Уреаза иммобилизованная

ПодготоЕ ленная путем модифицирования реакцией с -амино-пропилтриэтоксисиланом поверхность достаточно крупнопористого силохрома или силикагеля может быть использована для иммобилизации белков и, в частности, ферментов, нужных для проведения -биокаталитических реакций. Для этого, как указывалось в лек-дии 5, надо провести дальнейшее модифицирование поверхности адсорбента-носителя прививкой агента (глутарового альдегида), способного вступить в реакцию с аминогруппами как модификатора, так и балка. Адсорбент-носитель с привитыми теперь уже альдегидными концевыми группами вводится в реакцию с различными белками. Ра ссмотрим иммобилизацию уреазы — важного фермента, находящего также применение в аналитическом определении мочевины и в аппарате искусственная почка . На рис. 18.9 представлена зависимость активности иммобилизованной уреазы от количества иммобилизованного белка. Адсорбентом-носителем является макропористый силохром со средним диаметром пор 180 нм. Этот размер пор значительно превышает размер глобулы уреазы. Вместе с тем удельная поверхность этого силохрома еще достаточно высока (5 = 41 м /г), чтобы обеспечить иммобилизацию значительного количества уреазы. Из рис. 18.9 видно, что при этом удается иммобилизовать до 120 мг белка на 1 г сухого адсорбента-носителя (это составляет около 3 мг/м ). Активность уреазы снижается не более, чем наполовину, даже при большом количестве уреазы в силикагеле, зато иммобилизованный так фермент можно многократно применять в проточных системах, и он не теряет активности при хранении по крайней мере в течение полугода. [c.341]

Уреазу иммобилизуют в полиакриламидном слое, нанесенном на поверхности NHJ-стеклянного электрода. На рис. 7.7-2 показана схема устройства этого [c.499]

В ферментных электродах ферменты обычно иммобилизуют, что позволяет уменьшить расход материалов для проведения рутинных анализов и исключить частую проверку ферментного препарата для получения воспроизводимых результатов. Кроме того, устойчивость фермента часто увеличивается при введении его в подходящий гелевый носитель. Например, электрод для определения мочевины с химически связанной уреазой на поверхности аммонийного ИСЭ может работать более 300 дней [16]. [c.120]

Определение мочевины (диагностический показатель функции печени). В [ервом электроде для определения мочевины, разработанном Гилболтом и Монталво 19], уреазу иммобилизовали в полиакриламидном носителе на сетках из найлона или (акрона, помещаемых на чувствительный к ионам аммония катионоселективный лектрод фирмы Be kman. Позже те же авторы [20] описали усовершенствованный лектрод, покрытый целлофановой мембраной, который можно использовать в течение 1 дня без потери активности. [c.125]

Поливинилбутиральную мембрану наносят на затвор ИСПТ капельным методом. Для этой цели приблизительно 0,1 г поливинилбутираля и 1 мл 1,8-диамино-4-амино-метилоктана растворяют в 10 мл дихлорметана. Полученный раствор полимера накапывают на диэлектрический затвор двух ИСПТ и затем последние погружают в 5%-ный раствор глутарового альдегида, в котором примерно через сутки при комнатной температуре завершается реакция образования поперечных связей. Уреазу иммобилизуют на ФПТ, помещая ИСПТ с поливинилбутиральной мембраной в раствор уреазы (5 мг/мл) приблизительно на сутки при 4°С. [c.376]

Для иммобилизации ферментов применяют растворы полиэлектролитов, способные к фазовому разделению при определенных условиях. Запатентован способ иммобилизации большой группы ферментов (более 10) путем смешения растворов хитозана и фермента с последующим осаждением комплекса щелочью либо ионами SOl с полным сохранением ферментативной активности белка (пат. 4167447 США). Аналогичным способом с использованием хитозана была иммобилизована уреаза (пат. 80—74794, 1980 Япония). Из кислого раствора фермента и хитозана отливали пластинки, которые после высушивания выдерживали в боратном буфере. Полученная пластинка имела удельную активность 0,08 ед/см . С помощью водорастворимого карбоди-имида на хитозане иммобилизовали глюкозоизомеразу [102]. Таким образом, процесс иммобилизации не вызывает инактивации фермента, более того, такая обработка снижала степень инактивации фермента ионами металлов. [c.127]

Исторически тканевые биосенсоры появились позже рассмотренных в предыдущих главах ферментных и микробных биосенсоров [1, 6, 22, 33, 37, 38]. Возможность использования цельного фрагмента ткани млекопитающих в качестве биокаталити-ческого слоя впервые была продемонстрирована на примере аргининового сенсора [36]. Тонкий слой бычьей печени и соответствующее количество фермента - уреазы совместно иммобилизовали на поверхности аммиачного газочувствительного датчика. На кончике сенсора протекали каталитические реакции [c.34]

С другой стороны, в описанных в этой главе биосенсорах можно установить мембрану, на которой осуществляется разделение фаз, очень близко от сенсорной поверхности. Так, недавно мы изготовили сенсор, имеющий конструкцию зонда и сравнительно небольшие размеры, причем в случае необходимости размеры сенсора можно еще уменьшить [7]. На рис. 27.11 представлена принципиальная схема такого сенсора на базе конденсатора со структурой 1гМОП и уреазы, а также его отклики на мочевину и аммиак. Сенсор заключен в трубку из полиэфирной смолы так, что с раствором контактирует только пористая тефлоновая мембрана с площадью поверхности 3 мм . На мембране иммобилизована уреаза (200 м. ед.), сшитая поперечными связями глутаровым альдегидом. Этот биозонд отличается довольно вы- [c.438]

Термоанализ можно применять также и для эпизодического или непрерывного наблюдения за окружающей средой [7] как своего рода антитоксический контроль. При необходимости детектирования определенного токсического соединения в ферментной колонке термистора можно иммобилизовать определенное количество фермента, который ингибируется данным соединением. Тяжелые металлы, например Hg(lI), можно обнаружить уже при содержании до 0,2-10 % по их ингибирующему действию на иммобилизованную уреазу [7]. Концентрацию тяжелых металлов в пробе определяют сравнением температурного отклика на импульсный ввод субстрата (с избытком мочевины) до и после введения пробы. Затем специальной промывкой полностью восстанавливают активность уреазы, что позволяет проводить повторные анализы на той же ферментной колонке. В некоторых случаях можно применять ферменты, которые действуют непосредственно на определяемое вещество. Так, цианид определяют с пределом обнаружения 10 М, используя фермент родаминазу. Возможно даже прямое определение пестицидов и ингибиторов ацетитхолинэстеразы [c.470]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология