Гидролиз полинуклеотидов синтетических

Однако, несмотря на отмеченные здесь трудности, некоторые олигонуклеотиды и их мономеры все же были успешно разделены (см. литературу, приложение XV). Дело обстоит гораздо проще, когда речь идет о полимерах одного нуклеотида. При исследовании влияния длины цепи олигонуклеотидов на биосинтез белка потребовались олигонуклеотиды определенных размеров. Для этого синтетический полинуклеотид (применявшийся в качестве искусственной информационной РНК) частично гидролизовали ферментативным путем, а затем хроматографировали [81]. Например, из полиуридиловой кислоты на сефадексе 0-200 удалось получить фракцию со средней степенью полимеризации от 42 до 132, а на 0-75 —фракции со степенью полимеризации от 5,8 до 42. [c.223]

С помощью химического и ферментативного гидролиза было показано, что синтетические полинуклеотиды, как и РНК, состоят из нуклеозид-5 -монофосфатных единиц, связанных между собой 3, 5 -фосфодиэфирными связями (стр. 46). Анализ концевых групп показал, что на конце полипептидной цепи находится фосфатная группа, этерифицированная по С-5 концевого нуклеозида. При гидролизе щелочью, фосфодиэстеразой змеиного яда, фосфодиэстеразой из селезенки или панкреатической рибонуклеазой эти полимеры дают точно такие же продукты, как и РНК. Очоа и его сотрудники воспользовались перечисленными свойствами, чтобы выяснить природу межнуклеотидных связей, образуемых с помощью фермента. Они синтезировали (А, Г, У, Ц)-полимер из смеси нуклеотидов, содержавшей АДФ, меченный по фосфору, и затем гидролизовали его фосфодиэстеразой змеиного яда (фиг. 87). Из полученных после гидролиза четырех нуклеозид-5 -фосфатов меченым оказался только АМФ, и его удельная радиоактивность соответствовала удельной радиоактивности первоначально включенного АМФ. Следовательно, во время синтеза фосфоэфирпая связь АМФ не затрагивалась. Если же синтезированный полимер гидролизовали щелочью или фосфодиэстеразой селезенки, то метку включал каждый из четырех пуклеозид-З -монофосфатов. Значит, в ходе синтеза полинуклеотидфосфорилаза формирует связи А—ф—А, Ц—ф—А, У—ф—А и Г—ф—А. Аналогичные результаты были получены с Р -УДФ. [c.253]

Химические и биохимические свойства синтетических гомополимеров (и сополимеров) также находятся в полном соответствии с приписанной им структурой. В результате раскрытия концевого циклического фосфата при кислотном гидролизе в мягких условиях образуются олиго- и полинуклеотиды, содержащие концевой остаток фосфорной кислоты в положении 2 (или 3 ). При гидролизе кислотами в более жестких условиях получаются либо пурины, или пиримидиннуклеозид-2 - и пиримидиннуклеозид-З -фосфаты, [c.501]

Олигонуклеотиды можно разделять с помощью тонкослойной хроматографии или электрофореза в тонком слое или же используя оба этих метода (в разных направлениях). Оптимальные условия для разделения сложных смесей олигонуклеотидов в тонких слоях еще не разработаны. Нами установлено, что продукты частичного гидролиза синтетических полинуклеотидов и нуклеиновых кислот хорошо разделяются на тонких слоях анионообменников [32, 33]. По-видимому, весьма перспективен в этом отношении также электрофорез на тонких слоях ионообменников [34]. Недавно описан метод разделения (картирования) продуктов гидролиза РНК панкреатической рибонуклеазой (ЕС 2.7.7.16) и рибонуклеазой Т (ЕС 2.7.7.26) иа слоях немодифицированной це.плюлозы [35]. [c.46]

Превращения в спиральную конформацию приводят к ярко выраженному гипохромному эффекту также и в случае нуклеиновых кислот и полинуклеотидов. Сравнительно давно было показано [504], что оптическая плотность (с пиком при 259 м 1) дезоксирибонуклеиновой кислоты на 25—37% ниже оптической плотности сметанных нуклеотидов, полученных в результате каталитического щелочного гидролиза главной полимерной цепи. Однако причина этого изменения стала очевидной лишь после того, как была установлена структура двойной спирали молекулы ДНК. В этой структуре основные хромофоры располагаются параллельно друг другу под прямыми углами, и Тиноко [505] показал, что такое расположение должно привести к наблюдаемому гипохромному эффекту. Это явление наиболее удобно изучать на синтетических полинуклеотидах, цепи которых состоят из звеньев лишь одного типа. Фельсенфельд и Рич [364] обнаружили, что смешение растворов полиадениловой]и полиуриди-ловой кислот, приводящее, как известно, к образованию биспиральной структуры, сопровождается ярко выраженным понижением максимальной оптической плотности при 259 м 1. Таким образом, спектрофотометрическое титрование является удобным методом установления стехиометрии реакции (рис. 62). Позднее было показано [360], что изменения [c.175]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология