Встречный электрофорез

Метод встречного электрофореза для выявления антигенов- и антител в сыворотке больных вирусным гепатитом В. [c.247]

Реакция встречного электрофореза в агаровом геле по чувствительности не отличается от реакции преципитации, но несколько уступает ей по специфичности, однако значительно превосходит ее по скорости получения результатов в течение [c.248]

Иммунодиффузию в электрическом поле можно производить с одновременным встречным движением антигенов и антител этот способ назван встречным электрофорезом. Аналогичная модификация простой радиальной иммунодиффузии получила название ракетный электрофорез (рис. 29.5). [c.528]

Встречный электрофорез и ракетный электрофорез [c.530]

Дроздова и Емельянова (1960) установили при помощи электрофореза на бумаге (в борно-боратном буфере при pH 8,68), что при взаимодействии гуминовых кислот с медью образуются в зависимости от соотношения компонентов и растворимые, подвижные внутрикомплексные соединения, и нерастворимые. На рис. 55 показана электрофореграмма гуминовых кислот, обогащенных медью. Медь передвигается при pH 8,68 к катоду медь, входящая в состав комплексного соединения гуминовых кислот, передвигается к аноду так же, как и гуминовые кислоты, не содержащие медь. Был также применен метод встречного электрофореза. Гуминовые кислоты, не обогащенные медью, были нанесены на бумажную полосу (рис. 56) на равных расстояниях от катода и анода раствор сернокислой меди наносили со стороны анода (рис. 56, б). При своем движении к аноду гуминовые кислоты встречались с ионами меди, передвигающимися к катоду. [c.247]

Если антитела присутствуют в столь низких концентрациях, что их не удается обнаружить и количественно определить при помощи встречного и ракетного электрофореза, применяют реакцию гемагглютинации. Она основана на способности антител перекрестно связываться с эритроцитами, взаимодействуя с их поверхностными антигенами рис. 29.6). [c.528]

Кроме того, был применен встречный электрофорез при pH 6.3, при котором наблюдается наибольшее образование фульвата меди. Чистая фульвокислота наносилась на ленту на равном расстоянии от катода и анода растворы хлорида меди, содержащие 0.55 и 0.1 мг меди, наносились со стороны анода на расстоянии 5 см от линии старта фульвокислоты, которая при своем движении к аноду встречалась с ионами меди, передвигающимися к катоду. При этом наблюдалось образование нерастворимого соединения — фульвата меди если количество меди мало (0.1 мг), то образуется подвижное комплексное соединение фульвокислоты с медью, которое передвигается к аноду с несколько меньшей скоростью, чем сама фульвокислота. [c.274]

Встречный электрофорез проводят в агаровом геле, pH которого устанавливают так, чтобы антитела (Ат) несли суммарный отрицательный заряд, а исследуемый антиген (Аг) - положительный. В электрическом поле антиген и антитела движутся навстречу друг другу и преципитируют. Принцип метода тот же самый, что и при двойной иммунодиффузии, однако чувствительность выше в 10 - 20 раз. Ракетный электрофорез позволяет количественно определять антиген в антителосодержащем геле, pH которого подбирают с таким расчетом, чтобы движения антител не происходило, а антиген нес суммарный отрицательный заряд. Линия преципитации очерчивает область в виде ракеты, длина которой пропорциональна концентрации антигена. Определить эту концентрацию можно по калибровочной кривой. Внизу справа - фотография окрашенного геля. Оба метода основаны на различии суммарных зарядов антигена и антител при выбранном pH для большинства антигенов такие различия существуют, так как антитела имеют более высокую изоэлектрическую точку (т. е. несут нейтральный заряд при более высоком значении pH, чем большинство антигенов). Если заряды антигена и антител существенно не различаются, можно химически модифицировать антиген, чтобы сдвинуть изоэлектрическую точку. Ракетный электрофорез проводят и в обратной постановке, если требуется определить концентрацию антител здесь важно подобрать правильно гель и pH для иммобилизации антигена, чтобы не нарушалась его структура и не возникло препятствий для реакции антиген-антитело. (Р - диаметр кольца преципитации.) [c.530]

Реакция встречного иммуноэлектрофореза (РВИЭФ). Эта реакция основана на встречной диффузии в электрическом поле антигенов и антител и появлении внутри прозрачного геля видимого преципитата. В агаровом или агарозном геле делают лунки диаметром 2 — 3 мм, причем расстояние между лунками для сыворотки и АГ должно составлять 5 — 6 мм. Лунки располагают попарно (одна — для АГ, вторая — для сыворотки) или по три (одна — для АГ, вторая — для испытуемой сыворотки, третья — для контрольной сыворотки). Лунки для сыворотки располагают ближе к аноду, а для АГ — к катоду. Реакцию проводят с несколькими разведениями АГ, продолжительность электрофореза — 90 мин. Результаты реакции учитывают сразу же после окончания электрофореза, отмечая количество и локализацию линий преципитации при сравнении их с контрольной тест-системой. [c.69]

Электрофоретический (катафорстический) эффект обусловлен тем, что центральный ион и ионная атмосфера, имеющие разные знаки заряда, лви-я утся в электрическ( м поле в пpoтивolИJЛoжныe стороны (рис. 10.14). Встречное движение ио[шой атмосферы (окружающей среды) замедляет движение центрального иока. Обычно принимают значение ЛХ эф равным значению собственной электропроводности ионной атмосферы Латм. Условно рассматривают ионную атмосферу как шар радиуса Г/> Значения го приближаются к размерам коллоидных частиц, для движения которых в электрическом поле (электрофорез или катафорез) применим закон Стокса. Тогда на основании уравнений (1.7), (10.23) и (10.75) имеем [c.198]

В качестве поддерживающей среды можно применять и агаровый гель, но размер пор в нем гораздо больше, и движение белковых частиц происходит беспрепятственно (гель с низкой разрешающей способностью ). Большая скорость диффузии и прозрачность геля были использованы Грабаром и Уильямсом, которые создали так называемый иммуноэлектрофорез , являющийся развитием ранее существовавшего метода имму но диффузии . Суть иммуноэлектрофореза состоит в том, что для проявления электрофореграммы и идентификации белковых компонентов применяется преципитация их иммунной сывороткой крови. После предварительного электрофореза на бумаге из последней вырезают продольную полоску, не проявляя зон. Еще влажную бумагу прижимают к поверхности агарового геля. Параллельно этой полоске вырезают канавку в агаре и наливают в нее иммунную сыворотку. В результате встречной диффузии антитело встречается с антигеном происходит преципитация, и в прозрачном геле образуются дугообразные ясно видимые полосы, которые можно еще окрасить. [c.99]

Недавно разработанные системы направленного мутагенеза с использованием ПЦР и мегапраймеров позволяют существенно облегчить процесс получения мутаций, что достигается отказом от использования перекрывающихся мутантных праймеров для синтеза мутантных фрагментов ДНК [25, 26]. Принцип этого метода заключается в следующем (рис. 36,а). В первом раунде ПЦР синтезируют мутантный фрагмент ДНК, в который вводят мутации с помощью одного из праймеров (праймер М). Поскольку образующийся продукт ПЦР обладает значительными размерами (его допустимые размеры 70-800 п.о.) и используется в качестве праймера в следующем раунде ПЦР, он получил название мегапраймера. Фрагмент очищают электрофорезом в агарозном геле и используют в качестве праймера во втором раунде репликации со встречным праймером А. Праймеры А и В могут быть универсальными и содержат на своих 5 -концах сайты рестрикции для дальнейшего клонирования фрагмента. Конечный продукт ПЦР, образовавшийся после второго раунда амплификации, длина которого может быть в пределах 400-2500 и.о., после очистки и инкубации с соответствующими рестриктазами клонируют в подготовленном векторе, заменяя исходный фрагмент ДНК на мутантный, полученный с использованием мегапраймера. [c.298]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология