Методы негативного окрашивания

В последнее время в практику электронной микроскопии вошли различные методы окрашивания , отличающиеся от метода оттенения тем, что их применение пе приводит к увеличению размеров объектов. Особенно четкое и детальное изображение дает метод негативного контраста [54, 218]. Он состоит в том, что на образец наносят нейтральные растворы, содержащие атомы тяжелых металлов (фосфорновольфрамовую кислоту или ура-нилацетат) в этих условиях атомы тяжелых металлов не соединяются с компонентами вирусов, а создают окрашенный фон, заполняя все отверстия и трещины, [c.38]

Другой метод негативного окрашивания заключается в том, что сетке дают возможность плавать последовательно по поверхности капли суспензии, капли фиксатора или другого агента, капли промывочной воды (несколько раз см. ниже Отмывка ) и капли с красителем, вслед за чем, как и обычно, сетку подсушивают фильтровальной бумагой (см. выше этап 6-й). Капли удобно наносить на пластинку зубного воска, сполоснутого дистиллированной или деионизованной водой для удаления пыли и растворимых солей. [c.101]

Имеется несколько удовлетворительных методов для окрашивания эндоспор в бактериях. При использовании простейшего из них — негативного окрашивания — получают нефиксированные препараты, материал которых имеет негативный вид. Для осуществления метода взятый петлей 7%-ный (вес/объем) водный нигрозин смешивают на покровном стекле с набранной петлей культурой, смесь распределяют в виде тонкой пленки и высушивают на воздухе. Покровное стекло переворачивают пленкой вниз, помещают на предметное стекло и [c.73]

Негативное окрашивание (контрастирование) — это процесс заключения бактерий или других частиц в тонкую пленку разбавленного раствора соли тяжелого металла, которая затем высыхает на стекле. В отношении используемых красителей и методов их применения (см. ниже) суш,ествует множество вариантов. Стандартная методика, применяемая в нашей лаборатории, включает два этапа — сначала нанесение образца, а затем окрашивание 2%-ным молибдатом аммония, как описано ниже. [c.100]

Для негативного окрашивания суспензий существует несколько взаимозаменяемых методов. В одном из них смешивают равные объемы (можно использовать и другие отношения) красителя и суспензии, наносят одну каплю на сетку, а затем либо сразу, либо по прошествии определенного времени (например, 30 с) удаляют избыток жидкости. Обычно каплю лучше всего наносить сразу после смешивания, поскольку происходящее со временем взаимодействие частиц и красителя может приводить к нестабильным результатам. Иногда выгодно захватить тонкую пленку смеси платино-иридиевой петлей размером чуть больше площади сетки (например, диаметром 3,2 мм) и нанести ею смесь на сетку, лежащую на промокательной бумаге этим обеспечивается более равномерное распределение частиц. Сетку высушивают и просматривают. Если нанесенного материала больше, чем должно быть в тонкой пленке, то избыток следует удалить фильтровальной бумагой. [c.101]

Метод выявления спор негативным окрашиванием. На предметном стекле готовят тонкий мазок клеток спорулирующих бактерий, подсушивают на воздухе и фиксируют в пламени. Затем на 3—5 мин наносят метиленовый синий или на 1—3 мин фуксин, после чего препарат осторожно промывают водой и подсушивают на воздухе. Просматривают с иммерсией. [c.111]

Электронная микрофотография фага Т4 Е. соИ, полученная методом негативного контрастирования. Окрашивание проводили фосфорновольфрамовой кислотой. Сравните с рис. 3-10. (Любезно предоставил [c.75]

На рис. 15 и 16 Са-АТФаза саркоплазматического ретикулума представлена в виде тетрамера. Вывод о тетрамерной организации фермента был сделан в результате сопоставления концентрации частиц, выступающих на внешней поверхности мембраны пузырьков и выявляемых при негативном окрашивании, и внутримембранных частиц, обнаруживаемых методом замораживания— скалывания. Первых частиц оказывается в 3—4 раза больше, чем вторых. [c.62]

Негативный контроль должен характеризовать уровень флуоресценции исследуемой пробы в отсутствие специфического взаимодействия реагента с клетками. Такая неспецифическая флуоресценция может возникать как из-за аутофлуоресценции , т. е. флуоресценции самих компонентов клетки, так и вследствие неспецифического связывания реагента. Идеальной контрольной пробой является проба, обработанная таким же способом, как и в опыте, но с использованием реагента, которому каким-то образом придана негативная специфичность. При примененип метода прямого окрашивания хорошим контролем является проба, в которой клетки обрабатывали реагентом, приготовленным на основе антител того же изотипа и содержащим то же количество конъюгированного флуорохрома, что и реагент, используемый в опыте, но обладающим другой специфичностью. Для контроля специфичности окрашивания исследуемых клеток реагентом против одного аллеля маркерного антигена можно обработать этим же реагентом клеточную популяцию мыши, конгенную по другому аллелю этого же антигенного маркера (если такая конгенная линия существует). При использовании непрямого метода к постановке идеальных контро- лей предъявляются такие же требования плюс дополнительный контроль второго (меченного флуорохромом) реагента. [c.352]

Указанных недостатков лишен иммуноанализ на основе цитолизина (рис. 9-4), в котором используют липосомы с одной полостью, образующиеся при удалении детергента диализом. Новый метод не требует ни присоединения лекарственного препарата к липосомам, ни использования комплемента и обеспечивает быстрый лизис везикул. Липосомы, применяемые для анализа по этому методу, при хранении в замороженном виде в атмосфере аргона устойчивы в течение одного года (т. е. непроницаемы для заключенной в них щелочной фосфатазы), нО теряют устойчивость при удалении из их состава холестерола. Как показала электронная микроскопия с негативным окрашиванием, средний размер везикул составляет примерно 0,2 мкм. Добавление к везикулам конъюгата [уабаин—мелиттин (20 нмоль/л) сразу же вызывает полный лизис, но лизиса не происходит в случае предварительной инкубации конъюгата с избытком антител против дигоксина (рис, 9-5). Проводя такую инкубацию в присутствии известных количеств дигоксина, можно построить калибровочную кривую (рис, 9-6). [c.127]

Метод негативного контрастирования Бреннера и Хорна (часто неправильно называемый негативным окрашиванием) заключается в заливке мелких частиц или макромолекул сплошным ело- [c.73]

Широкое распространение получил фотоденситометрический метод, применимый в тех случаях, когда вещества дают при обнаружении достаточно интенсивное окрашивание. Необходимым условием при этом является воспроизводимость метода обнаружения. До нанесения веществ исходную хроматографическую пластинку промеряют денситометром только после этого наносят образец, проводят проявление и обнаружение [147, 155, 202, 255]. Измерение проводят с помощью фотоденситометров различных типов, широко известных и производимых в большом количестве. Полученные значения с учетом поправки на пустой слой наносят на график против количества вещества. Иногда для проведения денситометрических измерений используют фотографию хроматограммы (негативное изображение) [31]. Для обсчета хрома- [c.156]

Иногда перед негативным контрастированием оказывается полезной химическая фиксация микроорганизмов. Ее применяют для того, чтобы избежать структурных изменений и искажений из-за действия растворов с разными pH и осмотическими свойствами, из-за действия самих красителей или из-за высушивания в красителе. Фиксацию проводят в растворах глута-ральдегида низкой концентрации, а иногда суспензию на сетке подвергают действию паров глутаральдегида в закрытом сосуде. Перед окраской фиксированные бактерии нуждаются в отмывке либо прямым способом, либо путем отмывки сеток методами, упомянутыми выше. В итоге часто наблюдается в какой-то степени позитивное окрашивание, а задержка красителя вокруг фиксированного микроорганизма такова, что для окрашивания можно применять значительно менее концентрированные растворы красителя. [c.104]

Промыть ФСБ и заключить клетки, как указано выше. Этот метод, использующий нефиксированные препараты, оказывается еще более быстрым, чем метод окрашивания Хехст 33258. Готовый тест-набор с ДАФИ поставляется фирмой Bioassay Systems. Радиоавтография и методы окрашивания базируются на выявлении цитоплазматической ДНК (в пер-. БОМ случае реплицирующейся формы). По этой причине в контрольных препаратах всегда имеется небольшой фон, обусловленный митохондриальной ДНК, и тестируемые препараты должны сравниваться как с негативными, так и с позитивными контролями. [c.120]

После окрашивания серебром можно осуществлять неп е-рывную регистрацию результатов с помощью фотографирования на поляроидную пленку (3X5") или негативную пленку (впоследствии с нее печатают фотографии). Описан метод с использованием пленки прямого копирования (Kodak X-Omat) при УФ-освещении в течение 1 — 1,5 с с последующей обработкой проявителем и закрепителем фирмы Kodak. Процедура неприменима к образцам, окрашенным кумасси [125], [c.306]

В виде ложноположительных отсчетов, в то время как в неокрашенном контроле эти клетки выявляются в негативном пике. При использовании непрямого метода мертвые клетки в негативном контроле будут подсчитаны как позитивные по окрашиванию, поскольку контрольная популяция подвергалась обработке меченым реагентом. Имеется два способа избежать затруднений. Необходимо или работать с пробами, содержащими достаточно жизнеспособные клетки, или использовать окрашивание иодистым пропидием (ИП) для исключения из подсчетов (благодаря установке окна регистрации) мертвых клеток (разд. У1,Аи1У,Б). [c.353]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология