Разделение адениловых нуклеотидов

РАЗДЕЛЕНИЕ АДЕНИЛОВЫХ НУКЛЕОТИДОВ [c.183]

Разделение. На листе хроматографической бумаги проводят простым карандашом линию старта (на расстоянии 4 см от нижнего края листа), на которую наносят исследуемые растворы (суммарное количество адениловых нуклеотидов — 0,3—0,4 мкмоль). На ту же хроматограмму наносят растворы нуклеотидов- свидетелей по 0,05— [c.184]

Разделение нуклеотидов. Цитидиловую, адениловую, уридиловую и гуаниловую кислоты (содержание каждой 10—30 мг) можно разделять на колонке с анионитом дауэкс 2 (1 X 12,5 сл), используя для проявления 0,003 М соляную кислоту, которую пропускают со скоростью 0,8 (рис. 247). [c.909]

На полоски хроматографической бумаги шириной 4—5 см на линию старта наносят ш,елочной гидро лизат РНК (10—20 мкл) и растворы нуклеотидов- свидетелей по 0,1—0,15 мкмоль каждого. Электрофорез проводят в течение 5 ч при силе тока 0,5 мА на 1 см поперечного сечения бумаги. Для определения времени окончания электрофоретического разделения можно использовать окрашенный маркер, например 1%-ный раствор ксиленцианола, который движется быстрее самого подвижного компонента смеси. Локализацию рибомононуклеотидов проводят в ультрахемископе. Подвижность нуклеотидов от катода к аноду возрастает в ряду цитидиловая, адениловая, гуаниловая и уридиловая кислоты. Для количественного определения участки электрофореграмм, поглощающие в ультрафиолетовой области, очерчивают простым карандашом, вырезают, измельчают и элюируют нуклеотиды 4—5 мл 0,01 н. раствора НС1 в течение 4—5 ч. В элюатах определяют поглощение на спектрофотометре при длине волны, характерной для каждого нуклеотида (см. Приложение, с. 499), рассчитывают количество их в микромолях и в процентах по отношению к сумме всех нуклеотидов в щелочном гидролизате РНК. [c.181]

При последовательном пропускании двух растворителей достигается хорошее разделение рибомононуклеотидов. Rf увеличивается в ряду адениловая, цитидиловая, уридиловая и гуаниловая кислоты. Обнаружение и количественное определение нуклеотидов -проводят так же, как после электрофоретического разделения (с. 181). [c.182]

Для разделения нуклеотидов используют слабо- и среднеосновные анионообменники на основе целлюлозы. ДЭАЭ-, Эктеола- и ПЭИ-цел-люлозу. Могут быть использованы как коммерческие пластинки, так л приготовленные в лаборатории. Подготовка сорбента и приготовление пластинок с тонким слоем ПЭИ-целлюлозы описаны на с. 182. В отличие от хроматографии рибомононуклеотидов хорошего разделения компонентов адениловой системы можно добиться, применяя в качестве растворителя 0,5 М раствор хлористого лития [c.185]

Бариевые соли адениловой, гуаниловой, уридиловой и ци-тидиловой кислот являются наиболее удобной формой для выделения, хранения и применения нуклеотидов. Последние находят все больщее применение как для препаративных целей (синтез нуклеозидов, коферментов и т. д.), так и для биохимических исследований и в медицинской практике. Нуклео-зид-2 (3")-фосфаты бария могут быть получены из рибонуклеиновой кислоты щелочным гидролизом с последующим разделением методом ионообменной хроматографии и осаждением в виде бариевых солей. [c.93]

При определении структуры индивидуальных нуклеотидов часто используют химический или ферментативный гидролиз, а также дефосфорилирование до соединений известной структуры. Исторически сложилось так, что гетероциклические основания и углеводные составляющие основных нуклеотидов были уже известны и нерешенным оставался лишь вопрос о положении фосфориль-ного остатка в углеводной части молекулы [14]. Эта проблема была решена сравнительно легко для 5 -нуклеотидов и для дез-оксинуклеозид-З -фосфатов. Однако быстрое взаимопревращение рибонуклеозид-2 - и -З -фосфатов оказалось серьезной проблемой для исследователей, начинавших работы в этой области. Применение ионообменной хроматографии для разделения компонентов гидролизата дрожжевой РНК позволило однозначно определить положение фосфорильных остатков в этих нуклеотидах. Для всех четырех основных нуклеотидов были получены пары изомеров (а) и (Ь). Осторожный гидролиз адениловых кислот (а) и [Ь) дал соответственно рибозо-2- и -3-фосфат, которые были идентифици- [c.137]

Биосинтез нуклеотидов. Пуриновые и пиримидиновые нуклеотиды-это те структурные блоки, из которых синтезируются нуклеиновые кислоты нуклеотиды входят также в состав многих коферментов и участвуют в активации и переносе аминокислот, сахаров, компонентов клеточной стенки и липидов. Синтез всех пуриновых нуклеотидов идет общим путем, разветвляющимся лишь на стадии инозиновой кислоты, после чего образуется либо адениловая, либо гуаниловая кислота. 06-1ЦИМ является и путь синтеза пиримидиннуклеотидов. Здесь разделение происходит на уровне уридиловой кислоты. [c.256]

Физические методы также использовались для идентификации а - и -изомеров адениловой и цитидиловой кислот. Очень точными измерениями плотности водных растворов нуклеотидов было показано, что для любого нуклеотида раствор -изомера обладает более высокой плотностью (вследствие электрострикции), так как в динолярных ионах этих соединений имеется большее разделение заряда. Кроме того, известно, что отрицательно заряженная группа действует на аминогруппу таким образом, что значения рК амии-ной группы тем больше, чем меньше расстояние между этими заряженными группалш. Измерения констант диссоциации (табл. 3-1) аминогрупп, входящих в состав аденинового и цитозинового колец, подтверждают тот факт, что а -изомеры представляют собой 2 -фосфаты, а -изомеры — З -фосфаты [58]. [c.130]

Рандерат [42, 43] показал эффективность применения этого ионообменного вещества для разделения нуклеотидов. Довольно хорошее разделение на нем получено с 0,02 н. соляной кислотой. Аденозиндифосфат (ADP) нельзя отделить от 5 -уридинмоно-фосфата (UMP), а цитидиндифосфат ( DP) в какой-то степени перекрывает зоны этих двух соединеиий. Чтобы разделить эти соединения, которые остаются вблизи стартовой линии, можно провести элюирование 0,03 н. соляной кислотой. Этот элюат позволяет добиться лучшего разрешения СТР, UDP, АТР, GTP и иТР, хотя пятна в какой-то степени перекрываются. Хорошее разделение трифосфатов получают при повышении концентрации элюирующего растворителя до 0,04 н. и удлинении пути хроматографирования от примерно 9 до 12,8 см. Дайер [44] использовал двустадийное элюирование для разделения гуаниловой, ури-диловой, адениловой и цитидиловой кислот — продуктов щелочного гидролиза рибонуклеиновой кислоты. Перечисленные соединения были получены в результате 18-часового, гидролиза РНК дрожжей илн проростков ржи 0,3 н. раствором гидроксида калия при 37°С. Гидролизат освобождали затем от калия, пропуская через катионообменную смолу или осаждая калиевую соль хлорной кислотой. Первое элюирование проводили смесью [c.122]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология