Метод Фиске Суббароу

Реактивы для определения неорганического фосфата методом Фиске—Суббароу (с. 34). [c.38]

Для определения НК по фосфору, наряду с методом Фиске-Суббароу, применяется также метод определения ортофосфата по Аллену с амидоловым реактивом [И]. Кроме того, в практику определения нук еиновых кислот в растениях по фосфорному компоненту А. Н. Белозерским и И. С. Кулае-вым [1] был введен метод определения ортофосфата с использованием двуххлористого олова по Вейль-Малербу и Грину. [c.29]

Осадок белка удаляют фильтрованием. На определение неорганического фосфата из каждой пробы после фильтрования берут по 0,8 мл ТХУ-фильтрата, добавляют по 0,1 мл неразведенного раствора эйконогена, 0,3 мл молибденового реактива и по 1,3 мл воды. Через 10— 15 мин выдерживания на водяной бане (или в термостате) при 37— 40 °С пробы колориметрируют. Учитывая нестабильность стандартной кривой при определении неорганического фосфата методом Фиске— Суббароу, желательно одновременно с опытными пробами ставить 3— [c.399]

Минерализация. Количество взятого на минерализацию раствора зависит от содержания в анализируемом фосфорсодержащем органическом соединении фосфата и от чувствительности используемого для определения фосфата метода. При определении неорганического фосфата методом Фиске—Суббароу на минерализацию берут такое количество исследуемого раствора, чтобы в 1 мл полученного после минерализации и нейтрализации раствора содержалось от 0,2 до 1,0 мкмоль фосфата. 1—2 мл взятого на анализ раствора помещают в небольшую колбу для сжигания (колбу Кьельдаля) или жаростойкую пробирку, добавляют 0,3 мл концентрированной серной кислоты и, укрепив колбу (пробирку) слегка наклонно, осторожно нагревают раствор на горелке, песчаной бане или на специальной электрической плитке до тех пор, пока почти полностью выпарится вода и раствор в колбе приобретет бурую окраску (если органического вещества в пробе мало, то по-бурения можно и не заметить). После этого колбу (пробирку) охлаж- [c.44]

Определение по фосфору. Исследуемый раствор нуклеотидов или элюаты из участков бумаги или сорбента, содержащие АТФ, АДФ и АМФ, помещают в колбочки для сжигания. В качестве контроля используют растворы или элюаты из участков бумаги, не содержащие адениловых нуклеотидов. Проводят минерализацию проб и определяют неорганический фосфат по методу Фиске—Суббароу (с. 34). [c.187]

Реактивы для определения фосфора методом Фиске— Суббароу (с. 34). [c.246]

При 100°С в 1 н. НС1 гидролизуется на 100%, за 2 мин. Более стабилен, чем креатинфосфат, к реактивам при определении по неорганическому фосфату по методу Фиске — Суббароу. [c.496]

МЕТОД ФИСКЕ—СУББАРОУ [c.34]

Для определения АТФазной активности к 1 мл среды инкубации добавляется 0,1 мл раствора миозина в 0,5 М КС1, содержащего около 10 мг белка в 1 мл. По завершении инкубации (обычно 10—15 мин) реакцию останавливают добавлением 1 мл 5%-ной трихлоруксусной кислоты и в ТХУ-фильтрате определяют неорганический фосфат методом Фиске—Суббароу (с. 34). [c.400]

Метод Херса представляет собой модификацию метода Фиске— Суббароу. Благодаря небольшому снижению кислотности (0,25 н.) он лозволяет определить неорганический фосфат в присутствии легко-тидролизуемых в кислой среде фосфорсодержащих соединений, таких, как АТФ, АДФ, глюкозо-1-фосфат, неорганический пирофосфат. [c.35]

Креатинфосфат, характеризующийся высокой лабильностью в кислой среде, можно определить по содержанию фосфора методом Фиске—Суббароу в безбелковом экстракте, из которого предварительно удален неорганический фосфат. [c.190]

Реактивы для определения Фн методом Фиске—Суббароу или Самнера. [c.371]

Контрольная проба не содержит глюкозо-6-фосфат. Реакцию начинают добавлением ферментного препарата при 30 °С. После 10-ми-нутноч инкубации реакцию останавливают добавлением 1 мл 10%-ной трихлоруксусной кислоты. Пробы охлаждают до О °С, выпавший осадок денатурированного белка отделяют центрифугированием при 2000 об/мин 3 течение 10 мин. В полученных супернатантах pH доводят до 7,0 (конечный объем пробы 3 мл) и определяют содержание Фн методом Фиске—Суббароу или Самнера, используя аликвоты супернатанта объемом 0,5—1 мл (с. 34, 35). [c.372]

Нестабилен в растворе, особенно в мислоте и щелочи. При комнатной температуре и pH 7,0 за 30 мин гидролизуется на 20%, в 0,5 н. НС1 — за 10 мин. на 45°. Растворы стабильны при —35° С. Гидролиз в кислоте ускоряется молибдатом (определяется как неорганический фосфат по методу Фиске—Суббароу). [c.496]

При 100° С в 0,1 н. НС1 гидролизуется на 1007о в течение 1 мин (определяют как неорганический фосфат по методу Фиске — Суббароу). Устойчив при pH 8,0—9,0. [c.496]

При 100° в 0,1 н, НС1 гидролизуется на 100% в течение 1 мин, при 25° С в 0,5 н. НС1 — на 50% за 4 мин. Гидролиз ускоряется молибдатом (определяется как неорганический фосфат по методу Фиске — Суббароу). При pH 7,8 гидролизуется очень медленно. Твердые соли стабильны. [c.496]

Поглощение кислорода измеряется при помощи манометрического метода Варбурга. Количество фосфатов определяется по методу Фиске — Суббароу. [c.230]

Надлер Ф. И. Применение нитрозо-[3-нафтола в качестве восстановителя при определении фосфора по методу Фиске-Суббароу. Биохимия, 1944, 9, вып. 6, с. 376—378. Резюме на англ. яз. 4889 [c.190]

В методе Кори определяют освобождающийся в результате реакции фосфоролиза гликогена неорганический фосфат. Метод используют как для титрования активной формы фермента (фосфорилазы а), так и для измерейия активности его неактивной формы (фосфорилазы б), которая осуществляет катализ только при добавлении в реакционную смесь аденозин-5 -фосфата, АМФ. В смесь, содержащую фермент в буферном растворе, вносят гликоген, глюкозо-1-фосфат, в случае фосфорилазы б также и АМФ. Через определенные промежутки времени отбирают пробы и методом Фиске — Суббароу определяют в нлх содержание неорганического фосфата (Умбрейт и соавт., 1951). Освободившийся неорганический фосфат в присутствии сильной кислоты образует с молибдатом аммония интенсивно желтую соль (ЫН4)зН4[Р(М02О7)б]. Фосфомолибдат аммония восстанавливается далее в присутствии эйконогена (натриевой соли 1-амино-2-нафтолсульфоновой кислоты) до ярко-синего продукта, концентрацию которого измеряют фотометрически. [c.100]

Для определения активности фосфорилазы в гомогенатах тканей используют способность фермента освобождать неорганический фосфат из глюкозо-1-фосфата в присутствии или отсутствии АМФ. Субстратная смесь, содержит 0,1 М глюкозо-1-фосфат, 2% гликоген, 0,03 М АМФ я 0,2 М NaF (pH 6,1). К 0,05 мл субстратной смеси добавляют 0,05 мл 1% гомогената ткани и инкубируют при 37 °С в течение О, 10, 20, 40 мин. После окончания инкубации к пробам добавляют 0,5 мл 10% раствора ТХУ и 3,7 мл ледяной дистиллированной воды. Выпавшие в осадок белки удаляют центрифугированием, а в надосадочной жидкости определяют количество образовавшегося неорганического фосфата по методу Фиске—Суббароу. Для этого к пробе добавляют 0,5 мл смеси, состоящей из равных количеств 2,5% раствора молибдата ам1мония и 5 и. раствора H2SO4 и 0,2 мл основного раствора эйконогена. Через 10 мин определяют оптическую -плотность раствора при 620 км я рассчитывают нол-ичество неорганического фосфата. В этих условиях количество освобождающегося неорганического фосфата пропорционально времени инкубации и количеству фермента. [c.143]

Рис. 87. Калибровочный график для определения количества неорганического фосфора методом Фиске — Суббароу

Количество неорганического фосфора, образовавшегося в ходе ферментативной реакции, определяют колориметрически методом Фиске — Суббароу. Сущность его заключается в том, что фосфорная кислота образует с молибденовой кислотой комплексное соединение, которое легко восстанавливается различными восстановителями с образованием окрашенной в синий цвет молибденовой сини. Образовавшийся раствор синего цвета той или иной интенсивности сравнивают со стандартным раствором соли фосфорной кислоты, который подвергают той же самой процедуре. [c.240]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология