Клеточные фракции

Получение растворимой клеточной фракции скелетных мышц крысы. Все процедуры по получению фракции проводят при О С. Среда выделения 50 мМ трис-НС1 буфер, pH 7,5. [c.334]

Мышцы ( 5 г) задних конечностей декапитированного животного помещают в ледяную среду выделения. После охлаждения ткань обсушивают фильтровальной бумагой, переносят в чашку Петри, стоящую на льду, очищают от жира и соединительной ткани, измельчают ножницами. Навеску тканевой кашицы гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе Поттера с тефлоновым пестиком, имеющим нарезку в 6-кратном по отношению к весу ткани объеме среды выделения. Тканевый гомогенат центрифугируют при 15000 д в течение 20 мин. Супернатант после центрифугирования, представляющий собой 14%-нук> растворимую клеточную фракцию, фильтруют через 4 слоя марли и хранят порциями при —5°С в течение 2 нед. Размораживают при комнатной температуре и перед определением активности пируваткиназы разводят средой выделения до конечного разведения 1 200. [c.334]

Определяют активность пируваткиназы в растворимой клеточной фракции мышц в день выделения и после хранения препарата при -5"С. [c.335]

Получение растворимой клеточной фракции скелетной и сердечной мышц крысы [c.337]

Все процедуры по получению клеточных фракций проводят при [c.337]

Навеску мышечной кашицы массой 2—5 г (получение см. на с. 49) гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе Поттера с тефлоновым пестиком, имеющим нарезку, в 6-кратном по отношению к весу ткани объеме среды выделения. Тканевый гомогенат центрифугируют при 15 000 д в течение 20 мин. Супернатант, представляющий собой 14%-ную растворимую клеточную фракцию, фильтруют через [c.337]

Определяют активность лактатдегидрогеназы в растворимой клеточной фракции скелетной и сердечной мышц крысы в день выделения и после хранения препарата при —5° С. [c.339]

Получение растворимой клеточной фракции печени крысы. Все [c.352]

Получение митохондриальной фракции. Тканевый гомогенат центрифугируют при 600 в течение 10 мин для удаления ядер и обломков клеток. Полученный супернатант фильтруют через 4 слоя марли и центрифугируют при 10 ООО в течение 10 мин. Полученный осадок Митохондрий промывают средой выделения от примеси растворимой клеточной фракции. С этой целью осадок осторожно суспендируют с помощью пипетки в небольшом объеме среды выделения (митохондрии из 1 г ткани в 0,2 мл среды). Затем суспензию разводят средой выделения в 10 раз и центрифугируют при 10 ООО в течение 10 мин. Полученную фракцию промытых нативных митохондрий окончательно суспендируют в нужной среде из расчета митохондрии из 1 г ткани в 5 мл среды Фракцию нативных митохондрий (в 0,25 М сахарозе, pH 7,5) хранят при 0°С и используют в день выделения. [c.352]

Для фермента растворимой клеточной фракции и солюбилизированного из митохондрий исследуют профиль рН-зависимости активности в диапазоне изменений pH 6,5—9,0. Вследствие замены фосфатного буферного раствора трис-НС1 буфером в области изменения pH 7,5—8,0 определение активности фермента проводят в обеих буферных системах. При интерпретации полученных данных делают поправку с учетом влияния состава буферной системы на активность фермента. [c.354]

Тканевую кашицу (приготовление см. на с. 65) взвешивают и переносят в стакан гомогенизатора Поттера. Добавляют среду выделения из расчета 5 мл среды на 1 г ткани и гомогенизируют в течение 30 с с помощью тефлонового пестика без нарезки. Полученный гомогенат центрифугируют при 20 000 в течение 15 мин. Супернатант представляет собой 16%-ную растворимую клеточную фракцию. Препарат фильтруют через 4 слоя марли и хранят порциями при —5°С в течение 2 нед. Размораживание растворимой клеточной фракции проводят при комнатной температуре. [c.355]

Сообщается [326] о наличии метилированных пуринов в клеточных фракциях печени мышей и опухолевых тканей установлено, что растворимая фракция цитоплазмы печени мышей и грудной аденокарциномы мышей содержат значительно больше этих оснований, чем митохондриальная или микро- сомная фракции. Были идентифицированы следующие пуриновые основания [c.141]

Молярные соотношения оснований в РНК различных клеточных фракции [c.45]

Для освобождения белка, прочно связанного с какими-нибудь клеточными частицами, нанример с митохондриями, приходится прибегать к обработке растворителями липидов или детергентами. В таких случаях первой стадией очистки является, ио существу, выделение определенной клеточной фракции, содержащей белок (см. гл. IX). [c.79]

НЕКОТОРЫЕ СВОЙСТВА ВЫДЕЛЕННЫХ КЛЕТОЧНЫХ ФРАКЦИЙ [c.253]

Ферменты, локализованные на мембране эндоплазматической сети, 1<ата-лизируют большое число чрезвычайно важных биосинтетических реакций, К ним относятся, в частности, ключевые реакции биосинтеза стероидов, фосфолипидов и сложных полисахаридов. Особенно характерны для этой клеточной фракции реакции гидроксилирования многих органических мо.ле-кул (различные алифатические и ароматические амины, стероиды и т. д.). [c.253]

МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ КЛЕТОЧНЫХ ФРАКЦИЙ, [c.153]

Метод выделения клеточных фракций, обогащенных нейронами и клетками глии [c.153]

Состав реакционной среды объемом 3 мл 100 мМ трис-НС1 буфер, pH 7,5 фосфоенолпируват 0,8 мМ АДФ 3 мМ Mg l2 6 мМ КС1 100 мМ НАДН 0,1 мМ лактатдегидрогеназа 1 инт. ед. растворимая клеточная фракция 0,02—0,1 мл. Контрольная проба не содержит Mg—АДФ. Реакцию начинают добавлением фосфоенолпирувата. [c.334]

Изучают термостабильность лактатдегидрогеназы из разных источников, нагревая фермент (растворимая клеточная фракция) при 60°С в течение 10, 20, 30 мин. Оценивают защитный эффект 0,5 мМ НАДН от термоинактивации. С целью учета стабилизирующего влияния на лактатдегидрогеназу других белков цитозоля в качестве объекта исследования используют растворимую клеточную фракцию в разведении 1 7 и 1 200. [c.339]

Навеску (5 г) тканевой кашицы (приготовление см. на с. 65) взвешивают и переносят в стеклянный стакан гомогенизатора Поттера. Добавляют среду выделения из расчета 9 мл среды на 1 г ткани и гомогенизируют в течение 30 с с помощью тефлонового пестика без нарезки. Полученный гомогенат центрифугируют при 20 ООО в течение 15 мин. Супернатант после центрифугирования представляет собой 10%-ную растворимую клеточную фракцию. Препарат фильтруют через 4 слоя марли и хранят порциями при —5°С в течение 2 нед. Размораживание растворимой клеточной фракции проводят при комнатной температуре. Перед определением активности аспартатаминотрансферазы препарат фермента разводят средой выделения до конечного разведения 1 100. [c.352]

Определяют активность аспартатаминотрансферазы в растворимой клеточной фракции печени в день выделения и после хранения. [c.353]

Определяют активность фруктозо-1,6-дифосфатазы в свежевыделенной клеточной фракции и после хранения препарата при —5°С. [c.356]

Получение растворимой клеточной фракции скелетных мыищ крысы. Все процедуры по получению препаратов гексокиназы проводят при 0°С. [c.374]

Навеску ( 5 г) измельченной мышечной ткани (получение см. на с. 49) гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе Поттера с тефлоновым пестиком с нарезкой. Тканевый гомогенат после 20-минутной инкубации при помешивании центрифугируют при 15 000 g в течение 20 мин. Супернатант после дентрифугирования представляет собой 14%-ную растворимую клеточную фракцию. Препарат фильтруют через 4 слоя марли и хранят при О °С в течение суток. [c.375]

Получение препарата II изозима гексокиназы. К растворимой клеточной фракции добавляют при помешивании суспензию ДЭАЭ-целлюлозы из расчета 1 мл фракции — 5—10 мг сухой ДЭАЭ-целлюлозы. После 10-минутной инкубации суспензию фильтруют с помощью водоструйного насоса на воронке Бюхнера. Осадок ДЭАЭ-целлюлозы с адсорбированной гексокиназой промывают К-фосфатным буфером, содержащим 40 мМ K I (объем равен половине исходного объема растворимой клеточной фракции). Затем гексокиназу элюируют 200 мМ КС1, приготовленным на К-фосфатном буфере. В целях концентрирования препарата гексокиназы объем элюирующего раствора уменьшен в 3 ра за по отношению к исходному объему растворимой клеточной фракции После 10-минутной инкубации элюат отделяют на воронке Бюхнера [c.375]

Получают препарат II изозима гексокиназы из растворимой клеточной фракции скелетных мышц крысы. После определения белка микробиуретовым методом оценивают удельную активность фермента, а также степень очистки. При этом учитывают, что на долю II изозима гексокиназы приходится 60% от общего содержания фермента в растворимой клеточной фракции скелетных мышц. [c.376]

Потребность реакции в Н2О2 удовлетворяется за счет Н2О2-генерирующей системы. Свободная перекись водорода неактивна. К неочищенным клеточным фракциям достаточно добавить гликолевую или любую другую из многочисленных L-a-оксикислот, так как в неочищенных препаратах присутствует гликолатоксидаза. [c.310]

Благодаря таким процедурам удается избежать применения хотя и изящных, но слоншых и часто весьма трудоемких методов гисто- и цитохимии, заменив их обычными биохимическими методами. В принципе эти последние позволяют получить полную химическую и функциональную характеристику отдельных клеточных фракций. Однако следует подчеркнуть, что подлинное понимание клеточных процессов может быть достигнуто лишь на основе сочетания двух независимых друг от друга линий исследования, ведущих к решению одной и той же общей проблемы структуру и функцию необходимо изучать параллельно, а явления, наблюдаемые на изолированных компонентах, следует постоянно сравнивать с аналогичными явлениями в интактной клетке и таким путем проверять свои наблюдения. [c.239]

Даже при 25°, на 5—6-й день роста, когда наблюдался резкий спад в концентрациях токсина в клетках, его увеличения в среде не наблюдалось. Это наблюдение впоследствии оказалось очень важным, так как означало, что нужно обрабатывать только клеточную фракцию и отбросить огромные объемы культуральной жидкости. Результаты исследований по влиянию температуры и времени выращивания на рост и развитие М. aeruginosa штамм NRS-1 представлены на рис. 67, а влияние интенсивности светового потока, температуры и аэрации на рис. 68. Количество быстрого смертельного фактора выражено в М. Е. [c.151]

Эйди и Туба [3] исследовали распределение фермента, расщепляющего зарин, по фракциям, полученным при центрифугировании гомогенатов печени и почек пяти видов млекопитающих. Как правило, активность убывала в следующем порядке надосадочная жидкость > микросомы > митохондрии > ядра . Фракция ядер (содержащая ядра, осколки клеток и неразрушенные клетки) обычно имела ничтожную активность, а активность митохондрий никогда не превышала Vj общей активности. Характер распределения фермента по клеточным фракциям у разных видов животных был примерно одинаковым. Не установлено корреляции между общей гидролизующей активностью и устойчивостью животных к отравлению зарином, хотя виды животных подбирались с учетом этих различий — чувствительные виды кролик, морская свинка и обезьяна устойчивые крыса и мышь. [c.150]

Фосфатидилхолины (лецитины, 1,2-диацил-8П-глицерофосфорилхолины) являются наиболее распространенной структурной компонентой мембран и составляют около 50% от общего содержания липидов клеточных фракций. [c.280]

С целью изучения распределения бора в растительной клетке Дж. Скок и У. Мак-Ильрат определяли содержание бора в различных клеточных фракциях, выделенных путем центрифугирования. Согласно полученным ими данным, ядра, пластиды и надосадочная жидкость содержат больше бора, чем митохондрии и микросомы. Авторы отмечают, что между содержанием бора в диализируемой (несвязанной) фракции надосадоч-ной жидкости и проявлением симптомов борного голодания растений имеется определенная связь. Симптомы борной недостаточности проявлялись после того, как эта сравнительно небольшая часть несвязанного бора была использована растением. [c.35]

Литературные данные о биохимии нейроглии и системы нейрон—нейроглия еще малочисленны. Представления о химизме глии зачастую базируются на косвенных данных результатах биохимического анализа серого и белого вещества мозга, культуры тканей, глиальных опухолей мозга. Малочисленны и прямые данные, полученные как микробиохими-ческими методами на одиночных изолированных клетках или на клеточных фракциях, обогащенных глиальными элементами, так и цитохимическими методами. Канчдый из перечисленных методов исследования имеет свои недостатки, но данные, полученные при их использовании, показывают, что нейроглия представляет собою метаболически активную популяцию клеток мозга с определенными особенностями обмена веществ. Недостаточность накопленного материала не позволяет пока установить, всем ли нейрогли-альным клеткам свойственны одни и те же черты химизма, или последний имеет свою специфику в разных типах клеток и в разных образованиях мозга. [c.127]

Большим препятствием па пути изучения биохимии клеточных элементов центральной нервной системы — нейронов и клеток глии — и выяснения их метаболических взаимоотношений является тесная структурная связь между ними. Из-за трудности отделения клеток друг от друга до недавнего времени отсутствовали методы, дающие возможность получать изолированно клетки каждого типа в количествах, достаточных для биохимических исследований. Такая во.зможность появилась в результате разработки техники выделения клеточных фракций с преимущественным содержанием нейронов или клеток глии. Первая попытка получения таких фракций относится к 1958 г., когда Кори с сотр. (Когеу et al., 1958) выделили из белого вещества мозга ягненка фракцию, обогащенную клетками глии. Особенно интенсивная и успешная разработка методов выделения обогащенных клеточных фракций и их биохимическое изучение наблюдается в последние 5 лет. [c.153]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология