Электрофокусирование препаративное разделение

После нанесения образца включают ток ионы с самой высокой подвижностью движутся к соответствующему электроду первыми. На некотором расстоянии от них следуют самые малоподвижные ионы, а ионы образца, обладающие промежуточной подвижностью, располагаются между ними соответственно их относительным подвижностям. Если подвижности ионов образца очень близки, разрешение можно улучшить путем внесения в исходный образец синтетических амфолитов, называемых ионами-прокладками. Эти ионы по сравнению с ионами образца обладают промежуточной подвижностью и, располагаясь между ними, способствуют разделению последних. Ионы-прокладки сходны с теми, которые применяются при электрофокусировании. Они создают градиент pH между ведущими и замыкающими ионами, способствуя тем самым дополнительному разделению ионов образца по принципу электрофокусирования. Изотахофорез обладает очень высокой разрешающей способностью и применяется как для аналитического, так и для препаративного разделения самых разнообразных веществ. [c.136]

Градиент плотности широко применяется для стабилизации среды при электрофокусировании. По завершении опыта такой раствор можно собрать на коллектор для последующего анализа. Поэтому такое разделение может применяться как для аналитических, так и для препаративных целей. [c.302]

Изоэлектрическое фокусирование (электрофокусирование) вначале было предложено как препаративный метод. Однако оно получило более широкое распространение как аналитический прием (см. гл. 9). Хотя теоретически, а часто и на практике изоэлектрическое фокусирование — превосходный метод, некоторые связанные с ним трудности ограничивают его применение. Во-первых, это касается конструкции прибора. Изоэлектрическое фокусирование предъявляет менее жесткие требования в этом отношении, чем обычный электрофорез, благодаря почти полному отсутствию тепловыделения. Был разработан целый ряд систем, и некоторые из них оказались удачными. Так, было предложено помещать образец вместе с амфолитами в длинную гибкую трубку, которую можно накрутить в виде спирали на горизонтальную катушку. После разделения индивидуальные компоненты под действием силы тяжести собираются в нижних частях спирали, которая разрезается, и мате- [c.226]

Электрофокусирование и изотахофорез, обладая хорошим разрешением, применяются при аналитических исследованиях, но, подобно непрерывному электрофорезу, особенно широко используются для препаративных целей. Этими методами можно разделять относительно большие количества материала, который в конце разделения может быть получен обратно. С их помощью успешно проводили вьщеление пептидов, белков, нуклеотидов и т. д. [c.137]

К достоинствам метода электрофокусирования в градиента йлотности можно отнести возможность препаративного разделения, а также определения точного значения изоэлектрической точки. Однако как аналитический метод электрофокусирование [c.320]

Благодаря высокому разрешению электрофокусирование в геле можно использовать для препаративного выделения белков, элюируя компоненты с отдельных кусочков геля. Местоположение зон определяют по отношению к окрашенным маркерам, окрашиванием отдельных полосок геля (при работе в блоке) или измерением pH на поверхности геля с помощью стеклянного микроэлектрода (см. разд. 8.3.3.5). Однако извлечение белка с геля является довольно сложным, поэтому таким методом можно приготовить лишь незначительные количества вещества. Либек и Руттер [89] описали другой метод препаративного разделения в геле, позволяющий работать с 30 мг белка. В этом случае образец наносят в щель на блоке геля. После фокусирования компонент увлекается эндоосмосом во вторую щель, откуда вымывается поперечным потоком элюента. [c.336]

Изоэлектрическое фокусирование [42 — 45] в линейном градиенте pH позволяет разделить белки, характеризующиеся различными изоэлектрическими точками. Для создания градиента используют носители с цвнттер-ионными свойствами — алифатические полиаминополикарбоновые кислоты, имеющие М 200 — 700. При движении в градиенте pH суммарный заряд белка постоянно меняется, и в области pH, близких к изоэлектрической точке, становится равным нулю. Соответствующий белок фокусируется , образуя узкую зону. При препаративном фокусировании в колонке стабилизация градиента pH осуществляется с помощью градиента плотности используемого буферного раствора, однако чаще работают с плоскими слоями полиакриламидного или гранулированного геля. Опубликовано краткое сообщение о непрерьтном электрофокусировании без носителя [46]. Эффективность электрофокусирования высока. Так, возможно, например, разделить белки, различающиеся по ИЭТ лишь на 0,01 единицы pH. При разделении сыворотки образуется более 40 белковых полос. [c.351]

В опытах по препаративному ИЭФ, описанных в настоящем разделе, использовали электрофоретическое оборудование Мультифор фирмы LKB Produ ter АВ (Стокгольм, Швеция) и набор амфолитов-носителей ЛКБ-амфолины для электрофокусирования в гранулированных гелях. С помощью этого метода нам удалось выделить отдельные гомогенные в ИЭФ фракции кроличьего IgG, которые при других способах разделения дают гетерогенный препарат. [c.137]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология