Литература по гель-электрофорезу

Литература по гель-электрофорезу [c.377]

Представляя для печати результаты, полученные при определении чистоты ферментного препарата с помощью гель-электрофореза, важно дать какую-то количественную оценку содержания всех присутствующих в нем примесей. Заявление, что образец дал одну полосу при электрофорезе , неубедительно, если количество нанесенного на гель белка было настолько мало, что получилась только одна слабо окрашенная зона. Желательно также представить какое-то подтверждение того, что окрашенная полоса — это действительно данный фермент, а не присутствующий в препарате другой белок, который в количественном отношении даже превосходит исследуемый фермент. В литературе часто встречаются примеры того, как совершенно ошибочно основная полоса, полученная при электрофорезе, без всяких доказательств приписывается очищенному ферменту, хотя на самом деле она относится к примеси. Если удельная активность выделенного препарата слишком низка, то количество данного фермента в нем может составлять всего лишь 1% общего содержания белка, и при гель-электрофорезе его вряд ли можно заметить. В этом случае могут помочь фотографии электрофореграмм, хотя на них обычно плохо воспроизводится картина распределения окраски по относительной интенсивности. Более надежные в этом смысле результаты дает сканирование окрашенного геля (рис. 9.7). При этом единственная оговорка, которую можно сделать, касается относительной интенсивности специфической окраски различных обнаруженных компонентов. Исходя из предположения, что все белки окрашиваются одинаково, можно произвести точное количественное определение всех компонентов, используя гель-сканирующее устройство. [c.329]

В литературе описано множество буферных растворов для зонного электрофореза (на бумаге, в геле, колонке) поскольку многие из них были разработаны специально для какой-то конкретной цели, далее описаны лишь очень немногие из них. [c.369]

Обзор текущей литературы по биохимии показывает, что в настоящее время методы электрофореза в полиакриламидном геле используются очень широко. Главной областью их применения является разделение смесей белков [54—59] и компонентов РНК [60—63]. Этот метод можно использовать и при изучении особенностей реакций нуклеиновых кислот или полипептидов [64]. [c.153]

Эта глава посвящена разделению нуклеиновых кислот и их компонентов с помощью тонкослойной, ионообменной и аффинной хроматографии, а также электрофореза на бумаге и в геле. Основные сведения об этих молекулах, в том числе их биологической роли и строении, можно почерпнуть из книг Биохимия нуклеиновых кислот [1] и Молекулярная биология гена [2]. Для более подробного ознакомления с практическими и теоретическими аспектами рассматриваемых в этой главе проблем можно обратиться либо к цитируемой литературе, либо к сборникам Техника лабораторных работ в биохимии и молекулярной биологии [3—6]. [c.162]

Полиакриламидный гель (ПААГ) — наиболее эффективный носитель для электрофореза белков, в том числе и мембранных не удивительно, что большинство периодической литературы по белковому составу мембран посвящено электрофоретическому разделению последнего именно в ПААГ. Как правило, электрофорез в ПААГ проводят или в колонке, или на пластинках геля. [c.113]

Окрашивание производится с использованием красителя, растворенного в фиксаторе. Существует много различных методов для преодоления встречающихся здесь трудностей, связанных со скоростью окращивания ([132, 183—189] ссылками на эти работы отнюдь не исчерпывается вся литература по данному вопросу). В качестве красителей широко используются амидно-черный, нигрозин, кумасси синий 0-250 и кумасси синий К-250. Последний особенно часто применяется для окрашивания белков, хотя он хуже окрашивает некоторые кислые белки по сравнению с амидно-черным. Кумасси синий обычно проявляет более высокую чувствительность, чем другие красители. В некоторых методах (см., например, [189]) красители не применяются, а используется свойство додецилсульфата калия или натрия выпадать в осадок на холоду. В белковых полосах содержится меньше свободного детергента, чем в промежуточных участках геля, поэтому полосы кажутся более прозрачными по сравнению с молочно-белым фоном. Этим методом тложно быстро получить результаты после гель-электрофореза в присутствии ДСН, но он недостаточно чувствителен. Успешно использовалось также предварительное мечение белков флуо-рескамином [190]. В этом случае денатурированные белки можно наблюдать (в содержащем ДСН геле) в ходе электрофореза по их флуоресценции в ближней УФ-области спектра. [c.326]

Раств-сть ди-НС1 р. HjO. Связь —S—S— может бьггь расщеплена 10 мМ меркаптоэтанолом использ. при определении поперечно-сшитых компонентов при двумерном электрофорезе в ДСН-геле. Родственные реагенты имеют соединительную группировку, содержащую гликоль, который может расщепляться перйодатом (см. литературу в начале раздела). [c.320]

Наконец, в литературе описаны различные наследственные изменения в составе сыворотки крови. Нанример, наблюдалась наследственная аномалия альбумина, когда этот белок делился электрофоретически на две фракции. Но совершенно новая область для исследования наследственных изменений крови открылась, когда были разработаны методы иммуноэлектрофореза и электрофореза в гелях. Как уже говорилось, эти методы позволяют разделять сыворотку на десятки компонентов уже сейчас установлено большое количество генетически детерминированных модификаций трансферринов, гаптоглобинов и некоторых других белков в сыворотке крови человека. Так как изменения проявляются независимо друг от друга, наблюдаемая картина получается очень сложной и практически отличается у каждого отдельного человека. В этой области ведутся сейчас интенсивные исследования. [c.102]

Единственное в мировой литературе практическое пособие по новому методу электрофореза в гелях. Метод диск-электрофореза за последние годы не только все шире применяется в научно-исследовательских лабораториях, но и внедряется в практику медицинских учреждений. В книге рассмотрены теоретические основы метода, способы очистки реактивов и приготовления геля, окрашивание и денситометрирование разделенных компонентов, результаты применения диск-электрофореза в различных областях биологии и медицины. [c.280]

Различия в количестве изопероксидаз, полученные методом электрофореза (рис. 8) и при изоэлектрофокусировании (рис. 9), очевидно, происходят от того, что при электрофорезе некоторые изоэнзимы движутся в электрическом поле вместе и занимают одинаковое положение. Факты эти в литературе описаны. При изоэлектрофокусировании амфолины, входящие в состав геля, способствуют более четкому разделению белковых препаратов, удерживая белки в их изоэлектрических точках. [c.68]

Окрашивание красителем кумасси ярко-голубой. По завершении электрофореза белковые зоны локализуют путем окрашивания красителем кумасси ярко-голубой, обозначаемый в литературе как BBG250. Для окрашивания гелей используют [c.19]

В литературе описано много конструкций приборов для электрофореза в вертикальных пластинах. Ряд моделей предлагают различные фирмы. Наибольшее распространение получила конструкция прибора из плексигласа, предложенная Стадиером (рис. 9) (Studier, 1973]. Ее легко реализовать и в лабораторных условиях. Верхний и нижний электродные резервуары прямоугольной формы соединены вертикальной стенкой, в которой имеется вырез, ведущий в полость верхнего резервуара. Такой же вырез имеет одна из двух стеклянных пластин, между которыми полимеризуется гель. Пластины прижимают пружинными зажимами к вертикальной стенке так, чтобы оба выреза совпали. Буфер в верхний резервуар заливают до такого уровня, чтобы он через вырез покрывал верхний торец геля. При этом вторая, не вырезанная, стеклянная пластина выступает в роли передней стенки резервуара. В месте совмещения двух вырезов, между стеклянной пластиной и стенкой, должно быть осуществлено уплотнение, препятствующее вытеканию верхнего буфера. Стадиер использовал для этой цели заливку агаром. Фирма Bio-Rad в своих моделях 220 и 221 использует ту же конструкцию, но обеспечивает уплотнение с помощью резиновой прокладки. [c.29]

При анализе разделенных электрофорезом молекул ДНК широкое распространение получил метод переноса нуклеиновых кислот из агарозных гелей на нитроцеллюлозную бумагу, разработанный Е. Саузерном в 1975 г. в отечественной литературе его принято называть блоттингом по Саузерну (от англ. blotting — промокание). Сначала молекулы ДНК (или их фрагменты), разделенные по размерам электрофорезом в пластинах агарозного геля, денатурируют шелочью, после нейтрализации щелочи [c.56]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология