Элюирование электрофоретическое

Важное преимущество электрофореза на бумаге перед методом подвижной границы связано с возможностью полного разделения компонентов путем элюирования соответствующих зон. С помощью комбинирования сте-кания раствора по наклонной фильтровальной бумаге с электрофоретическим отклонением создан метод, позволяющий беспрепятственно разделять компоненты. [c.158]

Часто целесообразно при разделении комбинировать электрофоретический и хроматографический методы. Для препаративных целей последним лучше проводить электрофорез, чтобы получить более компактные полосы и избежать возможной частичной деструкции некоторых аминокислот из-за кислотного гидролиза после элюирования с бумаги. [c.395]

Хроматография на ДЭАЭ-сефадексе очень удобна для выделения из сыворотки IgG и для разделения белков этой фракции, обладающих разной электрофоретической подвижностью. Стартовый буферный раствор сначала вымывает из колонки IgG, имеющие низкую электрофоретическую подвижность. Быстро мигрирующие белки этого же класса выходят только при градиентном элюировании. Хроматография, на ДЭАЭ-сефадексе является также общепринятой методикой очистки миеломных IgG. [c.217]

Наибольшее число электрофоретических разделений рзэ было проведено в присутствии 0,05—0,25М лимонной кислоты [1249, 1304, 1310, 1380, 1381]. По существу, оптимальные условия в смысле концентрации и pH раствора близки тем, которые найдены для хроматографического разделения, причем зоны элементов располагаются в таком же порядке, как при элюировании из колонки. Поскольку методика не позволяет изменять pH электролита в ходе опыта, оптимальные условия выдерживаются только в пределах четырех-пяти соседних элементов, тогда как остальные разделяются лишь незначительно. Подобная картина показана на примере цериевой группы элементов. При этом реально разделять ее на фракции Ьа + Се + (Рг) и (Рг) + N0 + 8т, а У локализуется вместе с более тяжелыми землями. [c.148]

В работе Бордмэна и Партриджа [13], посвященной СО-гемо-глобинам (изоэлектрическая точка около pH 7,0) было показано, что на этой смоле можно фракционировать и нейтральные белки. Хойсмен и Принс [25] обнаружили любопытный факт порядок элюирования четырех СО-гемоглобинов из смолы ШС-50 при pH 6,5 отличается от того порядка, которого можно было ожидать, исходя из электрофоретической подвижности этих белков при pH 6,75. Скорости элюирования из этой смолы фракции исследованных гемоглобинов падает в ряду Р>А>В>С величина изоэлектрической подвижности возрастает в ряду А<Р<В<С. Очевидно, в основе разделения на смоле белков лежит особенность их общей структуры. Другой нейтральный белок, который был очищен на смоле ШС-50, [c.231]

Белковые фракции сыворотки крови исследовали электрофоретическим разделением на бумаге и последующей колориметрией в электрофотоколориметре 4-14 отдельных фракций, окрашенных бромфенолсиним и элюированных 0,1 N раствором МаОН. Общий белок определяли с помощью рефрактометра. [c.456]

Выделение и установление структуры. Вещество, по тучен-ное экстрагированием кожи земноводных 80%-ным метанолом, растворяли в 95%-ном спирте и хроматографировали на основной окиси алюминия в системе спирт—вода (градиентное элюирование). Хроматографически и электрофоретически однородное соединение [695а] было получено двукратным противоточным распределением в системе н-бутанол/вода в кислой (pH 2) и щелочной (pH 9) средах соответственно. [c.217]

В электрофоретически чистом виде после хроматографии на карбоксиметилцеллюлозе (элюирование ацетатом аммония). [c.336]

Одной 1ИЗ наиболее сложных проблем, возникающих при проведении препаративного электрофореза, является извлечение из геля разделенных компонентов. Для этой цели можно использовать несколько способов агаровый гель подвергают элюции буферными растворами, центрифугированию, замораживанию и оттаиванию, обработке агаразой [1437]. Однако эта проблема до сих пор еще не решена, так как помимо самого агара в выделенные фракции могут попадать и содержащиеся в геле примеси. Наилучшие результаты были получены при использовашга для элюирования фракций электрофоретического процесса [451]. Местоположение разделенных зон выявляли при помощи реплики на фильтровальной бумаге. Выделение отдельной фракции осуществляли следующим образом. [c.66]

Прерывистая электрофоретическая элюция. Чтобы избавиться от разведения выделяемых фракций, некоторые исследователи предпочапают использовать метод прерывистой элюции [175, 666, 1083, 1128]. В данном случае в ходе опыта электрофорез неоднократно прерывают и элюат каждый раз удаляют. Пай-дак [958] описал очень простой прибор, предназначенный для этой цели (рис. 47). Гель получают в стеклянной трубке длиной 70 мм и диаметром 30 мм, охлаждаемой снаружи электродным буферо м. Через середину геля проходит внутренняя трубка длиной 100 мм и диаметром 5 мм, оканчивающаяся в элюционной камере, ограниченной снизу диализной мембраной. Периодически через эту трубку пипеткой отсасывают буфер, содержащий элюированные белки, а в камеру вновь заливают Схематическое изображение прибо- [c.121]

Аналитические пептидные карты служат также для контроля процесса элюирования пептидов с колонки и последующего объединения фракций. Для этого небольшие порции (5 нмоль пептида) чередующихся фракций высушивают досуха, в1ювь растворяют в 50 мкл электрофоретического буфера (pH 6,5), наносят в виде прилегающих друг к другу полосок (1 см) на лист бумаги ватман № 1. После электрофореза полосу нейтральных пептидов вырезают, пришивают к другому листу бумаги и проводят электрофорез при pH 2,1. Кислые, основные и нейтральные пептиды окрашивают на картах флуорескамииом, фенантренхиноном и реактивом Паули. [c.361]

Подобное получение серии субклонов с требуемыми размерами укороченной вставки при раздельном лигировании элюированных из геля образцов ДНК и их независимой трансформации возможно только с использованием вектора, в нуклеотидной последовательности которого отсутствуют сайты расщепления для тетрануклеотидных рестрикционных эндонуклеаз, каковым и является фагмидный вектор pSequoiaT12, поскольку при наличии в векторной последовательности сайтов узнавания фермента, используемого для недорестрикции, образуется чрезмерно сложная картина электрофоретического разделения, в которой выбрать необходимые полосы не представляется возможным. [c.278]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология