Белки, гель-фильтрация частичный

При выделении интерферона 60 мл раствора частично очищенного белка, полученного после фракционирования на сефадексе G-100 в 4 М мочевине, наносили на ОФ-колонку [26]. Патроны Sep-Pak применяли для отделения пептидов от мочевины после гель-фильтрации в растворах муравьиной кислоты [31]. Элюирование проводили в ацетате, содержащем ацетонитрил. [c.213]

Присутствие ММФ в частично очищенных препаратах НАД-киназы из сердца голубя было продемонстрировано также методом гель-фильтрации на колонках с сефадексом G-200. На рис. 1 представлены профили элюции двух препаратов НАД-кина-зы. Можно видеть, что в процессе гель-фильтрации с колонки сходит один асимметричный пик белка. Активностью обладают фракции с молекулярными весами 270000—240 000, 230000—210000, [c.138]

Мы не нашли в доступной нам литературе аналогичных данных о разделении при УЦ в присутствии субстратов олигомерных белков на каталитически активные и неактивные формы. Возможно, что отсутствие подобных результатов объясняется тем, что при исследовании четвертичной структуры ферментов методом УЦ в условиях протекания ферментативной реакции место локализации фермента в центрифужной пробирке определяли исключительно по активности. По этой причине присутствие неактивной белковой фракции могло остаться просто незамеченным. Между тем нельзя, по-видимому, полностью исключить возможности существования и для -других ферментов каталитически активной и неактивной форм. Высказанное соображение можно проиллюстрировать следующим примером. Из данных литературы известно, что молекулярный вес гомогенного препарата НАД-киназы из печени голубя, определенный методом гель-фильтрации, равен 270 000 [19]. Мы анализировали методом УЦ в присутствии субстратов частично очищенные препараты фермента из печени голубя и не смогли обнаружить каталитически активной формы с таким высоким молекулярным весом. Однако 60% активности [c.157]

Возможно идентифицировать и смеси коротких пептидов, получаемых после обработки белков ферментами, частичного разделения с помощью гель-фильтрации и ионообменной хроматографии. Сопоставление масс-спектров, полученных при различных температурах источника, а также использование полного метилирования и дейтерометилирования, обычно позволяют правильно идентифицировать пики исходных пептидов. [c.278]

Комплексы сывороточных белков с другими веществами белковой природы могут быть также выделены с помощью гель-хроматографии, как это было уже показано на примере комплекса гемоглобин — гаптоглобин (фиг. 16) [49]. Еще проще количественно определить емкость гемоглобина (способность гемоглобина к комплексообразованию) на сефадексе G-100 [50]. Фракция макроглобулинов (выделение на сефадексе G-200), очевидно, содержит белок, связывающий трипсин [51, 52]. Активность при этом сохраняется лишь частично [51, 52]. Комплексы антиген — антитело часто выделяли на пористых гелях, а затем после разложения на составные части исследовали более подробно (см. литературу, приложение IX). В предыдущем разделе на примере инсулина были рассмотрены возможности изучения растворимых иммунокомплексов. Иммунологические методы в сочетании с гель-фильтрацией играют важную роль в исследовании строения Y-глобулинов. Среди работ на эту тему (см. литературу, приложение X) имеются блестящие исследования, посвященные восстановительному расщеплению и выделению L- и Н-цепей, их рекомбинации, ограниченному действию папаина и, наконец, иммунологическим свойствам интактного белка и его фрагментов. [c.218]

Сефадокс представляет собой полисахарид декстран, цепи которого соединены поперечными связями, образуя молекулярное сито . Чем больше поперечных сшивок, тем меньше размеры ячеек молекулярного сита . Молекулы небольших размеров диффундируют внутрь набухших гранул, а крупные белковые молекулы проходят сквозь колонку. Следует отметить, что при гель-фильтрации на сефадексах может происходить и частичное фракционирование белков. [c.199]

Пептидная связь Asp-Pro особенно лабильна в условиях мягкого кислотного гидролиза 58, 73, 97, 108]. Избирательное расщепление может идти в кислой среде при гидролизе пепсином, при обработке белка раствором бромоциана в 70%-ной муравьиной кислоте или в процессе очистки пептидов гель-фильтрацией в водной уксусной или муравьиной кислоте. Частичный гидролиз связи Asp-Pro наблюдался, в частности, при обработке глутаматдегидрогеназы бромоцианом в 70%-ной муравьиной кислоте [140] в этой же работе обсуждается вероятный механизм кислотного гидролиза пептидной связи Asp-Pro. [c.93]

Равновесие - -N N—С в экстрактах, по-видимому, настолько сдвинуто вправо [52], что возникает серьезная проблема полного разделения С и N. Она осложняется тем, что каталитический белок, взятый отдельно, весьма нестабилен при очистке. Методами гель-фильтрации [51], аффинной хромотографии Л -белка [6] или. аденилатциклазы, имеющей сродство к кальмодулину [53, 54], удается добиться лищь частичного разделения Л -белка и каталитического белка. [c.99]

Во время предварительной дефекации прибавлением извести, содержащейся в соке первой сатурации, достигают значения рН=11, что соответствует условиям оптимальной коагуляции коллоидов. Но этого количества извести еще недостаточно. Избыток извести, как мы увидим позднее, необходим для первой сатурации. В то же время прибавление всей извести сразу является нежелательным, так как при этом происходят явления пептизации вследствие образования свободной щелочи. Пептизация, т. е. частичное превращение в гели и в золи осадков, состоящих из несахаристых веществ, вредна именно тем, что образующиеся золи и гели мешают в дальнейшем фильтрации усиливается окраска сока, а также увеличивается содержание растворимых соединений кальция. Эти обстоятельства и вызывают необходимость прибавлять известь в два приема сначала при добавлении небольшого количества извести (до рН=11) коллоиды (белки) коагулируют необратимо и при дальнейшем прибавлении извести (при увеличении pH) в раствор уже не переходят. [c.131]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология