Электрофорез в полиакриламидном рибосомных РНК

Фракционирование рибосомных белков очень часто проводят также и методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии ДСН. Первое успешное применение этого метода описано Уорнером [1375]. Рибосомы, белки которых были помечены радиоактивными изотопами, растворяли в 0,1 М фосфатном буфере, содержавшем 0,5% ДСН и 0,5 М мочевину, и наносили на поверхность разделяющего геля. В состав этого геля входили 10%-ный акриламид и буфер, применявшийся для растворения рибосом. После электрофореза гели разрезали и по радиоактивности определяли положение белков. [c.311]

В качестве среды для электрофореза нуклеиновых кислот чаще всего используют полиакриламидный гель. Размер пор полиакриламидного геля, а следовательно, и его свойства как молекулярного сита варьируют в широком диапазоне, благодаря чему в этой среде можно разделять нуклеиновые кислоты различной молекулярной массы. Так, например, в гелях, содержащих 2—3% Т, разделяют рибосомные РНК (мол. масса 0,5-10 —2-10 ) в гелях с Т, составляющим около 10%, —транс- [c.370]

Разделение двух типов рибосомной РНК (16з и 23з) методами электрофореза в полиакриламидном геле и седиментации в градиенте плотности сахарозы. [c.233]

Полное аналитическое разрешение всех рибосомных белков достигается с помощью двумерного гель-электрофореза в денатурирующих условиях. Удобная система разделения была предложена Э. Кальт-шмидтом и Г. Виттманном они использовали 8%-ный полиакриламидный гель при pH 8,6 для электрофореза в первом направлении и 18%-ный гель при pH 4,6 во втором направлении. В этих условиях разделялись все белки 30S субчастицы и все белки 50S субчастицы Е. oli. Пример такого разделения белков обеих рибосомных частиц в слегка модифицированной системе дан на рис. 53 и 54. Первое направление электрофореза в рыхлом геле при нейтральном или слегка щелочном pH обеспечивает движение кислых и нейтральных белков влево, к аноду, в то время как основные белки мигрируют вправо, к катоду, разделяясь в основном по заряду. Второе направление электрофореза в плотно сшитом геле при кислом pH обеспечивает движение всех белков в одну сторону —к катоду (вниз), и в их разделение большой вклад вносит размер разделяемых компонентов (чем меньше, тем подвижнее). [c.91]

Не меньшей популярностью пользуется в настоящее время и метод электрофореза в полиакриламидном геле. Добавляя к раствору акриламида, налитому в стеклянные трубки, различные количества мономеров (например, метиленбисакриламид, этилендиакрилат), образующих в процессе полимеризации поперечные сшивки, можно получить гели с различной степенью связанности [137, 404]. Устойчивость к денатурирующим растворителям, например к 8 М раствору мочевины или 1 %-ному раствору додецилсульфата натрия, составляет еще одно важное преимущество этих гелей. При наложении разности потенциалов белки, пептиды, нуклеиновые кислоты и вирусы передвигаются в этих гелях на характерные расстояния, которые зависят главным образом от их молекулярного веса (или веса частицы), а также от степени связанности сшивок геля. Разделившиеся вещества образуют характерные полосы, которые можно выявить либо с помощью методов окрашивания или локального осаждения, либо (в случае разделения радиоактивных веществ) с помощью метода радиоавтографии (см. гл. XI, разд. Б). Разрешающая способность электрофореза в полиакриламидном геле такова, что с помощью этого метода можно обнаружить и идентифицировать приблизительно 37 видов рибосомных белков [508]. То, что разделение белка на многочисленные полосы происходит в силу действительного различия между белками, а не в результате каких-то артефактов, теперь уже не вызывает солшений. Однако известно, что разделяться на отдельные полосы могут не обязательно совершенно различные вещества, но и такие близкие между собой вещества, как, например, один и тот же белок, у которого часть молекул содержит одну лишнюю амидную (— СО — NH2 С00 ) группу, а другая часть — ацетильную (—NH+— NH — СОСН3) группу [136]. С помощью электрофореза в полиакриламидном геле [c.61]

В исходном методе Кальтшмидта и Уитмена [654] разделение рибосомных белков в первом направлении проводили при pH 9,6 или 8,6 в стеклянных трубках длиной 180 мм и диаметром 5 мм. Образец белка (1—4 мг) помещали в середину трубки, включая его в слой геля, образующегося путем фотополимеризации. В этих условиях одни рибосомные белки мигрировали к катоду, а другие — к аноду. Использованный на первом этапе 8%-ный полиакриламидный гель не обладал сколько-нибудь заметным свойством молекулярного сита. По окончании электрофореза примерно через 36 ч гели извлекали из стеклянных трубок и вымачивали в ацетатном буфере для стартового геля,, применяемом при электрофорезе во втором направлении. Этот [c.312]

Описаны методы, позволяющие разделять РНК в количестве от 5-10 ° до 1 10 г на пластинах геля размером 30X4X0,1 мм. Для разделения низкомолекулярных РНК был использован полиакриламидный гель [335], а для разделения рибосомных РНК—комбинированный полиакриламидно-агарозный гель [1099]. Разделенные зоны окрашивали акридиновым оранжевым или фотографировали в ультрафиолетовом микроскопе при 100-кратном общем увеличении. Метод обладает такой же высокой разрешающей способностью, как и обычный электрофорез нормального масштаба. [c.388]

Разделение белков рибосомной 50 S-субчастицы с помощью двумерного электрофореза в полиакриламидном геле. (Печатается с любезного разрешения д-ра harles antor.) [c.98]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология