Нейлоновые фильтры

Нитроцеллюлозный или нейлоновый фильтр [c.258]

Наиболее простым способом гибридизации является проведение ее с образцом, нанесенным в виде пятна на некоторую подложку (дот-гибридизация, от англ. dot — пятно). Этот тип гибридизации фактически уже описывался на примере анализа на содержание гена энтеротоксина, Разрешающая сила метода повышается, если анализируемый образец предварительно подвергнуть гель-электрофорезу. В этом случае полезно перенести материал с геля на более удобный для проведения гибридизации материал, приведя гель в контакт с целлюлозным или нейлоновым фильтром. Добавление меченых зондов позволяет обнаружить полосы, несущие определяемые последовательности. Этот метод известен как гибридизация по ay зерну. [c.263]

Данные по точности для ИСО 15167 получены при использовании только нейлоновых фильтров. [c.621]

Рис. 25.32. Некоторые этапы анализа ДНК при генетическом скрининге. В процессе Саузерн-блоттинга денатурированная (одноцепочечная) ДНК переносится из агарозного геля на нитроцеллюлозный или нейлоновый фильтр. В настоящее время бумажные полотенца обычно не употребляются вместо этого используют метод электро-блоттинга или вакуумного блоттинга.

Смесь шлама с добавками поступает в нижний штуцер кондиционного бачка 22 и тщательно перемешивается. Затем шлам самотеком по лоткам поступает на обезвоживание на гравитационный концентратор 23, где влажность шлама снижается с 99,4 до 95 % в результате фильтрации через нейлоновый фильтр под действием силы тяжести. Гравитационный концентратор представляет собой две вращающиеся цилиндрические камеры, соединенные бесконечным нейлоновым полотном. Скорость движения полотна 0,8 м/мин. В первой камере происходит собственно обезвоживание шлама фильтрацией, а во второй камере — формование лепешек ( пирога ) обезвоженного шлама. Для предотвращения забивки нейлона предусматривается промывка полотна ос- [c.107]

ДНК переносят на нитроцеллюлозный или нейлоновый фильтр [c.258]

Груз Бумажные полотенца Нитроцеллюлозный или нейлоновый фильтр Агарозный гель,-содержащий ДНК Губчатая прокладка [c.258]

ДНК в геле сначала переводят в одноцепочечное состояние (денатурируют) путем нагревания. Затем ее переносят на нитроцеллюлозный или нейлоновый фильтр с помощью блоттинга, при этом получается точная копия геля. Стопка бумажных полотенец действует как фитиль, который протягивает буфер через губку, гель и фильтр. При этом ДНК прочно прикрепляется к фильтру. [c.259]

Далее используют генный зонд (разд. 25.1.6). Это короткий одноцепочечный фрагмент ДНК, последовательность оснований которого комплементарна участку интересующего нас гена. Зонд можно получить в больщих количествах путем клонирования. В него вводят радиоактивную метку з Р, а затем добавляют его в раствор для гибридизации (комплементарного связывания) с ДНК на нитроцеллюлозном или нейлоновом фильтре. [c.259]

Первым этапом анализа ДНК является экстракция ДНК из любой ткани, содержащей ядерные клетки с последующей ее очисткой. Далее геномную ДНК анализируют с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) или подвергают расщеплению ферментами рестрикции — рестриктаза-ми, распознающими специфические последовательности нуклеотидов и гидролизующими ДНК на ряд фрагментов рестрикции . Последние могут быть разделены методом электрофореза или подвергнуты денатурации нагреванием до однонитевых фрагментов, которые затем переносят на нейлоновый фильтр или нитроцеллюлозную мембрану. Таким образом сохраняется пространственное расположение фрагментов ДНК относительно друг друга. Полученный материал анализируется с помощью ДНК-зонда, представляющего собой фрагмент одноцепочечной ДНК, как правило, помеченный радиоактивным изотопом Р и содержащий специфическую последовательность оснований, комплементарную участку ДНК, который необходимо обнаружить. В качестве зонда можно использовать как нативную ДНК, специфичную гену (геномные зонды), так и синтетическую ДНК, полученную на основе РНК гена (комплементарная ДНК). Если анализируемая последовательность присутствует во фрагментах рестрикции, то зонд гибридизуется с ними, что можно обнаружить с помощью авторадиографии. [c.528]

Фильтрование через слой батиста, сбор и промывка иа нейлоновом фильтре (40 мкм). [c.28]

В результате обработки ткани ферментными препаратами полу-ается смесь, содержащая протопласты, обломки тканей, разрушен-ые и целые клетки. Чтобы отделить протопласты от этих примесей, /спензию фильтруют через нейлоновый фильтр, а затем центрифуги-уют в мягких условиях. [c.169]

Перенос фрагментов ДНК из геля на нейлоновый фильтр [c.301]

Перенос ДНК с геля на нитроцеллюлозный или нейлоновый фильтр производится в буферном растворе. Непосредственно на поверхность геля кладут фильтр и стопку фильтровальной бумаги. Из-за капиллярного эффекта создаётся ток буфера, перпендикулярный плоскости геля. Вымываемая из геля ДНК задерживается фильтром и практически полностью оказывается на его поверхности. После переноса одноцепочечные нити фиксируют на фильтре. Расположение фрагментов на фильтре точно соответствует их расположению в геле. [c.264]

Анализ ДНК методом блот-гибридизации используется не только при скрининге кДНК и геномных библиотек, но и для анализа геномной ДНК. При помощи этого метода можно определить присутствие определенной последовательности ДНК в геноме (например, присутствие чужеродного гена в геноме трансгенных растений, копийность гена, анализировать изменения в нуклеотидной последовательности гена и т. д.). Анализ ДНК методом блот-гибридизации основан на идентификации определенных фрагментов ДНК путем их гибридизации со специфическими мечеными зондами. Он состоит из следующих этапов 1) рестрикция ДНК 2) перенос рестрицированных фрагментов из геля на нейлоновый фильтр и их иммобилизация 3) гибридизация с меченым зондом. [c.47]

Фиксируют ДНК на фильтре а) прожариванием при 80 °С в вакууме (нитроцеллюлозный фильтр) либо б) УФ-облучением в течение 3 — 5 минут (нейлоновый фильтр). [c.97]

Аппараты Сокс.гета емкостью 500, 1500, 5000 мл, с нейлоновыми фильтрами соответствуют,их размеров, натянутыми на проволочный обруч. [c.284]

После экстракции ДНК подвергают иммобилизации на нитро-целлюлозном или нейлоновом фильтре, расплавлению и гибридизации с известными последовательностями генов, ответственными за синтез тех или иных специфических ферментов. Так, наличие в пробе тотальной ДНК генов, гибридизуемых с геном, кодирующим нитрогеназу, указывает на присутствие в анализируемом сообществе азотфиксаторов, генов метанмонооксигеназы — метанотрофов, генов РуБисКО — автотрофных микроорганизмов, фиксирующих углекислоту через цикл Кальвина. Расшифровано уже несколько десятков генов, кодирующих ключевые реакции тех или иных процессов, и, применяя метод гибридизации, можно делать выводы о наличии определенных микроорганизмов в анализируемой пробе. [c.256]

На чашку Петри с бактериальными колониями накладывают лист специального нейлонового фильтра на него переходит часть клеток бактерий каждой колонии, тогда как другая часть остается на чашке. В результате получается реплика на чашке и на фильтре колонии распределены одинаково. ДНК прочно связывается (иммобилизуется) с нейлоновым фильтром. Для лизиса бактерий и денатурации ДНК клонов нейлоновый фильтр обрабатывают щелочью. Затем фильтр помещают в раствор, содержащий меченый зонд (кДНК или мРНК, или синтетический олигонуклеотид). При гибридизации зонд связывается с теми колониями, которые содержат последовательности, комплементарные меченому зонду фильтр отмывают от несвязавшихся молекул зонда и проводят радиоав- [c.46]

Высейте на селективную среду или на нитроцеллюлозный или нейлоновый фильтр, помещенный на чашку с L-средой на 1 ч, до переноса на селективные чаип И >. Увеличьте все количественные параметры в 10 раз для чашек (22X22 см). [c.88]

Для выявления конкретных последовательностей нуклеотидов в клонотеках генов рекомбинантные бактерии или фаги рас-севают на чашках Петри и образовавшиеся колонии или бляшки переносят на нитроцеллюлозные или нейлоновые фильтры [235, 236]. Для этого стерильные фильтры накладывают на поверхность чашек, в результате чего часть бактериальных клеток или фаговых частиц прочно связывается с поверхностью фильтров. Расположение их на фильтрах и поверхности чашек Петри точно совпадает. Бактериальные клетки или фаговые частицы, сорбированные на фильтрах, лизируют щелочью, что сопровождается одновременной денатурацией заключенной в них ДНК. Освободившуюся ДНК фиксируют на фильтрах и гибридизуют с меченым олигонуклеотидным зондом, последовательность нуклеотидов которого точно соответствует последовательности нуклеотидов искомой ДНК. В результате гибридизации происходит специфическое прочное связывание зонда с идентичными и/или гомологичными последовательностями нуклеотидов в ДНК, содержащейся в отдельных бактериальных колониях или бляшках. [c.163]

Предложенный в 1984 г. метод геномного секвенирования был основан на выявлении определенных последовательностей ДНК путем их гибридизации с меченным зондом [ hur h, Gilbert, 1984]. Для осуществления такой гибридизации была необходима процедура переноса фрагментов ДНК из полиакриламидного секвенирующего геля на нейлоновый фильтр. Перенос даже небольших фрагментов ДНК из полиакриламидного геля на мембранные фильтры за счет капиллярных сил малоэффективен и поэтому в данной работе, учитывая большие размеры геля, была сконструирована специальная камера для электропереноса. [c.186]

Ранее схожий метод мультиплексной геномной прогулки был применен для определения нуклеотидной последовательности неклони-рованного гена пируваткиназы Е. соИ [Ohara et al., 1989]. Суть такой прогулки , весьма напоминающей праймерную (описанную ниже в разделе 8.4), заключается в расщеплении тотальной ДНК несколькими подходящими рестрикционными эндонуклеазами, разделении полученных фрагментов в денатурирующем секвенирующем гель-электрофорезе, их переносе на нейлоновый фильтр и многочисленных гибридизациях с мечеными олигонуклеотидами (рис. 8.3). [c.239]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология