Клетки размораживание

Эффект фазы роста культуры. Как видно из приведенных на рис. 3.2 данных, образование антител продолжается даже после того, как клетки перестали пролиферировать. Было высказано обоснованное предположение, что синтезированные антитела не сразу секретируются клетками в культуральную среду [35 ]. Позднее, в фазе отмирания, клетки лизируют и высвобождают находящиеся в них антитела. Полученные результаты побудили провести специальные эксперименты по определению содержания антител в клетках в фазах роста и отмирания. Оказалось (рис. 3.3), что количество антител, которые удается выделить из гибридомных клеток после их разрушения с помощью замораживания - размораживания, в течение всех фаз роста практически постоянно и слишком мало, чтобы можно было объяснить наблюдае- [c.43]

Для размораживания клеток ампулы извлекают из жидкого азота, помещают в водяную баню при 37 °С. После полного размораживания клетки стерильно переносят в пробирки и отмывают центрифугированием в 50 мл ростовой среды. Супернатант удаляют, клетки суспендируют в свежей порции ростовой среды (15—25 мл) и помещают в культуральный матрас. На следующий день 100 мкл суспензии клеток смешивают со 100 мкл трипанового синего и подсчитывают живые клетки в камере Горяева (трипановый синий окрашивает только поврежденные клетки). Жизнеспособность размороженных клеток обычно составляет не менее 80%. [c.314]

Жесткая клетка [37]. Предполагается, что реакция может протекать лишь при определенной ориентации партнеров, однако эта ориентация статистически представлена с малой вероятностью, так как она соответствует вершине потенциального барьера вращения частицы в клетке. Фактически предполагается, что частицы в клетке находятся в термодинамически выгодных ориентациях, а реакция осуществляется из других, термодинамически невыгодных состояний. Другими словами, для того чтобы осуществилась реакция, необходимо забросить реагирующую частицу в невыгодную ориентацию. Предполагается, что при размораживании молекулярных движений увеличивается статистический вес этих ориентаций. По существу этот механизм очень близок к предыдущему отличие состоит лишь в деталях статистической трактовки ориентационного процесса. [c.142]

Размораживание клеток. Замороженные культуры вынимают из сосуда с жидким азотом и быстро помещают в водяную баню на 37°С. Как только растают последние кусочки льда, суспензию клеток переносят пастеровской пипеткой в пробирки на 50 мл, содержащие не менее 10 мл холодной питательной среды, отмывают один раз 20—30 мл холодной среды и подсчитывают число жизнеспособных клеток. Клетки засевают в разных разведениях, так как окраска трипановым синим часто не выявляет значительную долю поврежденных клеток, которые могут погибнуть в первые сутки культивирования. [c.111]

Ампулы с клетками можно хранить в жидком азоте либо в его парах. Последний метод удобнее, так как, если у ампул остаются капиллярные проходы, они не заполняются жидким азотом, и тем самым ликвидируется опасность взрыва при размораживании. Несколько более высокая температура паров азота не является, по-видимому, отрицательным фактором, за исключением, может быть, случаев длительного хранения запаса клеток, предназначенного для рассева. [c.113]

После размораживания определяют концентрацию сохранившихся клеток, для чего в суспензию добавляют равный объем 0.2%-ного трипанового синего, окрашивающего мертвые клетки в синий цвет. Окрашенную суспензию заправляют в счетную камеру Горяева. [c.68]

В результате биохимических изменений ткани теряют упругость, разрыхляются. Образование кристаллов льда и перекристаллизация приводят к потере упругости-после размораживания тканей. При неблагоприятных условиях хранения — сравнительно высоких и неустойчивых температурах — изменяется кристаллическая структура замороженных продуктов. Благодаря более высокому давлению насыщения над мелкими кристаллами льда, сравнительно с крупными, происходит постепенное испарение мелких кристаллов и увеличение размеров крупных. Периодическое повышение температуры также вызывает таяние мелких ледяных кристаллов. Оттаявшая влага в силу разности осмотических давлений намерзает на более крупных кристаллах, расноложенных между клетками, и увеличивает их размеры. [c.64]

Этилмеркаптан [312, 3131. При 2537 А предпочтительнее процесс (1) в органических матрицах при 77° К и облучении полным светом ртутной лампы возникает поглощение в области 4065 А полагают, что оно обусловлено образующимися радикалами СгНаЗ, стабилизованными в клетке при размораживании среди продуктов обнаруживается дисульфид. Изопропил-и к-бутилмеркаптаны дают аналогичные спектры, которые связываются с тиильными радикалами, образующимися в аналогичных первичных процессах. [c.398]

Свободная вода может выделяться из клеток и превращаться в лед при замораживании, а затем при дефростации она впитывается. клетками обратно. Если же температура ткани понижается настолько, что замораживается и часть связанной воды, то первоначальная структура неустойчивых биоколлоидов нарушается необратимо, так как навсегда разрушается диспер-соидная структура ткани. Это в свою очередь ведет к изменению консистенции последней, ухудшению товарного вида и качества продукта в результате увеличения потерь сока при размораживании. [c.13]

Размораживание клеток проводят быстро, помещая пробирки в водяную баню с /=37°С. Размороженные клетки разводят 10 мл гиб-ридомной среды и осаждают центрифугированием. Осадок ресус-пензируют в ростовой гибридомной среде до плотности 4-10 клеток/мл и помещают по 0,2 мл в 96-луночные микроплаты. Только что размороженные клетки хорошо растут при концентрации сыворотки в среде 20%. После того как начался рост, концентрацию сыворотки уменьшают до 5—10%- [c.169]

Полученные клеточные линии можно замораживать, используя стандартные методики. Осажденные клетки (10 ) ресуспендируют в 1 мл среды RPMI 1640, содержащей 20% СПК, глутамин, гентамицин и 10% ДМСО, после чего выдерживают суспензию при —70 °С в течение ночи, а затем переносят в жидкий азот. После размораживания клетки один раз промывают в КС-Б и переносят в WEHI-K (2-10 клеток/мл). Обычно размножение клеток обнаруживают через 3—4 сут. [c.311]

При размораживании клетки быстро согревают до 4 С иа водяной бане с 37 С и переносят в 15 мл МСИДИ-АТЛ, которую держат во льду. После центрифугирования осадок ресуспендируют в МСИДИ-АТЛ, дополненной ФРТК, и культивируют как описано выше. [c.300]

Применение криопротекторов позволяет снизить повреждающее действие физико-химических факторов при криоконсервировании. Используют различные криопротекторы сахарозу, декстран, этилен-гликоль, поливинилпирролидон (ПВП), диметилсульфоксид (ДМСО), полиэтиленоксиды (ПЭО) и др. [16]. По многочисленным данным,криопротекторы оказывают токсическое действие на биологические объекты, степень которого зависит от типа криопротектора, концентрации, степени очистки и времени контакта с клетками [12, 16—18, 19]. Для определения токсического действия криопротектора клеФки выдерживают при комнатной температуре с различными его концентрациями в течение 30—60 мин, после чего определяют их жизнеспособность. Степень защитного действия криопротекторов определяют также опытным путем, для чего суспензию клеток замораживают в среде, содержащей исследуемые криопротекторы в концентрации, не оказывающей токсического действия. После размораживания определяют жизнеспособность клеток. Вид криопротектора, концентрацию его в среде и состав криоконсерванта следует подбирать индивидуально для каждого типа клеток. От свойств криопротектора зависит и выбор режима охлаждения. [c.64]

Теперь пора вспомнить о жидких кристаллах. Для тих веществ, в отличие от водных растворов электроли-ов, образование стеклообразного состояния при низ- их температурах — весьма обычное явление. Иногда но образуется даже при медленном охлаждении. Потому для криобиологов жидкие кристаллы интересны с, вух точек зрения. Во-первых, их можно было бы вво-,ить в клетки вместо водного раствора на время их за-юраживания с обратной заменой при размораживании. >то позволило бы сохранить целостность клеточной струк-уры. Во-вторых, существуют пути модификации вод-1ЫХ клеточных растворов для придания им свойств жид- их кристаллов. Для этого можно было бы вводить в летки молекулы- головастики , о которых шла речь [c.198]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология