Спектрофотометрия митохондрий

Выделяют митохондрии печени (с. 406). В кювету спектрофотометра наливают дистиллированную воду и устанавливают нуль прибора при 520 нм. В другой кювете составляют смесь, состоящую из растворов 2,5 мл 0,0012 М трис-НС1 (pH 7,2), 0,3 мл 0,05 М КС1, 0,02 мл [c.446]

В работе предлагается сравнить действие разобщителей на процессы окислительного фосфорилирования и активного транспорта Са + в митохондриях печени крысы. Так как протекание обеих эндергонических реакций сопряжено с поглощением (синтез АТФ) или освобождением (транспорт Са +) стехпометрических количеств ионов Н+, следует воспользоваться установкой для непрерывной регистрации pH стеклянным Н+-чувствительньш электродом (с. 474). Изменения трансмембранного потенциала прослеживают по распределению К+ (в присутствии валиномицина в бескалиевой среде — с. 442) с помощью К+-чувствительного электрода или по абсорбции проникающих синтетических катионов (например, сафранин, оксанол и др.) с помощью двухволновой спектрофотометрии. [c.469]

Изменения степени восстановленности всех компонентов дыхательной цепи определяют, применяя двухлучевой спектрофотометр другого типа (а split beam spe trophotometer). При этом через два образца пропускают два луча одной и той же длины волны. Допустим, что у одного образца компоненты дыхательной цепи окислены вследствие отсутствия субстрата. У другого образца в анаэробных условиях в присутствии субстрата компоненты дыхательной цепи находятся в восстановленном состоянии. Разница в оптической плотности двух образцов, определенная при нескольких длинах волн, позволяет получить разностный спектр. На фиг. 61 показано восстановление флавопротеида и цитохромов Ь, с, а и as при восстановлении митохондрий из клубней картофеля с ио.мощью НАД-Но в анаэробных условиях [17i. [c.222]

Для изучения набухания и сократительных свойств митохондрий использовали спектрофотометрический метод Клиленда ( leland, 1952). Метод основан на изменении светорассеивающих свойств суспензии при поглощении или выделении воды митохондриями. При поглощении воды органоидами оптическая плотность суспензии падает. Сокращение частиц, приводящее к выталкиванию воды, выражается в повышении оптической плотности раствора. Работу проводили на спектрофотометре СФ-4 при 520 ммк в 1-сантиметровых кюветах при ширине щели 0,025 мм. Осадок митохондрий из 4 г отрезков мезокотилей ресуспендировали в растворе 0,5 М сахарозы без ЭДТА из расчета [c.201]

Сконструированный Чансом двухволновой спектрофотометр позволяет легко наблюдать состояние окисления или восстановления данного переносчика в митохондриях [68]. Этот метод в сочетании с использованием специфических ингибиторов (некоторые из них указаны на рис. [c.398]

Чанс с сотрудниками провел спектрофотометрические наблюдения на интактных митохондриях и субмитохондриальных частицах, исследуя при этом как последовательность переносчиков, так и участки фосфорилирования. В этих экспериментах был использован двухволиовой спектрофотометр, который позволял регистрировать поглощение прн длине волны Й,та (максимум поглощения для данного соединения) относительно поглощения при другой длине волны ht- Основные длины волн, использованные в эксперименте, приведены в табл. 10-5. [c.405]

Количественный анализ. Флуориметрия широко применяется Б биохимических исследованиях благодаря своей высокой точности, чувствительности и воспроизводимости получаемых результатов. Это особенно важно при работе с малыми количествами вещества, когда спектрофотометрия не дает надежных результатов. В качестве примера можно привести количественное исследование витамина Bi в пищевых продуктах, НАД-Н в митохондриях и микроорганизмах при различных метаболических условиях, АТФ, хлорофилла и кортикостероидов. Использование внутренних стандартов, т. е. H3iiiepeHHe флуоресценции неизвестных количеств чистого вещества до и после добавления определенного количества стандартного образца, позволяет исследовать как самотушение, так и тушение флуоресценции примесями. [c.161]

Из секрета печеночных митохондрий были изолированы два УФ высокомолекулярный и низкомолекулярный. Разделение удалось произвести путем хроматографии секрета на колонке с се-фадексом-Г50 по принципу фильтрации через гель [24]. Регистрация разделяющихся фракций производилась на спектрофотометре СФ-4 по поглощению света в области 280 и 260 тмк. Высокомолекулярный фактор поглощает свет преимущественно при 280 тмк и вызывает ускорение гликолиза печеночной РФ только в среде, насыщенной коэнзимами. Низкомолекулярный фактор поглощает свет преимущественно при 260 тмк и по ряду свойств, по-видимому, является адениннуклеотидом. Он дает усиливающий эффект только в среде с дефицитом коэнзимов. [c.115]

Рис. 4.7. Сафранин как индикатор Дф в митохондриях (Акеппап, У1кз1гот, 1976). Митохондрии из клеток печени инкубировали в присутствии ротено-иа, блокирующего дыхание (разд. 5.6). А. Кривая показывает образование диффузионного потенциала величиной 124 мВ после добавления валиномицина. Концентрация К+ в среде составляла 0,96 мМ, а в матриксе принималась равной 120 мМ. Б. Образование Дф было вызвано добавлением субстрата дыхания— сукцината, а рассеивание — добавлением протонофора. В. Дтр был образован благодаря гидролизу АТР и снят после добавления ингибитора АТР-синтетазы — олигомицина (разд. 7.2). Среда инкубации содержала 10 мкМ сафранина. Измерения проводились на двухволновом спектрофотометре (разд. 5.2).

Э. Ракер и Б. Чанс взялись проверить гипотезу Грина. Оказалось, что обработка фрагментов митохондрий мочевиной приводит к исчезновению грибов . Чанс измерил (на особом спектрофотометре собственного изобретения) поглощение света мембранами, обработанными мочевиной, и обнаружил в них полный набор дыхательных ферментов, благо все они окрашенные белки с характерными спектральными максимумами. Значит, гипотеза Грина не проходит. [c.106]

Для фотосинтеза у С -растений необходимо, чтобы опреде-ленпые метаболш ы С4-ц.икла быстро переносились через оболочку хлоропластов и митохондрий. О механизме транспорта метаболитов, особенно в хлоропластах обкладки проводящих пучков и в митохондриях, мало что известно. Связь транспорта метаболитов с С4-ЦИКЛ0М была изучена в опытах с хлоропластами мезофилла С -растений. Для этого регистрировали иа спектрофотометре при 535 им осмотические изменения объема хлоропластов под влиянием субстрата н оценивали методом центрифугирования в силиконовом масле поглощение метаболитов хлоропластами или их отток в окрулсающую среду. [c.371]

Прямое спектрофотометрическое исследование кинетики окислительно-восстановительных переходов убихинона, проведенное han e с помощью дифференциального двулучевого спектрофотометра, подтвердило основные данные об относительно медленном восстановлении митохондриального убихинона [15]. В недавней работе han e, выполненной с применением метода быстрой остановки реакции, показано, что в то время, как период полувосстановления цитохромов С, l и флавинов в присутствии цианида составляет 70—100 миллисекунд, для убихинона этот период почти на порядок больше — 900 миллисекунд [16]. В этой работе также показано, что убихинон значительно лучше, чем НАДН, восстанавливается сукцинатом и сделан вывод, что он не находится на пути переноса электронов от НАДН. Кроме того, предполагается, что восстановление убихинона изолированным комплексом I (НАДН-Р-редуктаза) отличается по механизму от восстановления убихинона в митохондриях, так как в первом случае наиболее активен Qi, а во втором — Qio. Месторасположение убихинона в дыхательной цепи по han e [16] можно представить таким образом [c.134]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология