Бактериофаг промоторы

В качестве примера рассмотрим три системы регулируемой экспрессии рекомбинантных генов в клетках Е. соН, которые получили широкое распространение. В одном случае для контроля экспрессии клонированных генов используют хорошо изученную систему регуляторных элементов лактозного оперона [123], в другом - систему промотор-репрессор-оператор фага [124], в третьем - промоторы и РНК-полимеразы бактериофагов [125]. Принцип регуляции экспрессии рекомбинантных генов в первых двух случаях один и тот же. В векторные молекулы вводятся регуля- [c.108]

В результате биохимического и генетического изучения белка-репрессора лактозного оперона. репрессора бактериофага лямбда, а также других регуляторных белков у бактерий была сформулирована общая модель регуляции транскрипции у прокариот. Предполагалось, что сайт-специфические белки либо ингибируют, либо стимулируют транскрипцию какого-либо гена, присоединяясь к ДНК рядом с промотором-участком, с которого РНК-полимераза начинает синтез РНК. Считали, что изменение в положении таких регуляторных белков по отношению к ДНК (связывание или отсоединение) включает и выключает гены. [c.183]

Фрагмент ДНК бактериофага, содержащий промотор [c.155]

Особые РНК-полимеразы обеспечивают транскрипцию клеточных органелл эукариот — хлоропластов и митохондрий. В составе хлоропластной ДНК обнаружены гены, гомологичные генам, кодирующим а-, - и -субъединицы РНК-полимеразы Е. oli. Это, а также сходство нуклеотидной последовательности промоторов бактерий и хлоропластов свидетельствует о том, что РНК-полимераза хлоропластов должна быть сходна с РНК-полимеразой бактерий. РНК-полимеразы митохондрий состоят, по-видимому, всего из одной субъединицы, подобно РНК-полимеразам, кодируемым некоторыми бактериофагами, такими, как ТЗ и Т7. РНК-полимераза митохондрий дрожжей сходна с РНК-полнмеразами этих фагов по аминокислотной последовательности. Ген, кодирующий митохондриальную РНК-полимеразу, располагается в ядре. [c.136]

Регулируемые промоторы Наиболее широко используются следующие сильные регулируемые промоторы промоторы la - и //-/)-оперонов Е. olv, специально сконструированный ia -npoMOTop, включающий -Ю-об-ласть /ас-промотора и -35-область Г/-/ -промото-ра (участки, находящиеся на расстоянии 10 и 35 п. н. до сайта инициации транскрипции) левый, или р , промотор бактериофага X промотор гена 10 бактериофага Т7. С каждым из них связываются соответствующие репрессоры, которые опосредуют включение и выключение транскрипции специфических генов. Кроме то- [c.107]

Первая глава данного тома касается использования плаз-мидных векторов, имеющих в своем составе высокоспецифичные промоторы РНК-полимераз некоторых бактериофагов. Такие векторные молекулы позволяют получать радиоактивно меченные зонды, которые благодаря своим уникальным свойствам все шире применяются сейчас в исследованиях структуры и функций нуклеиновых кислот. Подобные системы на основе космидных векторов рассматриваются во второй главе. Эти векторы разработаны для того, чтобы сделать менее трудоемкими прогулки по хромосомам высших организмов. Фаговые промоторы здесь расположены таким образом, что синтезируемый радиоактивно меченный зонд соответствует концевой области клонированной ДНК, а это облегчает поиск клонов, содержащих перекрывающиеся сегменты ДНК. [c.8]

Некоторым авторам удалось экспрессировать клонированные гены НА различных штаммов вируса гриппа в бактериях с использованием плазмид, содержащих либо la -, либо trp-промоторы [2, 3, 12]. Совсем недавно гены NS также были экспрессированы из промотора pL бактериофага ламбда [31]. Результаты этих экспериментов суммированы в табл. 12. [c.163]

Для транскрипции с промотора бактериофага Т7 нужна соответствующая РНК-полимераза. Чтобы можно было использовать этот промотор, ген РНК-полимеразы фага Т7 встраивают в хромосому Е. соИ в составе профага X, поместив его под контроль /ас-промотора. Затем клетки трансформируют плазмидой, содержащей ген-мишень под контролем Т7-промотора, и добавляют в среду ИПТГ. В этих условиях происходит индукция гена РНК-полимеразы Т7, синтезируется РНК-полимераза и происходят транскрипция и трансляция клонированного гена. Часто между временем индукции гена РНК-полимеразы Т7 и началом транскрипции гена- [c.108]

Рис. 10.13. Сконструированные участки ДНК из комбинаторной библиотеки кДНК Fv-фрагмента, клонированные в бактериофаг а. А и Б. Фрагменты ДНК L-( ) и Н-( ) цепей раздельно встроили в векторы на основе бактериофага а. В. Провели рестрикцию каждой iT oRI-библиотеки и лигировали фрагменты ДНК из библиотеки Н-цепи с фрагментами ДНК из библиотеки L-цепи, в результате чего получили комбинаторную библиотеку, содержащую все возможные сочетания фрагментов L- и Н-цепей с экспрессией соединенного фрагмента в одном векторе. pLa - /ас-промотор Е. соН, ССР - сайт связывания с рибосомой.

Работа промоторарегулируется репрессор-ным белком с1 бактериофага X. На самом деле для регуляции транскрипции с p --np0M0T0pa обычно используется термочувствительная мутантная форма репрессора с1 - белок Клетки, синтезирующие этот репрессор, сначала выращивают при температуре 28-30 °С в этих условиях репрессор блокирует транскрипцию с р --промотора. Когда культура достигает нужной фазы (как правило, середины log-фазы), температуру повышают до 42 °С, при которой l -pe-прессор инактивируется и начинается транскрипция. [c.108]

Рис. 10.17. Генетически сконструированный химерный комплекс СВ4-экзотоксин А Pseudomonas. Использован промотор бактериофага Т7 Е. соП.

Как и репликация, транскрипция состоит из трех основных этапов инициации, элонгации и термииации. В отличие от ДНК-полимераз, РНК-полимеразы способны к самостоятельной инициации синтеза РНК, которая осуществляется в определенных точках ДНК. Место инициации сиитеза РНК определяется специальными регуляторными участками ДНК—промоторами. Тсрмииация синтеза также происходит на специфических участках ДНК —терминаторах. Процесс транскрипции регулируется разнообразными способами, что позволяет клетке приспосабливаться к изменениям условий существования. Наиболее хорошо изучены транскрипция и способы ее регуляции у бактерий и бактериофагов. [c.412]

Чем отличаются различные классы промоторов Гены, принимающие участие в спорообразовании, не содержат обычных консервативных последовательностей, обнаруживаемых в положениях — 35 и — 10 промоторов вегетативных генов. Вероятно, каждый класс промоторов, контролирующих гены спорообразования, обладает характерными только для него консервативными последовательностями. Этот вывод, возможно, справедлив также и в случае промоторов, контролируемых вторым вегетативным фактором Похожая ситуация обнаруживается при исследовании средних генов бактериофага 8Р01, среди которых было изучено достаточное количество последовательностей промоторов, чтобы определить среднестатистическую. [c.159]

Уже давно известно, что многие бактериофаги Е. соЫ кодируют РНК-полимеразы, способные взаимодействовать лишь со специфическими промоторами фаговой ДНК- Фаги Т7 и ТЗ — первые тому примеры [1], а относительно недавно полимераза с подобными свойствами была обнаружена и у фага SP6 Salmonella typhlmurium [2]. [c.12]

Ген NS из штамма A/PR/8/34 вируса гриппа был экспрессирован на очень высоком уровне в Е. соИ с использованием pL-промотора бактериофага ламбда [31]. Результирующий белок NS1 был очищен и использован для получения антисыворотки, распознающей белок, синтезированный в клетках эукариотов. Достаточная имму-ногенность этого белка может отражать тот факт, что в противоположность НА белок NS1 не является гликопротеидом, и продуцируемый в бактериях белок может поэтому более походить на молекулу NS, синтезированную в клетках эукариотов. [c.166]

Прогресс в бактериофагии обусловлен прежде всего приложением к бактериофагам (в том числе фагам промышленных бактерий) принципов генетических исследований и сосредоточением усилий многих исследователей иа изучении относительно небольшого числа фагов (лямбдоидные фаги, группа Т-четных фагов и др.), послуживших основными фаговыми моделями при разработке принципов молекулярной генетики. Исследование ряда модельных фагов достигло сейчас очень высокого уровня. Для некоторых из них полностью расшифрована нуклеотидная после-довательнось генома, установлены границы генов, определено положение многих мутаций в последовательности нуклеотидов, выявлены промоторы, операторы, терминаторы, определены возможные рамки считывания и соответствующие им белковые продукты и т. д. Вместе с тем продолжается выявление и новых фагов. Некоторые из них становятся удобными моделями для решения определенных проблем. Например, липидсодержащие бактериофаги используют как модель для изучения структуры мембраны бактериофаги, геном которых представлен несколькими фрагментами РНК, служат хорошей моделью при изучении некоторых сторон репликации вирусов с такими же геномами бактериофаги-транспозоны — прекрасная модель в изучении механизмов транспозиции, играющих существенное значение в канцерогенезе, эволюции и т. д. [c.215]

Для получения равномерно меченных РНК-зондов необходимы те же реактивы, что и для реакций РНКазного расщепления. Здесь мы приводим условия использования РНК-полиме-раз и промоторов из бактериофагов SP6, Т7 и ТЗ. Более подробную информацию по синтезу РНК-зондов можно получить из оригинальных публикаций, посвященных системе SP6 [26, 35, 37]. [c.145]

С целью разобщить трансляцию и транслокацию вы осуществили клонирование гена в плазмиде рядом с промотором для РНК-полимеразы бактериофага (рис. 8-11). Такое расположение позволяет получить транскрипцию гена in vitro при добавлении [c.113]

Имеются данные о том, что способность РНК-полимеразы узнавать промотор может изменяться при связывании с разными о-субъединицами (рис. 3.6). Так, после заражения Ba illus subtilis определенными бактериофагами или на ранних стадиях спо-руляции экспрессируются разные о-субъединицы и [c.122]

Взаимное расположение промоторов и операторов, определяющих литический или лизогенный путь развития бактериофага X после инфекции. Показаны четыре различных промотора, а так е несколько мРНК, кодирующих регуляторные белки Сго, репрессор с1 и белок М, [c.184]

Смотреть страницы где упоминается термин Бактериофаг промоторы: [c.308] [c.33] [c.123] [c.308] [c.116] [c.267] [c.268] [c.362] [c.402] [c.185] [c.319] [c.159] [c.319] [c.258] [c.336] [c.155] [c.145] [c.145] [c.76] [c.93] [c.95] [c.217] [c.258] [c.336] [c.173] [c.295]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология