Общие методы изучения свойств вирусов

Один метод локализации со специфической физиологической активностью был позаимствован нз ПЭМ. Этот метод меток поверхности клетки, который, будучи применен к образцам для РЭМ, приводит к образованию на поверхности клетки морфологически различаемых или аналитически идентифицируемых структур. Такие методики в сочетании с растровой электронной микроскопией высокого разрешения позволяют изучать природу, распределение и динамические свойства антигенных и рецепторных состояний на поверхности клеткн. Методы нанесения меток на поверхность клетки в общем случае достаточно сложны и включают процедуры иммунохимической и биохимической очистки. Подробные ссылки на них можно найти в работах [359—361], но сущность методик состоит в следующем. Для крепления антител в определенных антигенных состояниях на поверхности клетки используются стандартные иммунологические процедуры. Хитрость состоит в том, чтобы модифицировать антитела таким образом, чтобы они также несли морфологически различимую метку, такую, как латексные шарики или сферы из двуокиси кремния, распознаваемый вирус, как, например, вирус табачной мозаики, или один из Т-четных фагов, как показано на рис. 11.18, илн белковая молекула известных размеров, как ферритин или гемоцианин. В работе [362] (рис. 11.19) использовались гранулы золота, которые имеют большой коэффициент вторичной электронной эмиссии. Одна часть антитела имеет средство для специфичного антигенного закрепления на поверхности клетки, в то время как другая часть несет морфологически различимые структуры. В настоящее время иммунологические методы достигли такого уровня, когда они не могут быть использованы для изучения как качественных, так и количественных характеристик поверхности клетки [363, 364]. [c.244]

В. ОБЩИЕ МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ СВОЙСТВ ВИРУСОВ [c.38]

Изучен молекулярный вес ДНК из бактериофага Т2. Скорость седиментации и другие свойства ДНК, выделенной без механического разрушения (избегая быстрого перемешивания, отсасывания пипетками и других операций, приводящих к гидродинамическому сдвигу), дали величину молекулярного веса 50-10 —120-10 [185]. Анализ радиоавтограмм бактериофага, меченного или ДНК из вируса показал, что ДНК в каждой частице представляет собой единое структурное целое [186] и имеет форму неразветвленной палочки длиной примерно 52 л, что соответствует молекулярному весу 110-10 [187]. Дальнейшее развитие молекулярного авторадиографического метода дало наиболее изящный метод для определения молекулярного веса [188[. Молекулы ДНК вкрапливали в эмульсию, чувствительную к радиации -частицы, возникающие нри распаде Р дают треки, которые, расходясь из точки, где находился источник, образовывали вспышки. Расчет среднего числа треков на вспышку давал число атомов Р - на частицу, и, следовательно, из специфической активности использованного фосфора можно было рассчитать общее содержание фосфора на молекулу ДНК. Этим путем было показано, что бактериофаг Т2 содержит одну единственную молекулу ДНК, натриевая соль которой имеет молекулярный вес 130-10 —160-10 . [c.561]

На ранних этапах изучения инфекционной РНК ВТМ важно было установить отсутствие в ней вирусного белка с большей точностью, чем это позволяет чувствительность описанных методов. При использовании стандартных методов выделения нуклеиновых кислот содержание белка в выделенном препарате редко бывает ниже 1 %, а в случае ВТМ это соответствует комплексу одной молекулы РНК ВТМ с одной субъединицей оболочечного белка. Однако если выделять РНК в присутствии бентонита, то загрязнение препарата белком значительно снижается. А в случае ВТМ содержание примеси можно снизить еш,е больше (до 1 белковой субъединицы на 20—50 молекул РНК), если использовать метод реконструкции вируса (см. ниже). Определение следовых количеств примесей всегда сопряжено с трудностями методического характера, а достоверность результатов, полученных с помощью различных тестов на минимальных концентрациях веществ, сомнительна. Для определения примеси белка в препаратах вирусных нуклеиновых кислот были поставлены опыты с радиоактивной меткой ( 8) белка. Все, что удалось извлечь из этих опытов, сводится к тому, что содержание остаточного белка, судя по количеству метки, соответствует 0,04% (при пересчете на содержание серы в белковой оболочке ВТМ). Действительно, то соотношение аминокислот, которые в следовых количествах были обнаружены в препаратах нуклеиновых кислот, не соответствует количественным соотношениям этих же аминокислот в белковой оболочке. Тот факт, что препараты, содержащие 0,04 и 1% белка, не различаются по своей инфекционности (на 1 мг РНК), убедительно доказывает, что инфекционность — свойство, присущее вирусной РНК [142, 455]. Положение это убедительно было доказано только для РНК ВТМ. Однако нет никаких оснований сомневаться в том, что вывод этот носит общий характер и что инфекционность всех вирусов заключена в их нуклеиновых кислотах. [c.179]

На основании сравнительного изучения физико-хид1ических свойств вирусного нуклеопротеида и пустой вирусной белковой оболочки, обнаруженной в препаратах вируса желтой мозаики турнепса (ВЖМТ), Маркхэм [1147] пришел к выводу, что РНК вируса долн на находиться внутри белковой ободочки. Эта точка зрения сейчас ун<е широко подтверждена в отношении этого и других вирусов данными рентгеноструктурного анализа. Крик и Уотсон [417] предположили, что белковые оболочки мелких вирусов построены из большого числа идентичных субъединиц, образуюпщх либо палочкообразные частицы со спиральной симметрией, либо сферические структуры с кубической симметрией. Последующие рентгенографические и химические-исследования подтвердили эту точку зрения. Каспар и Клуг [332] сформулировали общую теорию, ограничивающую возможное число и расположение белковых субъединиц, образующих ободочки мелких изометрических вирусов. Наши современные знания о крупных вирусах с более сложной симметрией и структурой основаны на данных электронной микроскопии с использованием методов негативного контрастирования и ультратонких срезов. [c.12]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология