Буфер для электрофореза

Таблица 4. Буферы для электрофореза

Буфер для электрофореза — 7,5 мл НСООН (98%) добавляют к 2,5 л воды и доводят pH до 2,7 конц. КН ОН градиент напряжения — 6 в/см сила тока — 12 ма, время — 17—20 час. Система для хроматографии буфер для электрофореза доводят до pH 3,8 и смешивают с равным количеством шрет-бутанола pH смеси 4,7. [c.331]

Аппарат для электрофореза состоит из двух кювет высотой 6 ом и шириной 7 ом, служаш,их электродными сосудами. Их длина подбирается соответственно числу одновременно используемых пластинок, В каждой кювете по всей ее длине проходит платиновая проволока. Сосуды заполняют буфером для электрофореза, наливая его до уровня верхнего сливного отверстия. Рекомендуется обеспечить циркуляцию буфера, чтобы избежать изменений его pH при проведении опыта, В буфер опускают полоски бумаги, покрытые слоем геля. [c.61]

Электрофорез в агарозном геле проводят в горизонтальном направлении, так как при этом 1) гель с низкой концентрацией агарозы лучше держится, 2) получается меньшее перекашивание (коллапс) в процессе электрофореза и 3) меньше искажаются полосы ДНК. По-видимому, проще всего работать с системой, когда гель полностью покрыт слоем буфера для электрофореза толщиной около 1 мм. Сопротивление агарозы ненамного превышает сопротивление буфера, так что значительная часть тока течет через агарозу. [c.108]

Обычно мы пользуемся агарозой фирмы МС/В. Агарозу растворяют в буфере для электрофореза, нагревая до кипения в микроволновой печи. Необходимо убедиться, что рас- [c.109]

Если нуклеиновую кислоту фракционируют в отсутствие БЭ, окрашивание можно провести после электрофореза, поместив гель иа 30 мин в раствор, содержащий 5 мкг/мл БЭ. Для снижения фонового свечения, вызванного присутствием несвязавшегося БЭ, следует промыть гель в течение 30 мин в буфере для электрофореза или в дистиллированной воде. Примечание длительная промывка может привести к исчезновению слабых зон. [c.286]

Лунки для образцов делают с помощью погруженной в расплавленный гель гребенки из оргстекла, полихлорвинила или тефлона. Гребенку устанавливают до заливки геля таким образом, чтобы кончики зубьев находились примерно в 0,5 мм от основания геля. Если лунки достанут дна, то образец может протечь под гель. Когда гель полностью застынет, гребенку вынимают и лунки заполняют буфером для электрофореза. [c.110]

Важнейшая проблема при конструировании приборов для препаративного электрофореза — это необходимость эффективного отвода тепла, с тем чтобы все части системы находились при постоянной температуре. Поэтому приходится идти на компромисс между желанием ослабить белок-белковые взаимодействия путем повышения концентрации соли и стремлением уменьшить тепловыделение путем понижения концентрации соли. Все присутствующие в системе соли обычно входят в состав буфера (при этом нет никакой необходимости использовать сильные буферы, если продукты электролиза отделены от белков). Можно применять буферные смеси с низкой проводимостью, в которых ионные компоненты имеют относительно большие размеры и низкую электрофоретическую подвижность, например Н-трис+. В составе буфера эти ионы еще менее подвижны, поскольку часть времени они находятся в незаряженном состоянии, например борат-5=ьН-борат. Поэтому трис-бо-ратный буфер с pH 8—9 —один из самых популярных буферов для электрофореза. При pH 7—8 в качестве буфера с низкой проводимостью рекомендуется трис-МОПС (МОПС — морфоли-нопропансульфонат). Электрофорез обычно проводят при нейтральных или слабощелочных pH, когда большинство белков мигрирует к аподу. [c.215]

В буфер для электрофореза добавлен бромистый этидий (0,5 мкг/мл). При фотографировании гель освещают коротковолновым УФ-светом. [c.116]

Заполните эту лунку плотной взвесью гидроксилапатита НТР Bio-Rad (в трис-ацетатном буфере для электрофореза). Заполните лунку доверху, добавляя взвесь по мере осаждения частиц. [c.132]

Пятикратный буфер для электрофореза (трис-глицин, pH 8,3). [c.349]

Сразу же после полимеризации удаляют гребенку и промывают лунки однократным буфером для электрофореза. Искривленные лунки следует выправить иглой от шприца. [c.351]

Заливают в нижнюю камеру однократный буфер для электрофореза. Удаляют нижний спейсер между стеклянными пластинками и наклонно погружают их в нижнюю камеру. Удаляют все пузырьки воздуха, оказавшиеся между пластинами. Помещают пластины на подпорки на дне нижней камеры и прикрепляют к верхней камере клипсами. Заполняют верхнюю камеру однократным буфером для электрофореза. [c.351]

Примечание необходимо работать под тягой в перчатках и фартуке, поскольку буфер для электрофореза представляет собой сильную кислоту, и его пары оказывают раздражающее воздействие. [c.379]

Приготовление пластинок для электрофореза. Исходный 2,5%-ный раствор агара расплавляют в кипящей водяной бане и после просветления к нему добавляют концентрированный буфер до получения желаемой концентрации агара. Стеклянные пласти н ки помещают на уже застывший в фотографической кювете ил1и чашке Петри гель. Вырезают два листа хроматографической бумаги размером 13X4 см, пропитывают их буфером для электрофореза и накладывают на оба конца стеклянной пластинки так, чтобы они закрывали на ней участки шириной 1 см (рис. 21). Затем в кювету или чашку наливают расплавленный горячий (около 60 С) раствор агара, который должен покрыть пластинку, хроматографическую бумагу и свободные края нижнего поддерживающего геля слоем толщиной около 4 мм. Необходи мое для этого количество раствора агара определяют расчетным или экспериментальным путем. После застывания геля в нем примерно посередине при помощи шаб [c.60]

Работая под тягой, вносят по 500 мл буфера для электрофореза в каждую камеру ). Следует убедиться, что источник напряжения подключен и контакты погружены в буфер. [c.380]

Буфер для электрофореза очень кислый и образует вредные пары, поэтому все работы следует проводить под тягой. [c.382]

Метод получения экстрактов клеток приведен в сжатой форме в табл. 4.2. Состав исходных буферов для электрофореза в крахмальном геле приведен в табл. 4.3. Компоненты для электрофоретического разделения и выявления в геле трех ферментов представлены в табл. 4.4. [c.121]

M цитратный буфер, pH 3,0 смешивают 1 М растворы лимонной кислоты и цитрата натрия до достижения pH 3,0. Буфер для электрофореза 1 М цитратный буфер разводят в 40 раз, получая 0,025 М цитратный буфер, pH 3,0 Буфер для нанесения образцов 0,025 мл 1 М цитратного буфера, 3,6 г 6 М мочевины, 2 г 20%-ной сахарозы, 0,1 мл [c.154]

После разделения ДНК гель окрашивают бромистым этидием (2 мкг/мл) в буфере для электрофореза 15 мин. [c.241]

Вообще говоря, перенос белков, обработанных ДСН, можно проводить в том же буфере, в котором проводят собственно электрофоретическое фракционирование. Это подтверждают наши результаты, приведенные в предыдущем разделе. В качестве буфера для переноса мы использовали наш рабочий буфер для электрофореза (0,424 М трис-НС1, pH 9,18) с добавлением 20% метанола. Полученные при этом результаты по качеству не уступают результатам переноса в трис-глициновом буфере. Единственным неудобством использования электрофорезного буфера для переноса является его более высокая проводимость. Ток при переносе в этом буфере значительно выше, вследствие чего требуется гораздо более интенсивное охлаждение. Снизить значение тока (до 1,2 А при 100 В) без потерь при переносе удается, вдвое уменьшив молярность буфера, т. е. работая с 0,212 М трис-НС1, pH 9,18, содержащим 20-% метанола. Включение метанола в буфер для переноса предотвращает разбухание геля. Кроме того, метанол может помогать извлечению ДСН из комплекса с белками и тем самым способствовать их ренатурации. В то же время в присутствии метанола некоторые белки преципитируют в геле, что осложняет их количественное извлечение из геля, особенно в случае крупных белков. [c.357]

Авторы следующей работы [Whittal er, Moss, 1981] сконструировали еще более простой прибор для электрофореза (рис. 165). В нем нет ни губок, ни прижимающего стекла. Пластинка Polygram EL-300 , упираясь в четыре выступа, изгибаетсЯ Так, что ее края оказываются погруженными в электродные буферы, а вся она находится в варсоле. Буфер для электрофореза здесь точно такой же, [c.487]

Буфер для электрофореза на ацетилцеллюлозе содержит 0,5% пиридина, 5% уксусной кислоты и 0,001 М ЕОТАв [c.270]

М мочевине ( pH 3,5). Буфер для электрофореза на DEAE-бумаге представляет собой 7%-ную муравьиную кислоту (pH 1,9) для более коротких олигонуклеотидов эффектив- [c.270]

Буфер для электрофореза (10 мМ трис-НС1, pH 8,0 1 мМ ЭДТА, 0,5 мМ NaO). На 1 л концентрированного десятикратного раствора [c.52]

Десятикратный буфер для электрофореза, содержащий трис-ацетат и ЭДТА (ТАЭ-буфер) ) (400,0 мМ трис-ацетат, pH 8,0 10,0 мМ ЭДТА). [c.282]

Электрофорез в неденатурирующем геле проходит относительно медленно, поскольку в геле и буфере для электрофореза отсутствует ДСН. [c.352]

Буфер для электрофореза (муравьиная кислота/уксусная куслота/вода, 5 15 80). На 1 литр [c.379]

Работая в перчатках под тягой на новом листе фильтровальной бумаги с полиэтиленовой подстилкой (Ben hkote), увлажняют электрофореграмму буфером для электрофореза с помощью ваты, стараясь не задеть полоску у старта шириной 1 см. Быстро помещают бумагу в прибор для электрофореза, расположив зону старта со стороны анода ( + ). Следует убедиться, что концы бумаги полностью погружены в буфер и в других точках бумага не соприкасается с буфером. Постепенно выводят напряжение до 400 В и проводят электрофорез в течение 45 мин. [c.380]

В центральной части пластиковой ячейки с платиновыми электродами на обоих концах устанавливают пластинку 1%-ного агарозного геля размером 10X7 см (можно с помощью пипетки наслоить на стеклянную пластинку 7X5 см 12 мл раствора агарозы). Пластинку геля погружают в буфер для электрофореза таким образом, чтобы над гелем находился слой жидкости высотой около 1 см, и проводят электрофорез. [c.240]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология