Носители полиакриламидные

Электрофорез проводят либо в свободной незакрепленной среде (в свободной жидкости) — фронтальный электрофорез, либо в закрепленной среде — зональный электрофорез — на крупнопористых носителях (фильтровальная бумага, целлюлоза, порошкообразная пластмасса, агар-агар, ацетилцеллюлоза, стеклянный порошок) или на мелкопористых носителях (силикагель, полиакриламидный гель, целлюлоза, оксид алюминия, крахмал и др.). [c.237]

Для разрешения этой проблемы был предложен сетчатый полиакриламидный носитель [402], и для синтезов применяли полярный растворитель. [c.183]

Электрофорез в градиенте концентрации. Здесь опять речь идет о методе, при котором определяющую роль играет размер молекулы белка. Носитель состоит из полиакриламидного геля возрастающей концентрации (например, от 2 до 16 или от 3 до 30 % акриламида). В этом градиенте пористости белковые молекулы тормозятся, т. е. останавливаются, по мере того как ячейки сетки становятся все более мелкими. [c.40]

Электрофорез в тонком слое проводится в закрепленном толщиной 1—2 мм слое силикагеля, агара, агарозы, крахмала, полиакриламидного геля, сефадекса, целлюлозы, кизельгура, окиси алюминия, алебастра. Проводящую жидкость вводят в слой носителя нли ею опрыскивают слой после его формирования. Раствор исследуемого вещества вносят на поверхность слоя или внутрь отверстий, вырезанных в слое. Электрофоретический процесс можно проводить в устройствах, предназначенных для электрофореза на бумаге. [c.147]

Использование в качестве носителей ацетата целлюлозы и полиакриламидных гелей — более чистых и однородных хроматографических материалов, минимально адсорбирующих исследуемое вещество, привело к уменьшению размывания зон и возможности более быстрого разделения микроколичеств веществ. Описаны методики разделения кислых полисахаридов на ацетате целлюлозы [c.226]

Полиакриламидные полимеры — носители фермен тов............... . , ..... [c.183]

Большое распространение получил электрофорез в тонких слоях для разделения высокомолекулярных веществ на различных носителях, особенно на агаровом, крахмальном и полиакриламидном гелях. Благодаря замечательной разделительной способности этот метод нашел применение прежде всего в клинической биохимии. Напомним, что в подавляющем большинстве случаев разделение с помощью этого метода осуществляется на носителях, приготовленных в форме геля. Опыт, накопленный в области хроматографии в тонких слоях, показал, однако, что для разделения некоторых групп веществ, в первую очередь низкомолекулярных, можно с успехом применять и суспензии некоторых сорбентов. [c.160]

Полиакриламидные носители для БСС (табл. на стр. 229) [c.228]

Модифицированные полимеры на акриламидной основе (см. разд. 31, 87) намного превосходят по инертности целлюлозные носители неспецифическая адсорбция белков проявляется на них значительно слабее. Для иммобилизации крупных лигандов применяют также исходные, немодифицированные полиакриламидные гели (см. разд. 31) — посредством реакции с глутаровым альдегидом (см. разд. 125/11). [c.228]

Полиакриламидные носители и их производные [c.200]

В настоящей главе рассматривается применение электрофокусирования на синтетических амфолитах-носителях, приводятся основные сведения о методе, даются подробные указания относительно фракционирования белков на препаративном уровне при стабилизации градиента pH с помощью градиента плотности, приводится описание аналитического фракционирования в полиакриламидном геле [c.297]

Применение. В гистохимии ферментов в качестве носителя при электрофоретическом - фракционировании кислых фосфатаз в полиакриламидном геле [I- 2]. [c.18]

Применение. В гистохимии ферментов в, качестве носителя при электрофоретическом фракционировании кислых фосфатов в полиакриламидном геле [1, 2]. Технические показатели (по ТУ 6-09-10-1234—77) [c.217]

Связывание фермента с гидрофильной матрицей полимера заметно повыц его устойчивость к денатурации при нагревании. Полиакриламидные носит значительно инертнее целлюлоз, и поэтому физически адсорбирующиеся бе и ферменты легче отмываются от них, чем от целлюлозных носителей. Это i возможность значительно дольше повторно использовать полиакриламидные Сители по сравнению с целлюлозными носителями. Полиакриламидные носит нерастворимы в воде и многих органических растворителях — ацетоне, бенз( диметилформамиде, диоксане, этилацетате, пиридине, этаноле, уксусной ки( те и др. [c.190]

Наиболее простой способ снятия неспецифического фонового излучения состоит в использовании твердофазных вариантов метода. В качестве твердой фазы берут пблистирольные пробирки, микропланшеты, полиакриламидные шарики. Иммобилизация антител (моноклональных или поликлональных) на полистироле осуществляется методом нековалентной физической адсорбции, а в случае полиакриламидных частиц — ковалентным связыванием. Различие в способах иммобилизации обусловливает некоторые различия в свойствах иммобилизованных антител. Из. всех перечисленных носителей полиакриламидные шарики, как правило, обеспечивают. повышенную стабильность и иммунореактивность иммобилизованных антител, более быструю кинетику специфического взаимодействия, что улучшает точность анализа и его воспроизводимость. [c.142]

В настоящее время в фармацевтической промышленности нашли практическое применение два процесса. Первый из них—это синтез аналога кортизона, преднизолона, который используется в качестве лекарственного препарата для лечения ревматоидных артритов. Предшественник стероида, соединение Рейх-штейна, пропускают последовательно через две колонки, каждая из которых содержит специфический фермент, присоединенный к полиакриламидному полимерному носителю [128]. При этом происходит реакция гидроксилнровання прохн-рального С-11, причем конфигурация сохраняется. [c.261]

Разрешающая способность электрофоретических методов исследования значительно повысилась благодаря использованию в качестве поддерживающих сред таких носителей, как гель сефадекса, крахмальцый, агар агаровын или полиакриламидный гель. [c.219]

Наряду с разделением белков по величине электрофоретической подвижности ири использовании указанных носителей имеет значение молекулярно-ситовой эффект геля и размеры молекул Оелка ири прохождении их через ячеистую структуру геля. Так, если при электрофорезе иа бумаге белки сыворотки разделяются на 4—5 четких зон, то в полиакриламидном геле выявляется 13—16 полос, соответствующих отдельным белкам (рис. 98). [c.219]

Подобно крахмальному и акриламидному агаровый гель является очень мягким носителем в отличие от электрофореза на бумаге при нем не происходит инактивации белков, что позволяет определять активность отдельных фракций бeлкОДJieпo peд твeннo в геле после проведения электрофореза. Приготовление агарового геля значительно проще, чем крахмального или полиакриламидного, продолжительность электрофореза составляет I—4 ч. [c.92]

Методом тонкослойной хроматографии (ТХ) можно быстро разделить аминокислоты метод требует несложного оборудования и малых исходных количеств. Для изготовления слоев толщиной 0,1 — 0,3 мм применяют стандартные носители, такие, как сипикагепь, оксид алюминия, поро-щок целлюлозы, ионообменники на основе целлюлозы, попиамиды, а также полиакриламидный и декстрановый гепи. В зависимости от материала носителя ТХ бывает адсорбционной (например, разделение на силикагеле и оксиде алюминия) или распределительной (например, разделение на слоях целлюлозы). В качестве подвижной фазы применяют те же системы, что и для бумажной хроматографии. [c.58]

Изоэлектрическое фокусирование [42 — 45] в линейном градиенте pH позволяет разделить белки, характеризующиеся различными изоэлектрическими точками. Для создания градиента используют носители с цвнттер-ионными свойствами — алифатические полиаминополикарбоновые кислоты, имеющие М 200 — 700. При движении в градиенте pH суммарный заряд белка постоянно меняется, и в области pH, близких к изоэлектрической точке, становится равным нулю. Соответствующий белок фокусируется , образуя узкую зону. При препаративном фокусировании в колонке стабилизация градиента pH осуществляется с помощью градиента плотности используемого буферного раствора, однако чаще работают с плоскими слоями полиакриламидного или гранулированного геля. Опубликовано краткое сообщение о непрерьтном электрофокусировании без носителя [46]. Эффективность электрофокусирования высока. Так, возможно, например, разделить белки, различающиеся по ИЭТ лишь на 0,01 единицы pH. При разделении сыворотки образуется более 40 белковых полос. [c.351]

Рис. 3-6. Электрофоретическое разделение белков плгрмы человека пятью различными методами при pH 8. а — электрофорез без носителя б — электрофорез на бумаге в — электрофорез в крахмальном геле г — электрофорез в полиакриламидном геле д — иммуноэлектрофорез (полосы прештитации к поливалентной антисыворотке человека). Стрелки показывают положение отдельных белков плазмы.

Для контроля за степенью очистки белков чаще применяют метод электрофореза. Большинство авторов в качестве носителя используют гомогенные гели или градиент концентрации акриламида. Основной способ при этом — электрофорез в диссоциирующей среде ДДС-Na соответственно процедуре, которую описал Лэммли [68]. В определенных случаях завершающим приемом при этом являются иммунодиффузия [29, 114] либо иммуноэлектрофорез [17, 80, 118]. При исследовании структуры некоторые авторы прибегают к двумерному электрофорезу. Тогда первая миграция молекул может происходить в гомогенном геле полиакриламида с ДДС-Na или без него во втором направлении молекулы мигрируют в полиакриламидном геле с ДДС-Na в присутствии восстановителей дисульфидных связей (р-меркапто-этанол) [10, 40, 61, 78]. Чтобы охарактеризовать субъединицы легуминов гороха и конских бобов, Матта и др. [77, 78] применяют сочетание ДДС-Na с р-меркаптоэнталом и электрофокусированием. Рестани и др. [92 пользуются этим же способом применительно к глобулинам люпина, а Ху и Еэзен [53] демонстрировали гетерогенность белков сои. Указанные методы с [c.155]

Гель-фильтрация особенно широко используется для удаления глютенинов, альбуминов и глобулинов, которые можно извлекать одновременно с глиадинами. Однако 7-глиадин очищали [94] гель-фильтрацией в 70 %-ном этаноле и 10 мМ трисе на носителе сефакриле G 200 в сочетании с препаративным электрофорезом в полиакриламидном геле с кислым pH. [c.183]

Существуют два различных метода электрофореза фронтальный электрофорез, который проводят в свободной незакрепленной среде, и зональный электрофорез — в закрепленной среде (стабилизированная жидкость или носители). Они имеют единую аппаратурную схему источник тока, камеру для электрофореза, два электрода, соединяющих камеру с источником тока, и аппаратуру для сбора и идентификации разделенных веществ. Для электрофореза используют как готовые наборы аппаратуры (универсальный прибор для иммуноэлектрофореза и электрофореза белков на бумаге и крахмале, набор для электрофореза в полиакриламидном геле венгерской фирмы Реанал ), так и наборы, составляемые экспериментатором из отдельных приборов (универсальный источник питания УИП-1, двухлучевой регистрирующий микрофотометр ИФО-451 и др.). [c.144]

Для тонкослойной гель-фильтрации слой носителя готовят из самых мелких гранул геля. Из препаратов, имеющихся в продаже, применяются гели декстрана марки сефадекс сверхтонкий или полиакриламидные биогели марки —400 меш . В описанных в литературе методиках тонкослойной гель-хроматографии в основном [c.238]

Полиакриламидные полимеры — носители ферменто [c.190]

Для связывания белка (через аминогруппы) носитель активируют разбавленной минеральной кислотой. Отличительной особенностью этого носителя является то, что в некоторых случаях (например, при связывании а-амилазы, дек-страназы и др.) полимер может быть частично или полностью реактивирован разбавленной кислотой. Другое отличие состоит в том, что гидрофильный характер нерастворимого фермента обусловлен не наличием в матрице первичных амидных групп, как у других полиакриламидных носителей, а остатками ацеталей, ге-миацеталей и алифатических альдегидов, которые представляют собой особое микроокружение фермента, фиксированного на полимерной матрице. Носитель поставляется в виде 5%-ной суспензии в воде. [c.191]

Синтезы олигонуклеотидов с использованием фосфатного и фосфитного фосфотриэфирных методов приведены на рисунках 203 и 204. На первой стадии нуклеозид присоединяют с помощью якорной группы к полимерному носителю. Затем его 5 гидроксильную группу деблокируют кислотной обработкой и конденсируют с нук леотидным компонентом. У образующегося полностью защищенного динуклеозидмонофосфата удаляют диметокситритильную группу и присоединяют следующий нуклеотид и т. д. На последней стадии продукт отщепляют от полимерного носителя, снимают защитные группы н очиш,а1от хроматографией или электрофорезом в полиакриламидном геле. [c.366]

Фоцетт и Моррис [62] тоже вычислили значения L и R для обширной серии испытанных ими полиакриламидных гелей. У слабо сшитых гелей L, как и следовало ожидать, линейно зависит от концентрации полимера в геле если же увеличивать количество мономера при высоком содержании сшивающего агента, то значительно возрастает лишь толщина стержня. В этом случае образуется пористый носитель, схематически показанный на фиг. 4, Б. [c.119]

Реакцией с подходящим соединением полиакриламидные гели можно превратить в носители для связывания ряда аффинных лигандов [30]. Аминоэтильные производные готовят путем обработки большим избытком этилендиамина при 90 °С, а гидразид-ные производные — избытком гидразина при 50 °С. Аминоэтильные производные полиакриламидных гелей можно перевести в п-аминобензамидоэтильные производные реакцией с п-нитробен-зоилазидом в присутствии Ы,М-диметилформамида, триэтиламина и тиосульфата натрия. [c.201]

Уэстон И Аврамес [86] разработали метод прямого связывания аффинных лигандов полиакриламидными гелями с помощью глутарового альдегида, который, присутствуя в избытке, реагирует одной из своих альдегидных групп со свободной амидной группой полиакриламидного геля. Остающаяся свободная активная группа реагирует затем с аминогруппой аффинного лиганда, вводимого в последующей реакции связывания. Таким образом возникает прочная связь между носителем и аффинным лигандом. [c.204]

Больщая часть иммобилизованных ферментных систем, хотя и необязательно все из них, соответствует этой схеме. Рекомендовано вводить символы ВКЛ, МИК, АДС и КСВ между названием носителя и фермента, характеризуя тем самым любой из четырех классов иммобилизованных ферментов. Так, например, трипсин, ковалентно связанный с карбоксиметилцеллюлозой, следует обозначать как КМ-целлюлоза-КСВ-тр Инсин, уреазу, включенную в капсулу из найлона,— как найлон-МИК-уреаза, а глюкоамилазу, включенную в полиакриламидный гель,— ак акриламидный гель-ВКЛ-глюкоамилаза. [c.421]

На рис. 8 приведена схема прибора для диск-электрофо-реза, подготовленного для электрофокусирования в геле. Находящийся в трубках полиакриламидный гель содержит амфолиты-носители, которые вместе с образцом равномерно распределены по всему гелю или наслоены сверху. Для предотвращения окисления или восстановления амфолитов-носителей (на аноде и катоде соответственно) электроды погружают в раствор кислоты или основания. Во время электролиза кислота благодаря отрицательному заряду сульфат-иона остается в анодном отделении. В кислой среде над слоем геля амфолиты-носители приобретают положительный заряд и вследствие этого стремятся к кётоду. При подаче постоянного напряжения амфолиты распределяются по трубке в порядке их изоточек и фокусируют ам-фолиТы-Образцы в областях, соответствующих их изоточкам. Напротив, в основной среде вблизи катода амфолиты заряжены отрицательно и вследствие этого движутся к аноду. После удаления из трубок гель можно анализировать любыми методами, позволяющими избежать влияния амфолитов-носителей. [c.321]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология