Выбор pH, буферов и ионных условий

Выбор pH, буферов и ионных условий [c.211]

Правильный выбор подвижной фазы в ионообменной хроматографии связан с преодолением больших трудностей, чем в любом другом варианте хроматографии. Элюент практически всегда состоит в основном из воды. Для поддержания постоянного pH к элюенту добавляют соответствующий буфер, а для улучшения разделения или для селективного элюирования (или удерживания) компонентов определяемой смеси вводят комплексообразующие агенты. Таким образом, для выбора элюирующих растворителей необходимо всесторонне изучить ионные равновесия в водных растворах. Выбор подвижной фазы сложен, и значительное количество времени и усилий можно сэкономить, правильно используя литературу по ионообменной хроматографии [50, 51]. Условия эксперимента можно подобрать, изучив условия равновесия между ионообменником, определяемым веществом, с одной стороны, и растворами с различными pH и концентрациями комплексообразующих агентов — с другой. Повторяя эту процедуру для каждого компонента определяемой системы, можно подобрать условия анализа. [c.82]

Небиоспецифические взаимодействия (например, образование ионной пары между подвижным компонентом и матрицей), приводящие к нежелательному дополнительному удерживанию, должны быть исключены соответствующим выбором буфера и условий проведения эксперимента [5]. Природа неспецифического взаимодействия определяет в конечном счете условия, необходимые для его исключения. [c.221]

Этот выбор определяется, в первую очередь, условиями растворимости и сохранности материала препарата. Эти соображения мoгy J диктовать pH и ионную силу буфера, наличие в нем мочевины и детергентоп. Одпако надо иметь в впду и возможное воздействие выбора элюента на ход самого хроматографического процесса. Во-первых, такое воздействие может проявляться в изменениях конформации пли плотности упаковки макромолекул, диссоциации белков па субъединицы, диссоциации кофакторов от ферментов и др. Во-вторых, следует проверить устойчивость материала матрицы к выбранному значению pH и диссоциирующим добавкам. Наконец, не следует упускать пз виду возможности влияния элюента на взаимодействие разделяемых веществ с материалом матрицы, т. е. [c.135]

Некоторое время считалось, что анализ ионных или ионогенных соединений следует проводить методом ион-париой хроматографии с обращенными фазами. Однако в настоящее время исследователи останавливают свой выбор либо на традиционном варианте ионообменной хроматографии, либо на хроматографии с применением немодифициро-ванного силикагеля или оксида алюминия. В последнем случае применяют водные растворители и буферы. Хроматография на немодифицированном силикагеле или оксиде алюминия имеет существенные преимущества по сравнению с ОФ-вариаитом. Во-первых, свойства сорбента не меняются от партии к партии, во-вторых, сорбенты в меньщей степени подвержены гидролизу и, наконец, при анализе таких проб, как сыворотка, не требуется предвар1ггельная очистка [275]. Оксид алюминия ие изменяет своих свойств при использовании водных элюентов с pH от 2 до 12. Силикагель растворим в воде при рН>8, однако этот недостаток может быть преодолен при насыщении растворителя силикагелем в фор-колонке. При использовании ТСХ описанные преимущества реализуются наилучшим образом (см. разд. 1П, Б, 2). Учитывая взаимное влияние буфера, растворенного вещества, рК, состава элюента и pH, можно варьировать условия и тем самым оптимизировать процесс разделения. Разработанные [c.399]

Интересующимся читателям можно рекомендовать обзорную статью Филлипса [25] с критическим рассмотрением этой области, особенно определений термодинамических параметров комплексообразования, а также другие статьи той же группы [29] и работу Такуи Хана и Мартелла [30]. Однако здесь следует подчеркнуть, что не все биохимики при работе с ферментами и, в частности, при исследовании этих комплексов подходят к ним со строгих физико-химических позиций. Это проявляется в недостаточно правильном выборе ионной силы, интервалов pH и температуры и особенно буфера, который почти никогда не бывает инертным по отношению к ионам металлов, хотя его взаимодействие с ними иногда незначительно. Таким образом получаются кажущиеся (или эффективные ) значения констант устойчивости, которые зависят от выбора экспериментальных условий [c.664]

Принципиальной основой ионообменной хроматографии является то, что сродство вещества к ионообменнику зависит от электрических свойств его самого и относительного сродства других заряженных веществ, находящихся в растворителе. Следовательно, связанное вещество можно элюировать с помощью изменения pH до значения, изменяющего заряд вещества, или добавлением конкурирующего вещества, одним из примеров которого могут служить соли. Поскольку различные вещества обладают разными электрическими свойствами, условия элюирования будут меняться для каждого вида связанных молекул. В общем, для получения хорошего разделения следует выбрать либо непрерывное элюирование в градиенте ионной силы, либо ступенчатое элюирование, (Градиент только pH не используют по причине трудности создания его без одновременного увеличения ионной силы.) При хроматографии на анионитах постоянно повышают либо pH и ионную силу, либо только ионную силу элюента. Хроматографию же на катионитах проводят как в градиенте pH, так и в градиенте ионной силы элюирующего буфера. На практике выбор условий элюирования проводится методом проб и ошибок с учетом условий стабильности анализируемого вещества. Напри- [c.211]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология