Ионообменные смолы, применение для пептидов

О возрастающем интересе к применению автоанализаторов Д.ЧЯ хроматографического разделения аминокислот, пептидов и белка свидетельствует работа бельгийских авторов [47]. В этой работе описывается применение автоанализатора для хроматографического разделения аминокислот. В автоанализатор вводится как один из блоков разделительная колонка с ионообменной смолой. Пропорциональный насос автоанализатора используется для прокачивания элюирующего раствора через колонку, подачи нингидринового реактива и циркуляции воды через рубашку разделительной колонки для ее термостатирования. В проточном реакторе автоанализатора проводится нингидриновая реакция. Автор работы указывает, что благодаря фрагментации элюата с помощью пузырьков азота удается использовать в реакторе широкую (2 мм) стеклянную капиллярную трубку, что исклю- [c.177]

Выбор метода выделения зависит от свойств получаемого пептида. Выделение сопряжено с особенно большими трудностями в случае пептидов, хорошо растворимых в воде [2638]. Некоторые пептиды мол<но осаждать спиртом из их водных растворов, поскольку ацетаты аммония и натрия растворимы в спирте [2247]. Возможно также выделение пептидов в виде нерастворимых солей, например флавианатов [2638], пикратов [627] или бариевых солей [2583]. Часто, однако, приходится прибегать к более сложным процедурам [2583]. Необходимо учитывать также, что при неполном восстановлении сульфонильной группы образуется сульфит, который частично окисляется кислородом воздуха и превращается в сульфат [1847]. В настоящее время наилучшие результаты можно получить на основе использования при очистке ионообменных смол этот способ нашел особенно широкое применение в исследованиях последних лет [686, 1414, 1524, 1943]. Так, Рудингер [1847] использовал этот метод для удаления избытка металлического натрия, с помощью ацетата аммония. При этом сначала путем добавления катионита ионы натрия замещались ионами аммония, затем сульфит- и сульфат-ионы осаждались ацетатом бария, и, наконец, для замещения ионов бария ионами аммония вновь использовалась катионообменная смола. В результате в растворе оставалась единственная соль — ацетат аммония, который хорошо растворим в спирте и не мешает осаждению пептида. Ацетат аммония можно также удалить лиофилизацией. При изучении применимости для реак- [c.42]

Другим чрезвычайно интересным применением ионообменных смол является метод молекулярных сит , используемый для отдеаения больших молекул белков или пептидов от меньших молекул пептидов или аминокислот [364]. [c.152]

В конце этого краткого обзора следует отметить, что растворы аминокислот и пептидов перед хроматографированием часто бывает необходимо обессоливать. Такое обеосоливание в течение многих лет осуществляли в электролизерах с циркулирующим ртутным катодам [372]. Этот весьма остроумный, метод все же не является -вполне совершенным. В частности, применение его приводит к превращению аргинина в орнитин [3816]. Другой простой метод состоит в поглощении минеральных ионов с помощью ионообменных смол [381в]. [c.156]

В настоящее время метод, основанный на применении три-хлоруксусной кислоты, повидимому, в некоторой степени вытеснен методом молекулярных сит [364]. Аминокислоты и мелкие пептиды быстро адсорбируются ионообменными смолами с заданной степенью перекрестных связей и с определенным зернением, в то время как крупные пептиды и белки остаются в растворе. [c.170]

Другим приемом разделения является повторная фенольная экстракция, когда в фенольный слой гораздо легче переходят пептиды, нежели свободные аминокислоты. Можно достигнуть желаемой цели путем применения специальных ионообменных смол типа сульфированных полистиролов (Харрис и Ли [1]). В случае необходимости можно примепять и фепилизо-тиоциапатпые методы постепенного расщепления пептидов (стр. 479), когда на первом этапе реакции удаляются все свободные аминокислоты вместе с К-концевой аминокислотой высших пептидов. [c.458]

Недавно Бурильон и сотр. [146] использовали метод расщепления, примененный ими ранее для изучения нативного -кислого гликоиротеина (см. выше, [25]), для исследования -кислого гликопротеина, из которого удалена сиаловая кислота. Единственное изменение, введенное ими, состояло в том, что на последней стадии очистки они заменили ионообменную смолу сефадексом-25. После обработки смеси гликопентидов проназой были выделены свободные аминокислоты и пептиды, которые были подвергнуты очистке на сефадексе-25. Фракцию, содержащую углеводы, разделяли с помощью электрофореза на бумаге при pH 6,4 на три компонента. Первый компонент содержал аспарагиновую кислоту, треонин и лизин, второй компонент — аспарагиновую кислоту, треонин, пролин, тирозин и лейцин или (после продолжительной обработки проназой) только аспарагиновую кислоту, треонин и пролин. Третий компонент содержал глутаминовую и аспарагиновую кис- [c.94]

Если электрофорез и хроматографию на бумаге можно отнести к микропрепаративным методам, то метод разделения смеси пептидов с помощью ионообменной хроматографии следует, пожалуй, считать макропрепаративным. Его главное преимущество заключается в том, что он позволяет обрабатывать большие количества материала и получать несомненно большие выходы фракций. Применение при ионообменной хроматографии летучих буферов дает возможность избежать трудоемкой процедуры обессоливания, которая осложняла ранее предложенные методики [49, 92]. Большим достижением в области ионообменной хроматографии является введение сферических смол. Их применение способствует увеличению скорости потока фракционируемых веществ через колонку и значительно сокращает продолжительность препаративного разделения. Сферические смолы в автоматических аминокислотных анализаторах обеспечивают воспроизводимую сравнительную хроматографию пептидов с высокой разрешающей способностью, т. е. позволяют автоматически проводить анализ методом отпечатков пальцев . [c.38]