Фиксация клеток

На рис. I показан вид плазматической мембраны эритроцита сбоку. Эта фотография, на которой видны две темные линии ( железнодорожные пути ) получена после фиксации клеток четырех-окисью осмия. Линии соответствуют наружному и внутреннему полярным слоям, состоящим из полярных голов мембранных липидов. Светлая зона между линиями соответствует гидрофобной части липидного бислоя, в которой находятся неполярные углеводород- [c.343]

После удаления воды ферментативные процессы совершаться не могут, поэтому лиофильную сушку считают одним из самых удачных способов биохимической фиксации клеток и тканей. Для того, чтобы получить информацию о распределении в клетках меченых по продуктов фотосинтеза, высушенную ткань гомогенизируют в органическом растворителе и затем образовавшуюся смесь подвергают разделению с помощью дробного центрифугирования. Этот способ позволяет отделить хлоропласты от остальных частей клеток таким образом, что меченые по углероду гидрофильные продукты фотосинтеза (органические фосфаты, сахара, аминокислоты, окси- и кетокислоты) остаются в тех участках клетки, где они находились в момент замораживания. Естественно, этот метод неприменим для определения локализации гидрофобных продуктов фотосинтеза (липидов), растворимых в неводных растворителях. [c.260]

В ОДНОЙ чашке можно фиксировать несколько кусочков агара. Их оставляют на некоторое время в покое для полного проникновения фиксатора (минимум на 45 мин и максимум на 4 ч) и фиксации клеток на покровном стекле. Агар может отойти от стекла сам по себе или можно помочь ему отделиться, удерживая внизу покровное стекло пинцетом и приподнимая агар кончиком ножа резким движением при этом следует избегать бокового смещения слоя вдоль стекла. Затем покровное стекло отмывают водой и кладут в 70%-ный этанол, где оно лежит до момента окрашивания. [c.48]

После промывки в ЗФР клетки подвергают гипотоническому шоку, обрабатывая их 2 мл 0,05 М КС1 в течение 20 мин при комнатной температуре. Затем проводят предварительную фиксацию клеток, добавляя к ним 2 мл свежего фиксирующего раствора (3 части метанола +1 часть уксусной кислоты), что необходимо для предотвращения агглютинации набухших клеток. [c.509]

Быстрой остановки аутолитических процессов можно достичь не только фиксацией на холоду, но и перфузией фиксирующего вещества чер>ез кровеносную систему. Правильно установленное давление перфузии в течение 10— 20 мин обеспечивает равномерную фиксацию клеток и тканей при оптимальной стабилизации структур. Последующая фиксация погружением маленьких кусочков ткани в эту же фиксирующую среду при температуре холодильника на 24 ч позволяет стабилизировать вещества и ферменты на месте их прижизненной локализации. Фиксация перфузией не требует большой затраты времени и считается предпочтительной. [c.34]

Чтобы получить ответ на этот вопрос, вы используете очень тонкие стеклянные микропипетки в качестве микроэлектродов и одновременно для микроинъекций фермента пероксидазы хрена (ПХ) с мол. массой 40000 Да либо флуоресцентного красителя флуоресцеина с мол. массой 330 Да. Флуоресцеин дает при УФ-освещении ярко-желтую флуоресценцию ПХ определяют путем фиксации клеток и инкубации их с соответствующими субстратами. [c.264]

Принцип вытеснения жидкости с одновременной фиксацией клеток микроорганизмов в иммобилизованном состоянии положен в основу работы аэротенков-вытеснителей с применением стеклоершей. Стеклоерши погружают в аэрируемую сточную воду и на их поверхности происходит накопление биоценоза активного ила. Последний при этом так же, как и при работе с биофильтрами, развивается на каждом участке ершей неодинаково и изменяется в объеме как по количественному, так и качественному составу. [c.118]

Более 20 лет назад предложенные мной методы рациональной фиксации клеток и тканей для цитохимического обнаружения гликогена [I], дополненные достоверной цветной реакцией окисленного перйодатом полисахарида фуксин-сернистой кислотой [2, 3), позволили выявить и локализовать минимальные запасы гликогена (например, в тромбоцитах, синаптических терминалях нервной системы, в олигодендроцитах и т. д.), которые недоступны другим приемам. Опыт использования нашей методики и общий прогресс знаний об углеводном обмене обязывают к постановке некоторых задач дальнейшего углубления исследования, обсуждение которых назрело. [c.157]

Разделение фаз в анизотропных золях естественно было бы объяснить фиксацией частиц во вторичном потенциальном минимуме. Некоторые авторы, полагающие, что лондонов-ские силы притяжения слишком слабы для фиксации частиц на расстоянии 500 А, пытались найти этому другое объяснение [5, 25], ссылаясь при этом на теорию самопроизвольного энтропийного разделения фаз Онзагера [26]. Однако эта теория объясняет разделение фаз только в случае небольшого различия в их концентрациях. В тактоидных же золях это различие может быть очень большим. Кроме того, эта теория не пригодна для монодисперсных систем (многие латексы, бактерии), а также грубых дисперсий, при разделении которых энтропийный эффект из-за крупности частиц вообще не может иметь существенного значения. С другой стороны, в колониях бактерий расстояние между клетками так велико, что молекулярными силами притяжения, по всей вероятности, нельзя объяснить фиксацию клеток. Большие трудности встречаются при объяснении природы сил притяжения и отталкивания в случае взаимодействия хромосом в процессе митоза, движения митохондрий и других биологических микрообъектов [12]. [c.13]

Включения и запасные вещества. Прокариоты характеризуются сравнительно простой внутриклеточной организацией и не содержат автономных органелл, хотя многие бактерии имеют включения. Среди них в первую очередь следует отметить различного рода мембранные пузырьки, образованные в результате инвагинаций ЦПМ. Общей структурой, встречающейся как у грамположительных, так и у грамотрицательных организмов, является мезосома (см. рис. 14). Это инвагинация ЦПМ в форме везикул, трубочек или ламелл. Точные функции ее до настоящего времени неясны. Считается, что она может играть роль в делении клетки, образуя септу, а затем и поперечную перегородку, а также служить местом прикрепления микробной хромосомы, участвуя в репликации и последующем расхождении дочерних клеток. Мезосо-мы могут также принимать участие в процессах секреции. Однако некоторые исследователи считают, что мезосома — это артефакт, возникающий при фиксации клеток для электронной микроскопии. [c.33]

Рис. 6-78. Электронная микрофотография (А) и схематическое изображение (Б) перинуклеарных эндосом из молодых клеток почек хомячка, растущих в культуре. Клетки инкубировали в среде, содержащей пероксидазу, 15 мин при 37°С, что вполне достаточно для поглощения пероксидазы путем жидкофазного эндоцитоза и переноса в эндосомы (и эидолизосомы, см. текст), но недостаточно для поступления в лизосомы После фиксации клеток и выдерживания их с субстратом пероксидазы (диаминобензидином) продукты ферментативной реакции фиксировали тетроксидом осмия для увеличения электроноплотности На (Б) изображена усредненная картина, полученная из 18 тонких срезов Ядро клетки

Метод включения клеток в полиакриламидный гель (ПААГ) используется уже более 20 лет. В первых работах он рекомендовался как универсальный для многих микроорганизмов. Имеющиеся сейчас экспериментальные данные свидетельствуют о наличии отрицательного воздействия акриловых мономеров и в еще большей степени самого процесса полимеризации на жизнеспо-собнось и ферментативную активность многих микроорганизмов. Поэтому в ряде случаев ПААГ заменяют Са-альгинатным гелем, каррагинаном и другими носителями. С другой стороны, следует отметить и преимущества геля простота приготовления, относительная дешевизна, возможность включения клеток любого размера и заданное их количество, прочность фиксации клеток, прочность гранул на стирание и разрыв (свойство, необходимое для реакторов с перемешиванием). Уменьшить набухание геля можно путем его армирования каким-либо неорганическим носителем. [c.224]

Жидкость Руге 40%-ный формалин — 20 мл, ледяная уксусная кислота — 1 мл, вода дистиллированиая — 1000 мл время фиксации — 5 мии. Рекомендуется для фиксации клеток, выращенных в жидких средах неопределенного состава. [c.213]

Вирус обнаруживают в лунках планшета Терасаки после фиксации клеток и постановки иммунофлуоресцеиции. [c.121]

Фиксация клеток. По окончании гипотонической обработки клетки центрифугируют в течение 5 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют, осадок ресуспензируют и осторожно, по каплям, добавляют 5—6 мл фиксатора, постоянно встряхивая клетки, чтобы избежать образования комочков. [c.80]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология