Приготовление клеточных суспензий

А. Приготовление клеточных суспензий [c.334]

IV. ПРИГОТОВЛЕНИЕ КЛЕТОЧНЫХ СУСПЕНЗИИ А. Суспензия лимфоидных клеток [c.290]

Д. Приготовление клеточной суспензии [c.323]

Сравнение окислительной способности клеточных суспензий, приготовленных из клеток, растущих на железе и сере, показало, что величина Qoj(N) для окисления [c.79]

Методика. Приготовленный материал наносили на поверхность стеклянных пластинок, которые затем помещали в пробирки. В пробирки вводили 2 мл клеточной суспензии фибробластов, которые инкубировали в термостате при температуре 37°. [c.121]

Приготовление сред для культивирования и получение клеточных суспензий [c.104]

В первую лунку, содержащую 1 мл 0,2%-ного агара в культуральной среде, добавляют клеточную суспензию, приготовленную, как описано в п. 2. Содержимое лунки быстро перемешивают пипеткой и переносят 0,5 мл в следующую лунку с последующим перемешиванием. Это повторяют до тех пор, пока в каждой лунке не окажется соответствующая порция клеток. Для удобства можно использовать нагреватель с термо-статируемой платформой, для того чтобы панель и ее содержимое имели достаточно высокую температуру, препятствующую загустеванию агара. [c.184]

Общее количество клегок и их жизнеспособность определяют одновременно. Для этого пробу клеточной суспензии разбавляют равным объемом 0,5%-ного раствора эозина Y в ЗФР и подсчитывают живые и погибшие (окрашенные) клетки в фазово-контрастном микроскопе. Затем доводят концентрацию живых клеток в суспензии до 10 /мл. Выход лимфоцитов при приготовлении взвеси из лимфоузлов варьирует в широких пределах. Но ориентировочно можно принять, что в среднем от одной мыши получается не менее 3-4-10 живых лимфоцитов при жизнеспособности клеток в суспензии 75—90%. Еслн полученные клетки используются в СКЛ в качестве отвечающих , конечную концентрацию суспензии доводят до 5 -10 клеток в 1 мл. [c.245]

Готовят последовательные разведения (10 , 10 , 10 , 10" ) исходной клеточной суспензии, перенося 2,5 мл суспензии в 22,5 мл среды, содержащей 5% ЭТС. Каждым разведением в объеме 5 мл засевают четыре чашки (диаметром 5 см). Культуры инкубируют в термостате при 37 °С, (Если исходная культура содержала 5-10 клеток, в приготовленных разведениях окажется 5-10 , 5-10 , 5-10 и 5-102 клеток соответственно.) При большой плотности исходной суспензии необходимо приготовить еще одно разведение в любом случае в максимальном. разведении не должно содержаться более чем 50—100 кл/мл. [c.245]

Введенные тимоциты выявляются в основном в селезенке. Удаление такой селезенки увеличивает иммунный ответ, а добавление приготовленной из нее клеточной суспензии к нормальным селезеночным [c.187]

Удаление селезенок и приготовление клеточных суспензий проводят в стерильных условиях. Эритроциты лизируют в буфере трис-НС1-аммоний, а оставшиеся интактными клетки дважды промывают СР и ресуспендируют в среде RPMI 1640, содержащей 5% СПК. Клетки промывают два раза СР и жизнеспособные клетки (10 ) ресуспендируют в 5 мл среды RPMI 1640, содержащей 20% СПК. [c.306]

Клетки можно иммобилизовать путем включения в заранее подготовленную или образованную оболочку. Такой оболочкой может служить просто граница раздела фаз между двумя несмешивающимися жидкостями. В этом случае клеточная суспензия эмульгируется в органическом растворителе и затем ресуспендируется в виде капель в водной фазе. Примером заранее приготовленной оболочки является полз проницаемая мембрана, используемая для микро- и ультрафильтрации. При этом питательные вещества легко диффундируют к клеткам, находящимся за мембраной[141]. [c.163]

В процессе приготовления питательной среды для культивирования производственных штаммов ауксотрофных мутантов, обладающих способностью к сверхсинтезу аминокислоты лизина, в качестве источника углерода обычно используют смеси, включающие уксусную кислоту и свекловичную мелассу, в качестве источника азота — соли аммония, мочевину, кукурузный экстракт, гидролизаты дрожжей. Кроме дефицитных аминокислот, которые не синтезируются клетками мутантов, в питательную среду также добавляют необходимые для жизнедеятельности микроорганизмов макро- и микроэлементы (Р, Mg, Ре, Са, Мп и др.) и витамины (витамины группы В, биотин и др.). В процессе культивирования микроорганизмов обеспечивается подача стерильного воздуха с помощью специальных турбинных мешалок, для предотвращения вспенивания субстрата и клеточной суспензии в среду культивирования добавляется пе-ногаснтель. Схема технологической линии по производству лизина показана на рис. 7.4. [c.277]

Твердые культуры относительно свободны от мак-ромолекулярных компонентов и полностью свободны от частиц питательной среды, так как последние обычно находятся внутри агарового геля. Более того, твердые культуры относительно свободны от низкомолекулярных питательных веществ и продуктов метаболизма микроорганизмов, поскольку для их растворения необходимы значительно большие объемы среды. Следовательно, культуры, выращенные на твердой среде, особенно полезны для приготовления антигенов или для других целей, когда важна чистота клеточной суспензии. [c.363]

Предварительно определяют концентрацию клеток. Если эта концентрация ниже 3-10 клеток в 1 мл, то приступают к следующему этапу. Если она выше, то предварительно разводят клеточную суспензию раствором Норриса— Пауэлла, приготовленным следующим образом. К 1 л воды добавляют 5 мл формалина (40%-ного формальдегида) и доводят pH (можно по индикаторной бумаге) до 7,2—7,4 с помощью твердого Na2HP04. Количество добавляемого фосфата зависит от содержания в формалине муравьиной кислоты. На кончике шпателя добавляют столько додецилсульфата натрия, сколько необходимо для прекращения быстрого ло-пания пузырьков, образующихся при продувании воздуха через раствор с помощью пастеровской пипетки. [c.452]

ЛИЧНЫХ разведений отдельно, а не совместно оправдано тем, что мы хотели избежать больших ошибок. Сравнивая результаты для различных уровней разведения, получают некоторые оценки разброса из-за дополнительного разведения суспензии с помощью пипетки и других источников ошибок, которые не учитываются при расчете ошибки по Пуассону. Если этот разброс представляет интерес, его можно измерить более прямо с помощью независимых разведений одной и той же клеточной суспензии. Допустим, что в каждую из серии 12 чашек внесено по 0,1 мл независимо приготовленных разведений 10 исходной суспензии после инкубации в чашках выросли следующие количества колоний 534, 580, 760, 643, 565, 498, 573, 476, 555, 634, 514, 694. Их сумма равна 7026, а среднеквадратичное отклонение по Пуассону равно У7026 = 83,8. Среднее этих чисел равно 585, а среднеквадратичное отклонение по Гауссу составляет 81,2. Расчет количества бактерий в исходной суспензии и двух оценок ошибки дает [c.494]

Мышей забивают путем цервикальной дислокации, извлекают селезенку и помещают ее в охлажденный СР. Для приготовления клеточной взвесн селезенку продавливают через стальное сито, погруженное в СР. Суспензию оставляют на 3 мни на столе, чтобы осели крупные клеточные агрегаты. Затем клеткн, содержащиеся в надосадочной жидкости, отмывают один раз. Для удаления эритроцитов применяют раствор Гея (Gey, Gey,. 1936) (около 3 мл на одну селезенку, обрабатывают 5 мни на льду). После этого клеткн интенсивно отмывают ЗФР, облучают (3300 рад) и гаптснизнруют. Для конъюгации берут такие концентрации гаптенов, которые обычно применяются прн иммунизации in vivo и in vitro. [c.243]

Если не указано иное, то на всех этапах клетки центрифугируют 15 мин при 150g и 4°С. Паховые, подмышечные, шейные и брыжеечные лимфатические узлы и (или) селезенки извлекают асептически, помещают в холодную среду и измельчают ножницами. Для освобождения лимфоцитов измельченную ткань осторожно раздавливают в пластиковой пробирке при помощи свободно входящего в нее тефлонового гомогенизатора. Для удаления агрегатов и детрита клеточные суспензии фильтруют через 10-миллилитровый шприц, наполовину заполненный неплотно упакованной найлоновой или хлопковой ватой. Фильтрацию производят при помощи поршня, оставшиеся на вате клетки вымывают 5—8 миллилитрами среды. (Этот метод отличается от приготовления клеточной взвеси, освобожденной от В-лимфоцитов, из ткани лимфатических узлов, описанного в разд. III, А, 3.) Затем собранные клетки осаждают центрифугированием, надосадочную жидкость, содержащую жир, тщательно удаляют, а клетки ресуспендируют в 10 мл свежей среды. Эту операцию повто- [c.301]

I, в который добавлен ЭГТА (0,3—0,5 мг/мл). ЭГТА действует как релаксант и эффективно подготавливает ткань к последующему воздействию коллагеназы. Затем кусочки ткани переносят в бюкс с находящимся в нем остекленным магнитом и заливают 5—10 мл свежеприготовленного раствора трипсина (на растворе I, концентрация 1 мг/мл). Бюкс помещают в термостат (36 °С) на магнитную мешалку при вращении магната со скоростью 50—60 об/мин. Через 1 ч переваривание ингибируют соевым ингибитором трипсина (3 мг/мл). Затем раствор трипсина заменяют раствором коллагеназы (0,4—0,5 мг/мл, приготовленным на растворе II, в котором содержатся ионы Са +, активирующие коллагеназу). Через 30—40 мин клеточную суспензию осаждают центрифугированием (1000 об/мин) и осадок, состоящий из изолированных клеток, ресуспендируют в растворе I (рис. 35). [c.147]

Получение препарата II изозима гексокиназы. К растворимой клеточной фракции добавляют при помешивании суспензию ДЭАЭ-целлюлозы из расчета 1 мл фракции — 5—10 мг сухой ДЭАЭ-целлюлозы. После 10-минутной инкубации суспензию фильтруют с помощью водоструйного насоса на воронке Бюхнера. Осадок ДЭАЭ-целлюлозы с адсорбированной гексокиназой промывают К-фосфатным буфером, содержащим 40 мМ K I (объем равен половине исходного объема растворимой клеточной фракции). Затем гексокиназу элюируют 200 мМ КС1, приготовленным на К-фосфатном буфере. В целях концентрирования препарата гексокиназы объем элюирующего раствора уменьшен в 3 ра за по отношению к исходному объему растворимой клеточной фракции После 10-минутной инкубации элюат отделяют на воронке Бюхнера [c.375]

Клетки суспендируют в растворе, обогащенном белком, например в ЗФР с 3% БСА или 50% СПК- Концентрация клеток в суспензии может быть различной в зависимости от их типа. При изучении иммуноглобулинов в плазматических клетках, которые составляют лишь малую долю клеточной популяции селезенки, лимфатических узлов или других лимфоидных органов, обычно готовят густую суспензию с плотностью 4-10 клеток в 1 мл. Напротив, если ожидаемая доля клеток, несущих иммуноглобулины, значительно выше (как, например, в суспензии клеток солидной плазмоцитомы или костного мозга при множественном миеломатозе, а также в случае перевиваемых лимфобластов и стимулированных культур лимфоцитов), концентрация клеток не должна превышать 10 в 1 мл. Для приготовления мазков очень удобно пользоваться цитоцентрифугой. Центрифуги этого типа (например, фирмы ЗЬап(1ап, Лондон) позволяют собрать клетки в монослой на участке диаметром 5—7 мм и окрасить их небольшим объемом (10—20 мкл) меченой антисыворотки. [c.177]

В работе необходимо использовать клеточные линии, приспособленные к росту в суспензии, например HeLa S3 (АТСС No. L 2.2) или КВ (АТСС No. L 17). Как правило, клетки вначале культивируют в монослое по стандартной методике в подходяш,ей среде с 7,5% СНТ. Через определенное время готовят 200 мл суспензии (в среде для суспензионных культур, содержаш,ей 7,5% СНТ) с концентрацией клеток З-Ю /мл. Надо отметить, что используемые клетки, как правило, плохо образуют плотный монослой. Приготовленную суспензию переносят в 500-мл флакон, который помеш,ают в описанный выше аппарат и культивируют два дня при 37 °С. Затем подсчитывают число клеток. При достижении плотности 6-10 кл/мл суспензию клеток вдвое разводят свежей средой, содержащей ТС. [c.258]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология