Аффинность биологическое значение

Для оценки эффективности аффинной хроматографии су щественное значение имеет выход исследуемого белка на каждой стадии элюирования. В связи с этим все полученные фракции сохраняют до окончания эксперимента. Выход исследуемого белка может варьировать в широком диапазоне. Добавление белка-носителя приводит к увеличению выхода биологически активного материала, но может также повлиять на степень очистки, При вымывании лиганда с сорбента наблюдается уменьшение выхода сорбированного белка или кажущегося выхода выделяемого биологически активного материала. Степень отщепления лиганда оценивают по содержанию лиганда во фракциях, полученных при промывке сорбента до нанесения образца [8], или по отщеплению радиоактивной метки при использовании радиоактивно меченных лигандов. [c.186]

Принимая во внимание, что суммарная концентрация доступных положений матрицы /пх должна быть рассчитана по экспериментальным данным, колоночная хроматография представляет собой простейший метод количественной аффинной хроматографии, поскольку найденное из эксперимента значение гпх затем будет использоваться в расчетах других экспериментов, выполненных на той же колонке с тем же растворенным веществом. Однако в некоторых примерах, особенно в случае биологических аффинных матриц, таких, как миофибриллы мышц [28], колоночный метод нельзя использовать из-за проблем, связанных со скоростью потока, поэтому в количественной аффинной хроматографии находят применение также эксперименты распределительного равновесия. [c.197]

Важное условие зональной аналитической аффинной хроматографии состоит в том, что концентрация подвижного компонента [Р] по мере прохождения зоны через слой адсорбента постоянно изменяется. Поэтому члены, содержащие [Р], не включаются в выражения, относящиеся к объемам элюирования и константам диссоциации (см., например, приведенные выше уравнения). Пренебрежение [Р] допустимо только в том случае, если этот параметр мал по сравнению с константой диссоциации /Сь- Проведение экспериментов по зональному элюированию при низком [р] обычно легко осуществимо и особенно желательно при анализе труднодоступных биомолекул. Использование низких [Р] в зональном анализе аналогично применению низких концентраций фермента в твердофазном ферментативном кинетическом анализе [7]. Было экспериментально показано (например, в работе [5]), что при низком (по отношению к /Сх) количестве фермента, введенного в аффинную матрицу, рассчитанные константы диссоциации практически не зависят от количества использованного подвижного компонента. В то же время в работе [8] предложены уравнения расчетов по методу постоянного элюирования/фронтального анализа, в которые входит точное значение концентрации подвижного компонента, нанесен ного на аффинную колонку (см. также гл. 6). С практической точки зрения метод зонального элюирования экспериментально более удобен и требует гораздо меньшего количества подвижного компонента. Таким образом, зональное элюирование, по-видимому, наиболее подходящий метод для изучения большинства взаимодействий, представляющих биологический интерес. Следовательно, существует необходимость в чувствительных аналитических методах для проведения элюирования и детектирования малых количеств подвижного компонента. [c.223]

За последние 20 лет аффинная хроматография стала одним из наиболее эффективных методов выделения и очистки биополимеров. В настоящее время этот метод широко используется во многих лабораториях не только для рутинного выделения того или иного объекта, но и в качестве тонкого инструмента биохимического исследования, позволяющего изучать количественные параметры взаимодействия компонентов в биологических системах. В этой связи большое значение приобретает доступность практических руководств, посвященных химическим и методологическим аспектам аффинной хроматографии, В отечественной научной литературе остро ощущается отсутствие такого рода изданий. Вышедшая в 1980 г. в издательстве Мир монография Я. Турковой Аффинная хроматография в свое время несколько восполнила этот пробел, однако эта книга охватывает литературу только по 1976—1977 гг. [c.5]

На протяжении последнего десятилетия мы стали свидетелями появления количественной аффинной хроматографии как метода изучения взаимодействий между различными реагирующими веществами. Этот еще относительно молодой метод вызывает несомненный интерес, поскольку в некоторых случаях дает возможность на основе специфического взаимодействия с иммобилизованным реагентом количественно оценивать обратимую реакцию, протекающую в биологических условиях, что продемонстрировано на примере использования оксамат-сефарозы для изучения взаимодействия NADH с различными изоферментными формами лактатдегидрогеназы в неочищенном тканевом экстракте [6]. Другим преимуществом аффинной хроматографии, вероятно, является отсутствие каких-либо ограничений для значений констант равновесия, которые могут быть измерены этим методом. Из двух рассмотренных здесь подробно примеров очевидно, что количественная аффинная хроматография весьма удобна для характеристики относительно слабых взаимодействий ( As<1000 М ), оценка которых вызывает затруднения при использовании других методов, таких, как равновесный диализ , из-за сложности измерения различий между полной и свободной [c.214]