. Общие принципы и методика эксперимента электрофореза в ПААГ подробно рассмотрены в ряде исчерпывающих публикаций [3, 35, 73, 183]. В ступенчатой системе образцы предварительно концентрируются в формирующем геле, после чего входят в рабочий гель в виде узких зон. В непрерывной системе предварительное концентрирование исключено и при нанесении образца в большом объеме по завершении электрофореза образуются широкие зоны. Если образец наносить в небольшом объеме, результаты в обеих системах должны быть идентичны. Наблюдающиеся иногда различия в результатах, возможно, обусловлены частичной диссоциацией комплекса при электрофорезе в ступенчатой системе. [c.27]

Представляя для печати результаты, полученные при определении чистоты ферментного препарата с помощью гель-электрофореза, важно дать какую-то количественную оценку содержания всех присутствующих в нем примесей. Заявление, что образец дал одну полосу при электрофорезе , неубедительно, если количество нанесенного на гель белка было настолько мало, что получилась только одна слабо окрашенная зона. Желательно также представить какое-то подтверждение того, что окрашенная полоса — это действительно данный фермент, а не присутствующий в препарате другой белок, который в количественном отношении даже превосходит исследуемый фермент. В литературе часто встречаются примеры того, как совершенно ошибочно основная полоса, полученная при электрофорезе, без всяких доказательств приписывается очищенному ферменту, хотя на самом деле она относится к примеси. Если удельная активность выделенного препарата слишком низка, то количество данного фермента в нем может составлять всего лишь 1% общего содержания белка, и при гель-электрофорезе его вряд ли можно заметить. В этом случае могут помочь фотографии электрофореграмм, хотя на них обычно плохо воспроизводится картина распределения окраски по относительной интенсивности. Более надежные в этом смысле результаты дает сканирование окрашенного геля (рис. 9.7). При этом единственная оговорка, которую можно сделать, касается относительной интенсивности специфической окраски различных обнаруженных компонентов. Исходя из предположения, что все белки окрашиваются одинаково, можно произвести точное количественное определение всех компонентов, используя гель-сканирующее устройство. [c.329]

В зональном электрофорезе пятно или тонкий слой раствора, нанесенного на полутвердый или гелеобразный материал, помещают в электрическое поле, в результате чего молекулы перемещаются по или через материал носителя. Поскольку образец наносится в виде зоны, для полноты разделения приходится использовать небольшие количества вещества. В первую очередь функцией носителя является предотвращение механических воздействий и конвекции, которая происходит в результате как температурных изменений, так и высокой плотности концентрированных растворов макромолекул. Однако носитель иногда может адсорбировать молекулы различного типа или действовать в качестве молекулярного сита, приводя тем самым к хроматографическим эффектам (гл. 8), что может или помогать разделению или ухудшать его. Методы использования различных материалов в качестве носителей описаны в следующих разделах. [c.225]

Гель полимеризуется непосредственно в рабочей емкости. Обычно при полимеризации но верхнему краю геля формируются углубления для нанесения образцов. После электрофореза пластинку окрашивают либо прн добавлении красителя в верхний буфер, либо погружением геля в раствор красителя после удаления пластинки из рамки. Избыток красителя удаляют либо промыванием, либо электрофорезом. А — вид спереди Б — вид сбоку, / — буфер 2 — образцы 3 — гель 4 — образец 5 — пластмассовая рамка. [c.230]

Нанесение образца. Раствор с образцом обычно наносят микропипеткой в виде маленького пятна иЛи узкой полосы. Если отдельные компоненты смеси имеют противоположные заряды, они в ходе разделения будут двигаться к разным электродам, и образец в этом случае нужно наносить примерно посередине. Если же все компоненты будут двигаться в одном направлении, т. е. если все они заряжены либо положительно, либо отрицательно, образец нужно наносить как можно дальше от соответствующего электрода, у противоположного конца носителя, чтобы разделяемые компоненты проходили возможно большее расстояние. При горизонтальном электрофорезе пропитанные образцом полоски фильтровальной бумаги вводят в щель или ямку, вырезанные на поверхности геля. При вертикальном электрофорезе образец в 10%-ном растворе сахарозы наслаивают на поверхность вертикального столбика геля. Изредка образец включают в широкопористый гель, называемый гелем образца. [c.125]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология