Альбумин на кизельгуре

Приготовление покрытого метилированным альбумином кизельгура (МАК). [c.117]

Метилированный альбумин Кизельгур [c.122]

В настоящее время существует несколько методов фракционирования РНК. Наибольшее распространение получили хроматографические методы фракционирования высокополимерных нуклеиновых кислот на метилированном альбумине — кизельгуре (МАК) [777] и порошковой целлюлозе [337], которые позволяют фракционировать РНК соответственно их молекулярному весу и вторичной структуре. [c.183]

ДНК отделяют от РНК, высших олигонуклеотидов и белка методом адсорбционной хроматографии на гидроксиапатите, метилированном альбумине-f-кизельгур (МАК), полилизине+ + кизельгур (ПЛК) или нитроцеллюлозе. Эти же сорбенты с успехом применяют для разделения нативной (двунитевой) и денатурированной (однонитевой) ДНК. [c.69]

Универсальным сорбентом для фракционирования нуклеиновых кислот является кизельгур, покрытый метилированным альбумином. Детальная методика его получения приведена далее 53]. [c.70]

ИЭТ — изоэлектрическая точка МА — метилированный альбумин МАК — метилированный альбумин, сорбированный на кизельгуре или целите [c.5]

В настоящее время существует ряд методов колоночной хроматографии НК- Среди них особенно широкое распространение получили методы с применением слабых анионообменников. Среди этих методов особый интерес представляет колоночная хроматография НК на метилированном альбумине, сорбированном на кизельгуре или целите. [c.76]

Для фракционирования ДНК могут быть использованы и хроматографические методы. Наибольшее распространение получила хроматография на колонках с метилированным альбумином на кизельгуре (МАК) или с фосфатом кальция (оксиапатитом) [c.31]

Хроматография нуклеиновых кислот на кизельгуре. со слоем основных полиаминокислот со с оем полинуклеотидов со слоем метилированного альбумина [c.332]

Из этих исследований видно, что для разделения 23 S и 16 S РНК метод электрофореза в геле по чувствительности, разрешающей способности и скорости анализа превосходит метод центрифугирования в градиенте плотности сахарозы или хроматографию на колонке метилированного альбумина на кизельгуре (МАК). Используя метод диск—электрофореза, после окрашивания или сканирования в УФ-свете можно обнаружить уже 1 мкг нерадиоактивной РНК, тогда как в случае метода центрифугирования в градиенте плотности сахарозы или хроматографии на МАК нужны в 100 раз большие количества. Применяя капилляры или [c.246]

Слой 1. Суспензию 8 г промытого кизельгура в 40 мл 0,1 М забуференной соли кипятят и затем охлаждают. Добавляют 2 мл 1%-ного водного раствора метилированного альбумина, перемешивают и затем добавляют 15 мл 0,1 М забуференного солевого раствора. Суспензию переносят в колонку, на дно которой помещают слой ваты или бумажного порошка высотой около 2 см. Избыток белка удаляют из колонки, промывая ее 0,1 М забуференной солью. [c.118]

Колонки с метилированным альбумином на кизельгуре (МАК) [c.215]

Для трехслойной колонки (2X40 см) используют три суспензии сорбента для нижнего слоя получают сорбент из 8 г кизельгура и 2 мл 1%-ного раствора метилированного альбумина для второго слоя к 10 мл суспензии для первого слоя добавляют 6 г кизельгура в 40 мл 0,4 М раствора хлорида натрия в буферном растворе третий (верхний) слой готовят из одного кизельгура (1 г кизельгура в 10 мл 0,4 М раствора хлорида натрия в том же буферном растворе). Три порции сорбента вносят в указанной последовательности в колонку, нижняя часть кото- [c.71]

Суммарный препарат НК в растворе 0,3 М Na l вносят в колонку с метилированным альбумином на кизельгуре. В этом случае ДНК элюируется с колонки при определенном градиенте концентрации Na l (0,5—0,7 М), а РНК вымывается в- других зонах элюции. Кроме того, ДНК можно отделить от низкомолекулярной РНК пропусканием через колонку сефадекса G-200 [13]. [c.57]

В качестве основы для метилированного альбумина чаще применяется кизельгур, реже целит, еще реже сидикагель. Обычно используется особым образом приготовленный кизельгур, выпускаемый американской фирмой под названием Hyflo Super ell . Трудность в получении этого препарата является одной из причин ограниченного применения метода колоночной хроматографии на метилированном альбумине в наших лабораториях. Мы используем препарат кизельгура, полученного из отечественного сырья. Способ его приготовления описан ниже. [c.77]

Кроме описанной выше колонки, можно применять предложенную нами препаративную колонку З.Х25 см с аналогичным устройством. В ней также создаются три слоя, но с содержанием кизельгура в 2,5 раза больше, метилальбумина — в 3 раза больше, чем в описанной выше колонке. Соответственно рабочие слои препаративной колонки содержат больше метилированного альбумина и обладают значительной емкостью. [c.82]

Упрощенные способы снаряжения колонки. Наряду с описанными способами существует несколько упрошенных вариантов снаряжения колонки. Наибольшее распространение получила однослойная колонка МАК, предложенная Суеока и Ченгом [52], для приготовления которой берут 10 г кизельгура, суспензируют в 50 мл 0,1 М Na l pH 6,7 и затем кипятят. После охлаждения к суспензии добавляют 2,5 мл 1%-ного водного раствора метилированного альбумина, затем перемешивают и добавляют 10 мл 0,1 М Na l pH 6,7. Промывку колонки перед работой и сам процесс эксперимента проводят по Манделлю и Герши. [c.82]

Для более глубокого исследования характера воздействия ионола на биосинтез РНК нами было проведено хроматографическое разделение препаратов тотальной РНК, выделенных из асцитных клеток животных, на колонках с метилированным альбуМином, адсорбированным на кизельгуре (МАК) в градиенте Na l [14], Выделение РНК из асцитных клеток проводили по методике Шеррера и Дарнеллга с пятикратной депротеинизацией без поли- [c.345]

Существует много различных систем для хроматографического разделения смесей РНК. К ним относятся колонки из фосфата кальция [10], замещенных целлюлоз (ДЭАЭ или эктеола) [11, 12], полиакриламида и сефадекса [13]. Одной из наиболее удобных является колонка из метилированного альбумина, нанесенного на кизельгур [14—16], с которой после элюции возрастающими концентрациями хлористого натрия удается получить 3 ника РНК. Один из этих пиков соответствует 5-РНК, два других — г-РНК (фиг. 7). [c.41]

Наилучшим адсорбентом для разделения нуклеиновых кислот оказался метилированный альбумин на кизельгуре (МАК) [45]. Этот адсорбент представляет собой альбумин, свободные карбоксильные группы которого этерифицированы метиловым спиртом. В связи с этим альбумин приобретает основные свойства и работает как слабый анионит с малой емкостью, но специфической матри- [c.336]

Колонка для фракционирования нуклеиновых кислот состоит из трех слоев. Нижний слой содержит примерно 2,5 мг метилированного альбумина на 1 г кизельгура, а средний слой — 0,7 мг i г кизельгура. Верхний слой кизельгура является защитным и не содержит альбумина. Суспензию, кизельгура (Hyflo Super el) в забуференном солевом растворе предварительно кипятят и затем охлаждают. [c.114]

Нижний слой, к суспензии 8 г кизельгура в 40 мл 0,1 М Na l добавляют при перемешивании 2 мл 1%-ного метилированного альбумина и затем еш е 15 мл забуферепного солевого раствора. Суспензию переносят порциями в хроматографическую колонку диаметром 2 см и уплотняют, как это было ун е описано. [c.115]

Лерман (1] впервые использовал колонки с кизельгуром, покрытые метилироваипым сывороточным альбумином, для фракционирования ДНК пневмококков. Позднее этот метод был усовершенствован Манделем и Херши [2] и использован для фракционирования ДНК и РНК. Многие исследователи успешно использовали модифицированный метод для отделения РНК от ДНК, фракционирования различных видов РНК или ДНК и фракционирования тРНК. [c.116]

Суспензию 10 г кизельгура в 50 мл 0,1 М забуференного солевого раствора кипятят, после охлаждения добавляют 2,5 мл 1%-пого метилиро-ланного альбумина и перемешивают. [c.119]

Нри хроматографировании на колонках с кизельгуром, покрытым метилированным альбумином (МАК) (1], происходит фракционирование ДНК по величине [2], чпслу водородных связей [2—4] и составу оснований [3, 4]. [c.122]

Кизельгур, покрытый метилированным альбумином (МАК), также приготавливают по методу Манделя и Херши [2] В качестве второго слоя в колонке используется промытый и покрытый белком кизельгур (МАК). МАК приготавливают следующим образом. Суспензию 20 г кизельгура в 100 мл забуференного 0,1 Ж солевого раствора кипятят для удаления воздуха и охлаждают. К этой суспензии добавляют 5 мл МА, перемешивают и добавляют еще 20 мл забуференного солевого раствора . Забуференные солевые растворы представляют собой 0,05 М натрий-фосфатный буфер с pH 6,7, содержащий различные количества Na l pH растворов, в которые добавлена соль, будет несколько ниже, чем 6,7, однако их используют в таком виде, не доводя pH точно до 6,7. Забуференные солевые растворы хранят на холоду. [c.122]

Описанная впервые Манделем и Хорши [2] колонка содерншт два слоя МАК с различным соотношением метилированного альбумина и кизельгура. Позднее был предложен более простой способ приготовления колонки, который также дает хорошие результаты мы опишем подробно последний способ. [c.123]

В одной из первых работ Кассиди с сотрудниками [8, 9] приготовили окислительно-восстановительную бумагу и редокс-колонки осаждением полимеров на бумаге, альбумине и кизельгуре. Так как редокс-полимер не растворялся в воде, то этц материалы 0ыли [c.50]

Метилированный сывороточный альбумин адсорбируется на кизельгуре (инфузорная земля), прочно связываясь с ним. Джозеф Манделл и Альфред Херши показали, что колонки с таким материалом связывают одно- и двухцепочечную ДНК, причем [c.215]

В качестве наполнителя для колонки используют кизельгур (Ну fio Super el). Перед наполнением колонки метилированный альбумин ресуспендируют в 0,01 М трисбуфере, содержащем 0,1 М Na l, а кизельгур — в дистиллированной воде. Затем их перемешивают и вносят в колонку. Обычно используют колонки, содержащие 10 г метилированного альбумина и 3 г кизельгура. На подобную колонку можно адсорбировать 0,6—1,0 мг нуклеиновой кислоты. Скорость элюирования 40 мл ас. [c.184]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология