Обработка мечеными препаратами

Обработка мечеными препаратами [c.249]

Изотопный метод может быть использован и для определения гибберелловой кислоты в растениях, в этом случае применяют дважды меченый препарат, получаемый обработкой гибберелловой кислоты, меченной тритием, H2 N2 [218]. [c.215]

Пример 11-М. Обнаружение радиационных повреждений в бактериальной ДНК. При обработке меченной Н-тимидином бактерии ферментом лизоцимом, который разрушает часть клеточной стенки бактерии, и быстром нанесении полученного препарата на щелочной градиент сахарозы лизис бактерии будет завершаться при действии щелочи, а ДНК при этом будет денатурировать. Последующее центрифугирование показывает, что большая часть ДНК имеет очень высокий 5 (рис. 11-35). Если же перед лизисом клетки подвергнуть рентгеновскому облучению, значение 5 существенно понижается, указывая тем самым на то, что облучение приводит к одноцепочечным разрывам. Из эмпирического соотношения между 5 и М можно рассчитать число одноцепочечных разрывов и сравнить его с дозой радиации. Этот подход позволяет установить связь между разрывами цепей и убивающим действием рентгеновских лучей. [c.323]

Непрямая РИФ предполагает обработку препарата вначале немеченой специфической антисывороткой во влажной камере 30 мин при 25 °С, после чего препарат промывают буферным раствором (как и при прямой РИФ). Далее препарат обрабатывают антивидовой меченой сывороткой во влажной камере 30 мин при 25 °С и снова промывают буферным солевым раствором. [c.75]

Эффективность трех препаратов против мильдью была примерно одинаковой, хотя расход масляного препарата (17 л/га) был в 2,5 раза меньше, чем в случае двух других (44 и 43 л/га). Эти опыты проводились летом 1962 г. Насколько известно, это первый случай авиационного применения против мильдью с расходом рабочей смеси менее 20 л/га. Перспективы на будущее здесь интересны. Прибавим, что формы, облегчающие использование известных химикатов, уже внедрены в Великобритании, как и во Франции, и мечение — экономичный и быстрый метод контроля за равномерностью авиационной обработки—дало положительные результаты по крайней мере с одним из этих препаратов [c.205]

В ходе исчерпывающей обработки литературных источников в Указатель наряду с целевыми продуктами включались также промежуточные соединения и вещества, получающиеся по аналогичной прописи, если таковые выделялись и характеризовались. Было признано также целесообразным включить в Указатель меченые органические препараты высокомолекулярные соединения в данный справочник не вошли. [c.5]

Наибольшее применение получили полимеры, меченные изотопом Такие препараты синтезированы, например, при обработке поливинилпирролидона NaJ [73—76]. Предполагают, что вводится в а-положение к карбонильной группе [73]. [c.80]

Гербицидные метилкарбаматы относятся к числу сравнительно новых препаратов [10, 12]. Первоначальные исследования метаболизма меченого ЮК-22463 показали [76], что ЮК-22463 быстро разлагается в растениях и через 7 суток после обработки можно обнаружить только следы исходного соединения. Метаболизм ЮК-22463 в чувствительных видах растений связан с превращением гербицида в растворимый в воде метаболит, содержащий неизмененную исходную молекулу. В то же время устойчивые виды растений разлагают исходное соединение и его растворимый в воде метаболит настолько быстро, что их трудно обнаружить даже через 48 час после обработки. [c.135]

Таким образом, сначала препарат ДНК содержит большое число идентичных молекул, меченных с одного конца. После химической обработки каждая молекула будет разрезана только в небольшом числе участков, содержащих данное основание. Но весь препарат в целом будет состоять из набора молекул, у которых разрыв случайно произошел практически в каждом положении данного основания (рис. 3.8). [c.50]

Препараты митотических хромосом получали из культуры лимфоцитов, подвергали специальной обработке с целью денатурации хромосомной ДНК и затем проводили гибридизацию с меченным тритием ДНК-зондом в течение 16-18 ч при 40°С. [c.130]

Основная задача данной главы — дать общее представление о рестрикционной обработке различных препаратов ДНК. Подробные указания по обработке мини-препаратов ДНК Е. oli, тотальной ДНК агробактерий и ДНК растений приведены в соответствующих разделах гл. 1 и 4. Указания по нанесению рестрицированных образцов ДНК и детали, связанные с приготовлением индивидуальных проб для гибридизации по Саузерну, широко освещены в других разделах (гл. 1 и 4). Способ заливки агарозных гелей, блоттинг-гибридизация по Саузерну и мечение ДНК с помощью олигонуклеотидной затравки, приведенные в данном разделе, универсальны для всех описанных в других разделах экспериментов и могут применяться без изменений. [c.277]

Меченые алкилнафталины и алкилфеиантрены были получены по реакции алкилирования нафталина и фенантрена октил-хлоридом— , приготовленным, путем обработки препарата н — октанола — 1С пятихлористым фосфором. Октилхлорид — С = 185° С, = 1,4340) по данным газохроматографических анализов примесей практически не имел. [c.73]

После получения меченных ФИТЦ препаратов СР определяют количество включенной метки. Для этого измеряют оптическую плотность образца, содержащего модифицированный белок, при 490 нм и рассчитывают концентрацию ФИТЦ, используя коэффициент молярной экстинкции метки, равный 64-10 М см . Для учета вклада светорассеивания в качестве контроля используют раствор везикул СР той же концентрации по белку, но не обработанных ФИТЦ. После этого рассчитывают включение метки в белок Са—АТФазы, зная, что молекулярный вес фермента равен 100 000, а содержание белка Са— АТФазы в препаратах легкой фракции СР составляет 807о- Для приведенных условий обработки включение метки составляет 1 моль/моль Са—АТФазы. [c.366]

Первоначально при использовании радиоаналитических методов, основанных на методе изотопного разбавления, определенное количество чистого меченого производного добавляли к известному количеству чистого немеченого производного (сравнительного стандарта), примерно равного тому, которое образуется при анализе пробы. Удельные активности анализируемого и стандартного препаратов измеряли торцевым счетчиком Гейгера—Мюллера, однако более удобны и более чувствительны жидкостные сцинтилляционные счетчики. Вес производного W (г), получаемого при обработке анализируемой пробы, вычисляют по формуле [c.78]

Для концевого мечения ДНК-фрагментов -независимо от характера образующихся после эндонуклеазной обработки концов (5 -, 3 -выступающих или тупых) - можно использовать реакцию замещения, катализируемого ДНК-по-лимеразой Т4. В этом случае к препарату кос-мидной ДНК, обработанной рестриктазой, добавляют ДНК-полимеразу и один меченый дезоксинуклеотид (рис. 20.20). Под действием З -экзонуклеазной активности ДНК-полимера-зы происходит последовательное отщепление 3 -концевых нуклеотидов. Процесс продолжается до тех пор, пока в противопложной цепи не экспонируется нуклеотид, комплементарный меченому дезоксинуклеотиду, добавленному в реакционную смесь. Далее включается полимеразная активность ДНК-полимеразы, и к 3 -концу присоединяется свободный меченый нуклеотид. Поскольку другие нуклеотиды в реакционной смеси отсутствуют, дальнейшего роста цепи не происходит. [c.463]

Меченые алкилнафталины и алкилфенантрены были получены по реакции алкилирования нафталина и фенантрена октил- слоридом — приготовленным путем обработки препарата н — октанола — I пятихлористым фосфором. Октилхлорпд — С == 185° С, = 1,4340) по данным газохроматографи- [c.73]

На продолжительность сохранения фосфорных инсектицидов внутри растений влияют физиологические особенности растений, активность их ферментов, pH клеточного сока и т. д. Так, например, нами была исследована продолжительность сохранения внутри листьев 17 видов растений меченного по Р- - метафоса [7, 81. Оказалось, что в листьях различных видов растений он разлагается с различной скоростью. В листьях чая, клена, свеклы, капусты уже через сутки после обработки более 60/O меченого фосфора обнаруживалось в водной фракции, то есть более 60% метафоса подвергалось гидролизу. В листьях лимона и трифолиатр, и через 7 суток после обработки свыше 70% препарата сохранялось в неразрушеннолг виде. Различная скорость гидролиза фосфорорганических соединений внутри различи ,IX видов растений имеет большое практическое значение при определении сроков повторных обработок и возможных остатков инсектицидов в урожае. [c.48]

Уже через 3 дня поел обработки растения яровой пшеницы в фазе 4-го листа бутиловым эфиром 9- С-флуренола в виде препарата анитен в экстрактах растений можно обнаружить. Кроме исходного морфактина, его меченые метаболиты. Через [c.164]

Данные исследований о выделении севина с молоком при накожной обработке коров крайне противоречивы. R. Н. Roberts и др. (1960) провели четырехкратное с интервалами в 4 дня опрыскивание коров 0,5%-ный суспензией севина. В пробах молока они не обнаружили ни севина, ни альфа-нафтола. Но 1. F. Eheart и др. (1962) сообщили, что при наружной обработке коров 0,5%)-ной суспензией или 50%-ным дустом севина последний может попадать в молоко. Спустя час после применения препарат был ими обнаружен в первых пробах молока в количествах 0,06 и 0,15 мг/кг соответственно. При проведении аналогичного опыта годом позже севин в молоке обнаружить не удалось. Авторы объяснили это более высоким удоем коров. А. Л. Букин (1966) после однократного опрыскивания коровы 1%-ной водной суспензией севина, меченного по С остатков его в молоке не обнаружил через 3 ч после опрыскивания он появился в моче, и следы его наблюдались в течение 24 суток. [c.283]

Разложение какодиловой кислоты протекает по двум направлениям [383] окислительное деметилирование с образованием углекислоты и неорганических соединений мышьяка и восстановление до диметиларсина. Диметиларсин частично улетуч ивается в атмосферу и окисляется до окиои какодила и далее до какодиловой кислоты. Таким путем большая часть исходной какодиловой кислоты в конечном итоге переходит в неорганические соединения мышьяка. Изучение накопления и разложения какодиловой кислоты, меченной С, в растениях бобов показало, что через 24 ч после обработки препаратом в листьях накапливается 6,9 и в корнях 12,8% от общей радиоактивности, через 2—3 дня радиоактивность в листьях достигает 19,1%, в корнях отсутствовала, через 9 дней происходит уменьшение радиоактивности растений до 9,6%. Это указывает на деметилирование какодилоБОй кислоты в растениях с образованием неорганических соединений мышьяка. [c.178]

Химический сиквенс основан на избирательной химической деградации нуклеотидов. Он был предложен в 1977 г. А.М. Максамом и В. Гилбертом и назван их именем. Для секвенирования этим методом необходимо получить одноцепочечную молекулу ДНК, один из концов которой метят с помощью изотопа фосфора препарат меченой ДНК делят на четыре порции и каждую обрабатывают реагентом, специфически разрушающим одно или два из четырех оснований. Так, например, добавление 60 %-ной муравьиной кислоты разрушает пуриновые основания (А + Г), прибавление диметилсульфата — только гуанидиновые основания чистый гидразин разрушает пиримидиновые основания (Т + Ц), а в присутствии 1,5 М Na l избирательно разрушаются только цитозиновые основания. Очень важно подобрать условия реакции таким образом, чтобы на каждую молекулу ДНК приходилось лишь несколько повреждений. При обработке поврежденных молекул пиперидином в ДНК образуется разрыв в том месте, где находилось разрушенное основание. [c.30]

Передвижение гербицидных тиокарбаматов изучали Фанг с сотр. [7—10] и Ямагучи [11], применяя методы авторадиографии и метод прямого счета. При предвсходовой обработке почвы меченный по сере эптам поглощается многими плодовыми культурами и распространяется по всем частям растения [8, 9, 11]. Установлено, что после обработки листьев эптамом, меченным по сере, метка накапливается в верхушках стеблей и корней. При обработке корневой системы препарат распределяется в растениях более равномерно [11]. Палевая и сотр. [6] сообщили, что эптам- С легко поглощается из питательных растворов корнями растущих растений люцерны. За пять дней в растениях накапливалось примерно в два раза больше метки, чем за два дня причем накапливался во всех частях растений, хотя в более молодых частях его было несколько больше. В работе [10] говорится о поглощении тиллама растениями томатов из почвы при пред- или послевсходовой обработке. Внесенный в почву тиллам быстро поглощается корневой системой растений, и метка на стадии цветения продвигается в листья и плоды. При норме расхода 1,12 кг/га концентрация метки в листьях достигала максимума через семь дней, после чего оставалась почти постоянной в течение 70 дней. При норме расхода 4,5 и 9 кг/га концентрация метки в листьях достигала максимума [c.152]

Лестница, полученная в результате обработки ДНКазой I, показана на рис. 29.13. Похожие результаты получают при аналогичной обработке хроматина. (Действительно, для таких экспериментов in vitro обычно используют препарат минимальных нуклеосом, так как трудно получить препараты полных нуклеосом с гомогенным распределением по размеру фрагментов ДНК.) Интервал между последовательными ступенями лестницы составляет примерно 10 оснований. Лестница вытягивается на всю длину ДНК минимальной нуклеосомы сайты расщепления пронумерованы от S1 до S13 (где S1 расположен через 10 оснований от меченого 5 -конца ДНК, S2-через 20 оснований и т. д.). Из этого следуют два важных вывода. Во-первых, ДНК не защищена на нуклеосоме и остается чувствительной к ДНКазе I она не покрыта белками. Во-вторых, чувствительные участки расположены периодически. [c.365]

Включение Н-ТТФ в основном зависит от качества ДНК. Присутствие в лизатах эндогенной ДНКазы может приводить к появлению большого числа одноцепочечных разрывов в ДНК. Если в ДНК нет разрывов, вызванных действием эндогенной ДНКазы, то без предварительной обработки ДНКазой (см. выше) включается лишь небольшое количество ТТР. Если же ДНК имеет достаточное число разрывов, то ТТР включается одинаково как после обработки ДНКазой, так и без нее. Иногда обработка ДНКазой приводит к образованию слишком большого числа разрывов, в результате чего появляются короткие фрагменты меченой ДНК (см. выше). Поэтому каждый препарат ДНК следует тестировать дважды с обработкой и без обработки ДНКазой. Это позволяет определить количество включенного ТТР и качество меченого материала, как описано выше. [c.139]

Другой подход — это выявление в ядерных экстрактах белков, способных специфически связываться с определенными участками ДНК. Для этого экстракты, выделяемые обычно из ядер с помощью 0,2—0,4 М солевых растворов, инкубируют с клонированными фрагментами меченой ДНК в присутствии избытка немеченой неспецифической ДНК (например, из Е. oli). Комплексы ДНК с белками выявляют либо путем их сорбции на нитроцеллюлозных фильтрах, либо наблюдая замедление миграции данного, фрагмента при гель-электрофорезе. Зная рестриктный фрагмент, с которым специфически взаимодействуют белки ядерного экстракта, можно далее выявить участки этого фрагмента, защищаемые связанным белком от атаки нуклеазами (ДНКазой I, экзонуклеазой) или химическими агентами (например, диметилсульфатом). Для этого после мягкой обработки расщепляющими агентами фрагменты ДНК (меченные предварительно по одному концу) разделяют с помощью электрофореза в геле вместе с обработанными тем же методом препаратами свободной ДНК. Сравнивая полученные наборы продуктов расщепления, легко определить участки ДНК, защищаемые белком с точностью до одного нуклеотида (рис, 31), [c.168]

Иммунофлуоресцентное окрашивание непрямой метод. Включает два этапа. Препарат фиксируют нагреванием, наносят каплю нелюминесцирующей гомологичной иммунной сыворотки определенного разведения и оставляют на 20—30 мин во влажной камере. Затем осторожно промывают в течение 5 мин. На втором этапе на препарат наносят каплю меченого антикроличьего 7-глобулина, разведенного до так называемого окрашивающего титра. Время инкубации на втором этапе и окрашивающий титр определяют эспериментально. После этого препарат осторожно промывают и микроскопируют при увеличении 90X. Непрямой метод обладает принципиальным преимуществом, так как, имея лишь одну люминесцирующую сыворотку, можно отыскать большое число разных антигенов, используя стандартные кроличьи сыворотки. При непрямом методе, однако, крайне важен контроль, включающий инкубирование препарата на втором этапе непосредственно с меченой сывороткой обработку препарата гетеро-логичной меченой сывороткой обработку препарата на первом этапе нормальной или гетерологичной сывороткой, не содержащей антител к исследуемому антигену. [c.113]

Таким образом, молекулярные основы изменений гликопротеи-дов в клетках RF- EM явно отличаются от изменений гликопротеидов СНО-клеток, в которых меченные Н аминокислоты включались в гликопротеид и таким образом увеличивался его уровень. Какая бы ни была их функция в клетках RF-GEM, высокомолекулярные белки не несут прямой ответственности за нарушение поглощения лекарств устойчивыми клетками. Обработка этих клеток проназой или туникамицином, полностью удаляющих измененный гликопротеид, не приводит к увеличению чувствительности к ВБЛ и поглощения этого препарата клетками (W. Т. Веек, личное сообщение). [c.104]

На практике при выполнении цитофлуориметрического анализа ставить для каждого из используемых реагентов все необходимые контроли затруднительно. Часто возникающие сомнения разрешаются в результате тщательной проверки специфичности соответствующего рабочего реагента. В случае моноклональных антител можно ограничиться проверкой чистоты препарата антител. При использовании гетерологичных антисывороток следует убедиться в том, что они не реагируют с клетками (или клеточными линиями) других типов, которые не содержат соответствующих лигандов (антигенов). После того как продемонстрирована высокая специфичность реагента, можно использовать достаточно простые контроли. В прямом методе адекватным негативным контролем могут служить неокрашенные клетки. Эквивалентным такому контролю вариантом в непрямом методе является обработка клеток только вторым (меченным флуорохромом) реагентом. [c.352]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология