Фергюсона графики

Анализ полученных результатов. Как отмечалось в разд. 1.2.1, молекулярные массы полипептидных цепей определяют с помощью градуировочного графика. Однако при электрофорезе в геле с постоянной концентрацией (пористостью) не удается исключить ошибки, обусловленные различием свободной подвижности Уо исследуемого белка и белков-маркеров [148, 149]. Поэтому рекомендуется проводить электрофорез в нескольких гелях различной концентрации. При этом результаты определения молекулярной массы будут тем точнее, чем меньше систематическое отклонение при изменении общей концентрации акриламида. Полученные результаты можно проанализировать с помощью эмпирического уравнения Фергюсона [57] [c.32]

Как и в случае нуклеиновых кислот, электрофорез в геле — лучший метод определения типов и размеров капсидных белков. Перед электрофорезом белки денатурируют ДДС-Ыа, устраняя тем самым большинство проблем, вызываемых различиями удельных зарядов неденатурированных белков. Методы денатурации и гель-электрофореза белков описаны в руководстве [16]. Особое внимание следует обратить на методы обнаружения нетипичной миграции денатурированных ДДС-Ыа белков в геле (графики Фергюсона). Ниже описана быстрая методика диссоциации вирусных частиц и получения нуклеиновых кислот и белков для гель-электрофореза. [c.41]

Фергюсон и Клотц получили данные о скоростях фильтрации в динамических условиях на модели, воспроизводящей геометрию реальной скважины. Стволы бурили в блоках искусственного песчаника долотами диаметром 133 и 136 мм. На рисунках 6.13—6.16 показаны изменения скоростей фильтрации В динамических условиях для четырех буровых растворов при различных скоростях циркуляции. На графиках показаны также экстраполированные фильтрационные потери, определенные по методике АНИ. Следует отметить, что скорости фильтрации в динамических условиях были намного выше, чем в статических. Последние определяли путем экстраполяции результатов испытаний на фильтрационные потери по методике АНИ. Время, необходимое для получения постоянных скоростей динамической фильтрации, изменялось от 2 до 25 ч в зависимости от типа раствора и скорости его течения. На рис. 6.17 иллюстрируется повышение скорости фильтрации с увеличением скорости течения раствора. Чтобы показать расхождения в значениях скоростей динамической и статической фильтрации на рис. 6.17 приведены значения суммарного объема фильтрата, определенного по методике АНИ для соответствующих растворов. [c.262]

Как уже отмечалось выше, изучая подвижность макромолекул, нельзя не учитывать содержания бмс-акриламида в геле. Родбард и др. [1109] детально исследовали, как изменяется график Фергюсона в зависимости от концентрации б с-акрил-амида в гелях, содержащих 7,5% Г. На рис. 32 показано, что величина /Сг возрастает с повышением С до 5—87о, после чего падает. При значениях С от 10 до 50% Кт для всех белков асимптотически приближается к нулю. Величина i/o имеет максимум также при концентрации С около 10%, а при более вы-сО К их концентрациях достигает плато на уровне, характерном для каждого отдельного белка, причем этот уровень во всех случаях ниже значения Uo, полученного экстраполяцией соответствующей кривой к нулевой концентрации С (рис. 33). [c.82]

Различия между белками с одинаковыми или разными зарядами и(или) размерами, Хедрик и Смит [538] подробно исследовали белки методом электрофореза в полиакриламидном геле и пришли к заключению, что график Фергюсона дает важные сведения о заряде и размерах белковых молекул. Если на этом графике прямые для разных белков параллельны, т. е. значения i/o-различны, а значения Кт равны, то белки имеют оди-нако вые молекулярные массы, но различаются по заряду (рис. 34). С другой стороны, если значения Uo> одинаковы, а значения Кт разные, то белки характеризуются одним и тем же зарядом, но разными молекулярными массами (рис. [c.82]

Результаты, получеиные из анализа графика Фергюсона, позволяют выбрать наиболее перспективный метод для разделения компонентов данной смеси. Если мы имеем дело с изомерами, имеющими одинаковые размеры, то следует применягь. методы разделения по заряду, например электрофорез или понообмениую хроматографию. Если же молекулы различаются-по размеру, но не по заряду, то целесообразно использовать гель-фильтрацию или препаративный электрофорез в полиакриламидном геле, основанные на эффекте молекулярного сита. Метод анализа соотношений размер — заряд у белков был распространен также и на случаи связывания ими лигандов [539]. [c.85]

Методические преимущества электрофореза в полиакриламидном геле навели исследователей на мысль о создании таких его вариантов, которые позволили бы определять молекулярную массу макромолекул и в первую очередь белков, В разд. 1.11.1 пoдpoбiю обсуждался вопрос о том, что при электрофорезе в полиакриламидном геле разделение макромолекул зависит как от их размеров, так и от заряда. Отсюда следует, что для определения молекулярной массы необходимо исключить влияние заряда. Для этой цели разработано множество методов, которые можно разделить на две группы. В методах первой группы для определения молекулярной массы используют коэффициент задержки Д. Зависимость между Кт и молекулярной массой изучена еще недостаточно хорошо, и для ее выражения был предложен целый ряд уравнений [б 12, 1106, 1289, 1296]. Хедрик и Смит [538] построили графики зависимости коэффициентов задержки, определяемых по кривым Фергюсона, от молекулярной массы белков и обнаружили между ними линейную зависимость (рис. 75). Поскольку коэффициент задержки является функцией размера, а не массы молекулы [5, 1186, 1366], некоторые белки ведут себя аномально при электрофорезе, если отличаются от большинства других белков по форме молекулы или парциальному удельному объему. Так, например, полимеры ферритина и альбумина дают соответственно более низкие и более высокие значения Кг, чем можно было бы ожидать, исходя из их молекулярных масс [92, 538]. [c.217]

В процессе изучения нуклеиновых кислот методом электрофореза выяснилось, что на их электрофоретическую подвижность сильно влияет конформация. Фишер и Дингман [384] отметили, что подвижность полинуклеотидов при электрофорезе зависит не только от их размеров, но также от температуры и напряжения, при которых проводится разделение. Они обнаружили также, что поведение одноцепочечных и двухцепочечных молекул нуклеиновых кислот при электрофорезе сильно различается. В то время как для одноцепочечных РНК значение Кт на графиках Фергюсона является функцией молекулярной массы, для двухцепочечных молекул эта величина очень мало зависит от молекулярной массы. Авторы пришли к выводу, что двухцепочечные молекулы мигрируют в геле концом вперед, т. е. в таком положении, при котором лобовое сопротивление невелико. Аналогичные результаты были получены и в другой работе [533] (рис. 124). Недавно Лишанская и Мазовицкий [c.390]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология