Флуорохромирование

Дальнейшее развитие метод флуорохромировання в объеме пробы нашел в трудах Л. А. Киянской с соавт. (1966). В Ленинградском филиале ВНИИ медицинского приборостроения при нашем консультативном участии разработан метод и на его основе прибор для определения общей микробной (белковой) загрязненности воды с применением флуорохромировання. [c.92]

Интенсивность люминесценции измеряли на чувствительном флуорометре с импульсным возбуждением, двух-канальиой схемой и фотоумножителями. В качестве измерителя люминесценции был испытан также флуори-метр медицинский ФМЦ-2. Испытания выполнены на чистых культурах и на водах из различных источников и разной степени загрязнения (река, пруд, сточные воды) и водопроводной воде. Флуорохромирование бактерий в исследуемой воде проводили в течение 30 мин интенсивность люминесценции измеряли по сравнению с контролем, которым служила та же вода, таким же образом флуорохромированная, но после предварительного удаления бактерий и частиц фильтрованием через мембранный фильтр № 2. Результаты измерения сопоставляли с числом микроорганизмов, определяемых в этой же воде методом микроскопического подсчета по Разумову. [c.92]

Поскольку концентрирование бактерий на мембранных фильтрах до значительных количеств не представляет трудности, то возможно использование этого принципа для учета общего микробного загрязнения воды с достаточной точностью. Метод подсчета флуорохромированных бактерий на мембранных фильтрах представляется более перспективным, чем исследование в объеме пробы, так как не имеет основных недостатков последнего, а именно свечения фона воды и свечения красителя в растворе. [c.93]

Люминесцентно-микроскопический метод с концентрацией бактерий на мембранных фильтрах (по Т. 3. Артемовой и Л. Е. Корш, 1974). Метод флуорохромировання сконцентрированных из воды на мембранных фильтрах бактерии с дальксйш им их люминесцентно-микроскопическим подсчетом разработан в связи с потребностями практики в экспрессном определении общей микробной [c.94]

Фильтр с осевшими на него бактериями подсушивают сухим жаром до полного высыхания. Флуорохромирование производят в течение 2 мин помещением фильтра стороной с бактериями вверх на поверхность 0,2% раствора флуорохрома лактата этакридина на фосфатном 1/15 М буфере с pH 7,0—7,5, предварительно нагретого до температуры 70°С. Затем остатки красителя удаляют помещением фильтра на фильтровальную бумагу, смоченную дистиллированной водой. Фильтр перекладывают до тех пор, пока площадка под ним не перестанет окрашиваться. [c.97]

Установлена зависимость окрашивания клеток в разные цвета от способа флуорохромировання, концентрации флуорохрома, концентрации бактериальной суспензии, способа щиання и интенсивности обеспечения культуры кислородом и т. п., а не от возраста клетки. [c.110]

Учитывая ряд преимуществ флуорохромов для разделения jKHBbix и. мертвых микрооргани.змов, Т. 3. Артемова (1973) испытала акридиновый оранжевый, при.мулин, аурамин, родамин о Ж и некоторые другие красители. Объектами служили природная водопроводная вода и взвеси чистых культур Е. соИ в воде. Флуорохромирование бактерий велось на нелюминесцирующих мембранных фильтрах. [c.113]

В целях разработки методов различия живых и мертвых клеток в воде экспериментальным путем устанавливали условия флуорохромировання, а именно время контакта с красителем, концентрацию красителя, pH, температуру флуорохромировання, способ подготовки препарата и др. [c.113]

Наиболее чувствительным к точному соблюдению всех условий опыта является акридиновый оранжевый. Так, было подтверждено наличие зависимости цвета флуоресценции бактерий от концентрации красителя. Оптимум pH установлен для щелочных красителей 5,0—6,1, а для кислых красителей 7,0—8,5. Для нрнмулипа с успехом можно пользоваться широки диапазоном значений pH среды при флуорохромировании, но для акридинового оранжевого изменение pH на единицу с 5,5 до 5,6 может привести к противоположному толкованию результатов. [c.113]

На основании этих данных были предложены способы флуорохромировання бактерий, содержащихся в воде водоемов, и взвеси культур бактерий в воде, не подвергнутых какой-либо обработке, для установления соотношения живых и отмирающих в результате естественных процессов клеток. [c.113]

Серия опытов по испытанию свойств других флуорохромов по разделению живых и убитых хлором клеток показала хорошие результаты на чистых культурах с аурамином 00, родамином 6Ж и их сочетанием. РГнак-тивированные хлором клетки Е. соИ при флуорохромировании аурамином люминесцировали ярко-желтым цветом и отчетливо были видны по сравнению с тускло-зелеными живыми клетками. Родамин 6Ж окрашивал убитые хлором клетки в красный цвет по сравнению с желтыми живыми при сочетании флуорохромов 2 1 получалась весьма красочная картина — мертвые клетки светились тускло-красным, а их ядра ярко-желтым. Однако при натурных исследованиях водопроводной хлорированной воды эти флуоро.кромы не дали возможности определить соотношение живых и мертвых бактерий. [c.117]

При разработке метода нами были проведены специальные исследования условий приготовления микроскопических препаратов, флуорохромирования и применения различных цитохимических обработок. [c.179]

Фиксацию, заливку в парафин и последующее депарафини-рование срезов проводят согласно общепринятой гистологической технике с учетом следующего обстоятельства. Парафиновые срезы наклеивать на белок, как это принято при обычных гистохимических исследованиях, нельзя из-за сильной адсорбции красителя денатурированным белком. Поэтому готовят слабый водный раствор белка (примерно 1 капля белка на 1 мл воды), который и используется при нанесении парафиновых срезов на тщательно обезжиренное предметное стекло. Такое количество белка не вносит заметных искажений в свечение флуорохромированных препаратов. Вместе с тем его достаточно для прочного приклеивания среза к стеклу. [c.180]

Для приготовления постоянных препаратов срезы, доведенные до воды, помещают на 2—3 минуты в буферную смесь pH 3,6—4,0 (фосфатно-цитратную или ацетатно-натриевую). После этого последовательно проделывают следующие процедуры 1) флуорохромирование в растворе АО с концентрацией [c.180]

Флуорохромирование временных фиксированных препаратов производят, как для постоянных препаратов, но с той только разницей, что после промывания их сразу же просматривают под микроскопом. [c.181]

Обработку препаратов нуклеазами и экстрагентами проводят перед флуорохромированием. При этом желательно ставить контроль на действие самих растворов в тех же условиях (буфер, pH, температура, экспозиция), но без нуклеаз. [c.181]

Условия приготовления и фотометрирования препаратов следующие. Фиксация произведена 96%-ным этанолом, флуорохромирование АО в концентрации 1 5000, 3,6 (щель 0,06 мм, экспозиция 2 минуты). [c.185]

Флуорохромированные ядра контрольных препаратов дают два пика флуоресценции, соответствующие зеленому и красному свечению (рис. 23, а). Первый пик обусловлен комплексом АО-ДНК, второй — комплексами АО-РНК и АО-лабильная ДНК. [c.187]

Как видно из рис. 23, флуорохромированные ядра паренхимы этиолированных проростков гороха на контрольных препаратах дают большой пик флуоресценции в области 600 ммк и незначительный пик в области 530 ммк. После обработки [c.187]

В бумажной нромышленности люминесцентным методом обнаруживают двуокись титана и смоляные пятна в бумажной пульпе [93] при ее исследовании применяют флуорохромирование [94]. [c.273]

Методы флуорохромирования, т. е. обработки объектов флуорохромами, впервые были предложегсы Хайтингером [5] и в дальнейшем для различных целей разрабатывались многочисленными исследователями. В настоящее время известно несколько десятков органических соединений, с успехом используемых в качестве флуорохромов. К ним относятся [c.312]

Флуорохромирование проводят либо прижизненное, либо на фиксированных препаратах. Прижизненное флуорохромирование в свою очередь может быть осуществлено или на целом н ивотном или растительном организме (путем инъекции или введения с пищей), или на отдельных тканях и клетках. Прижизненное флуорохромирование особенно полезно при исследованиях функционального состояния и физико-химической характеристики органов, тканей и клеток. [c.313]

Для приготовления постоянных препаратов флуорохромированные срезы или фиксированные мазки на предметных стеклах быстро промывают в дистиллированной воде или буфере, проводят через 96°-ный спирт, карбол-ксилол и заключают в акриловый клей, полистирол или винилнн. Акриловый клей представляет собой раствор метакриловой смолы, поли-меризованной в ксилоле. Он быстро высыхает и вполне прозрачен для видимого и ультрафиолетового света до 300 ммк. Его применение для люминесцентной микроскопии было предложено Бухман с сотрудниками [7]. Шалумович рекомендует заключать в сахарный сироп [22, доп. сп.]. [c.313]

Если флуорохромированные препараты не подлежат длительному хранению, то исследовать их можно в воде или в глицерине. [c.314]

При флуорохромировании жиров и липоидов различными флуорохромами также могут быть выявлены их особенности ио специфическому характеру люминесценции. Перспективным здесь следует считать комбинированное использование различных жирорастворителей с флуорохромами. Особый интерес представляют возможности, открываемые при прижизненном флуорохромировании. Б этих условиях с большой полнотой и четкостью выявляется богатая структурированность клеток и ядер, [c.314]

Мейсель и Корчагин [12] на выделенных из клеток нуклеиновых кислотах и их производных показали, что акридиновый оранжевый, связываясь с дезоксирибонуклеиновой кислотой (ДНК) или ДНК-протеидом, придает им ярко-зеленую люминесценцию, в то время как комплексы этого флуорохрома с рибонуклеиновой кислотой (РНК) и ее протеидом люмипе-сцируют красным светом. Такие соотношения ими были обнаружены в случае прижизненного флуорохромирования клеток. Акридиновый оранжевый в этих условиях оказался весьма полезным цитохимическим реактивом. Аналогичные данные на фиксированных объектах были получены Шюммельфедером [6], а также Берталанфи [47] и Армстронгом [48]. Различная степень связывания акридинового оранжевого с ДНК и РНК зависит, по-видимому, от различной степени полимеризации этих кислот. [c.315]

Значительное число витальных и суиравитальных исследований над флуорохромированными тканями принадлежит Шюммельфедеру [6, 46]. Им установлено, что различные ткани по-разному меняют свое сродство к флуорохромам при повреждении и отмирании. Этот же исследователь удачно использовал флуорохромы для определения изоэлектрической точки для отдельных тканевых и клеточных компонентов. [c.315]

Прижизненное флуорохромирование растительных тканей и клеток широко используется для цито-физиологических исследований [3, 38] и для определения патологических состояний клеток (рис. 78). В частности, на растительных клетках Штруггером была показана возможность различения живых клеток от повреждепных и отмерших при помощи акридинового оранжевого. Успешным оказалось и применение люминесцентных исследований в радиобиологических опытах [40]. Детальное изучение люминесцентно-функционального состояния раститель- [c.316]

По нап1им данным, акридиновый оранжевый весьма пригоден для обнаружения внутриклеточных вирусных включений. По данным Авакяна с сотрудниками ирижизненное флуорохромирование этим красителем крайне ускоряет и упрощает обнаружение патологических изменений в клетках культуры тканей, зараженных вирусом полиомиелита, что весьма полезно для диагностики этого заболевания. [c.318]

Люминесцентной микросконии риккетсий посвящено небольшое число работ в них показана возможность выявления этих возбудителей при помощи флуорохромирования [23]. [c.318]

Ценные результаты по изучению тонкой структуры микробной клетки получены при помощи флуорохромирования акридиновым оранжевым, аурофосфином и берберином. Мы уже упоминали об исследовании Мейселя и Корчагина [12], обосновавшем цитохимические возможности люминесцентного различения нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) и соответствующих пуклеопротеидов. Эти данные получили полное подтверждение в ряде работ [33—35] показано, что у бактерий, принадлежащих к разным [c.320]

Прижизненное флуорохромирование дрожжевых клеток способствовало выяснению их тонкого строения и изучению структурных перестроек клеток, связанных с нормальным и патологическим метаболизмомДЗб, 37]. [c.320]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология