Техника проведения электрофореза

ТЕХНИКА ПРОВЕДЕНИЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА [c.46]

Разделение исходной границы на две или большее число границ с помощью седиментации или электрофореза показывает, что исследуемый образец содержит по меньшей мере столько же компонентов, сколько имеется границ. (При надлежащей технике проведения эксперимента [121] можно устранить возникновение ложных движущихся границ.) Если образец содержит компоненты, не поддающиеся разделению данным методом в примененных условиях, то число границ, естественно, может быть меньше, чем число компонентов. В идеальных условиях разделения и наблюдения можно открыть компонент, количество которого в смеси не превышает 1 %. [c.25]

ТЕХНИКА ПРОВЕДЕНИЯ ПРЕПАРАТИВНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ [c.117]

Метод включения в гель субстрата или затравки. При использовании высокомолекулярного субстрата или затравки инкубация геля в растворе субстрата дает лишь весьма посредственные результаты, поскольку субстрат плохо проникает в гель и реакция происходит только на его поверхности. Проблема может быть решена путем включения субстрата в гель перед проведением электрофореза. В этом случае гели после электрофореза инкубируют в буферном растворе с подходящим значением pH или во влажной камере, а затем проводят окрашивание макромолекулярного субстрата. После обесцвечивания гелей в местах локализации фермента выявляются бесцветные или менее интенсивно окрашенные полосы. При использовании техники включения субстрата в гель должны выполняться два [c.280]

Аппаратура и реактивы. Полиакриламидные гели готовят в виде стержней в стеклянных трубках или в виде пластин последний вариант более удобен при определении молекулярных масс. При электрофорезе в трубках различная электрофоретическая подвижность может быть обусловлена изменениями степени полимеризации геля, а также зависеть от длины слоя геля, условий проведения электрофореза. Техника извлечения геля из трубок разработана детально [35] показано, в частности, что извлечение гелей с концентрацией мономеров более 10% бывает затруднительным. Рекомендации по использованию аппаратуры и меры безопасности при работе с реактивами обсуждаются в разд. 1.2,1.1. [c.28]

В течение многих лет результаты трудоемких и весьма грубых анализов нуклеиновой кислоты, проведенных первыми исследователями, указывали, как полагали, на эквимолекулярные отношения двух пуриновых (аденин и гуанин) и двух пиримидиновых (урацил и цитозин) оснований. Позже применение хроматографии на бумаге [222] и, в меньшей степени, ионообменной техники дало быстрые и относительно точные методы количественного определения компонентов рибонуклеиновых кислот. При гидролизе нуклеиновой кислоты щелочью образуются мононуклеотиды, которые могут быть затем разделены либо как таковые, либо в виде нуклеозидов, после дефосфорилирования. Кислотный гидролиз, напротив, дает пуриновые основания и пиримидиновые мононуклеотиды. Спектрофотометрическое определение подвергнутых разделению компонентов после элюирования их с бумаги (с применением электрофореза [223] или хроматографии) или с ионообменной смолы позволяет получать молярные соотношения оснований. [c.404]

Многие методы, применяемые в настоящее время при экспериментальном изучении проблемы происхождения жизни, ничем не отличаются от методов, используемых в других областях, скажем в аналитической химии или биохимии белка. Так, например, наблюдая со стороны аналитическую часть исследований, в которых моделируется состав примитивной атмосферы, совершенно невозможно определить, что эти работы имеют отношение к проблеме происхождения жизни. Здесь точно так же используются хроматография на бумаге, электрофорез и другие методы, применяемые при решении самых разных химических задач. И при этом характер получаемых результатов, равно как и характер ограничений и ошибок, также будет одинаковым независимо от того, имеет данная работа отношение к проблеме биогенеза или нет. Но существуют и такие приемы, которые специфически присущи экспериментам, связанным с проблемой происхождения жизни, например заполнение и опорожнение аппаратов, предназначенных для проведения экспериментов с пропусканием искровых разрядов. Но даже и в этом случае многие индивидуальные операции, такие, как использование вакуумной техники и высоковольтного оборудования, идентичны тем, которые применяются при исследовании ряда химических и физических проблем. [c.50]

В двух предыдущих разделах были детально описаны практические приемы подготовки и проведения опытов по электрофорезу. Это позволяет приступить к подробному анализу, систематизации и сопоставлению физической сущности и потенциальных возможностей многочисленных и разнообразных вариантов этого метода, развитых за последние годы. В главах 3 и 4 мы попытались представить более или менее целостную картину бурного развития электрофоретических методов исследования белков и нуклеиновых кислот по состоянию на середину 1980 г. Главная задача изложения — выяснение существа и возможностей каждого из рассмотренных ниже вариантов. Однако следует еще раз подчеркнуть абсолютную необходимость совершенного овладения описанной выше техникой эксперимента, без которой попытки реализации самых блестящих замыслов заранее обречены на провал. [c.37]

Замечания по технике проведения перекрестного иммуно электрофореза. В оригинальной методике Лорелла [739] при электрофорезе в первом направлении рекомендуется вырезать канавку для образца размером 1ХЮ мм. Кроме того, необходимо использовать буфер, обладающий не слишком низкой ионной силой (например 70 мМ вероналовый буфер, pH8,6), и высокое напряжение (до 20 В/см) с эффективным охлаждением системы. Для электрофореза во втором направлении из центральной части электрофореграммы вырезают полоску шириной [c.255]

Явление электроосмоса, т.е. движения воды, находящейся в порах грунта, было открыто профессором Московского университета Ф.Рейссом в 1807 г. при проведении следующего опыта. В образец водонасыщенной глины, имеющей форму параллелепипеда, были вставлены две стеклянные трубки. В каждую из них было натито одинаковое количество воды и опущены электроды, а затем включен постоянный электрический ток. Уровень воды у положительного электрода стал понижаться, у отрицательного - повыщаться. Явление переноса воды через пористую диафрагму Ф.Рейсс назвал электроосмосом. Вода в трубке с отрицательным электродом была прозрачной, а в трубке с положительным электродом - мутной. Частицы глины, имея отрицательный заряд, двигались к положительному электроду. Перенос частиц глины в водной среде к положительному электроду Ф.Рейсс назвал электрофорезом. Оба эти явления щироко используются в технике и строительстве. [c.95]

Наши собственные работы, а также опубликованные данные многих других лабораторий указывают на то, что методы, основанные на технике блотинга (включая самые различные -варианты), являются весьма мощным и полезным инструментом иммунохимического анализа. Начиная с момента возникновения метода (Southern, 1975), количество публикаций, связанных с его использованием, растет буквально как снежный ком, свидетельствуя о том, что метод получил самое широкое признание среди ученых всего мира. Метод электропереноса с последующим ИФА сочетает в себе преимущества, предоставляемые очень высокой разрешающей способностью электрофореза, с исключительной чувствительностью и специфичностью методов ИФА. Большое разнообразие опубликованных вариантов метода может привести к ошибочному заключению о том, что качество переноса слабо зависит от конкретных условий эксперимента, и даже самый небрежный лаборант может легко получить хорошие результаты, не заботясь особенно о стандартизации и тщательности проведения тех или иных операций. Однако следует отметить целый ряд факторов, требующих к себе очень внимательного отношения, поскольку они могут весьма существенно сказаться на результатах, получаемых при помощи этого метода. Некоторые из них будут рассмотрены ниже. [c.352]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология