Ступенчатое элюирование

Анализируемый раствор пропускают через колонку с ГДЦ, который сорбирует ионы молибдена(У1) и вольфрама(У1). Далее проводят ступенчатое элюирование сорбированных ионов молибден (VI) десорбируют 0,3 М раствором гидроксида натрия в 0,15 М сульфате натрия, после десорбции молибдена (VI) вольфрам(VI) вымывают 0,1 М раствором гидроксида натрия. В растворах после разделения молибдат- и вольфрамат-ионы определяют фотометрическим методом. [c.332]

Фракционирование полисахаридов на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой (31] проводят следующим образом. В колонку полисахариды вводят в виде водного раствора максимальной концентрации. Вначале ДЭАЭ-целлюлозу в колонке промывают водой, чтобы определить, удерживаются ли полисахариды этой целлюлозой. После этого проводят ступенчатое или непрерывное градиентное элюирование. Непрерывное градиентное элюирование позволяет определить число фракций и концентрации электролитов, необходимые для ступенчатого элюирования каждой из этих фракций. Ступенчатое вымывание позволяет лучше разделить полисахариды на фракции, чем непрерывное градиентное элюирование. Скорость протекания элюента через колонку не должна превышать 1,5 мл в минуту. Фракции объемом 10—20 мл собирают обычно с помощью автоматического коллектора. [c.47]

ТСХ можно использовать для предсказания условий ступенчатого элюирования для препаративных разделений, как показано на рис. 1.27 [97]. Три системы ТСХ, использующие подвижные фазы прогрессивно увеличивающейся полярности, сравнивали для разделения пары более простых эфиров гликоля. На основе этой информации, исходя из больших коэффициентов разделения и соотношений между а и нагрузкой, приведенных в табл. 1.5, около 100 г смеси разделили всего за 7 мин в ус- [c.65]

Рекомендуется до нанесения образца предварительно промывать пластинки путем проявления растворителя, чтобы уменьшить загрязнения, которые могут быть затем выделены вместе с интересующим компонентом в процессе ступенчатого элюирования. Пластинки с силикагелем обычно предварительно промывают смесью хлороформ—метанол (1 1 по объему) или этиловым эфиром, содержащим 1 % аммиака или уксусной кислоты в зависимости от того, будет последующая подвижная фаза кислой или щелочной. Для этого предварительного проявления пластинки могут быть оставлены в баке на ночь. Затем пластинки сушат в печи или в вакуумном эксикаторе. [c.135]

Следует отметить, что градиентное элюирование имеет определенные преимущества по сравнению со ступенчатым. При нем изменение среды происходит постепенно без резких скачков, которые во время ступенчатого элюирования могут стать причиной артефактов. Например, если слишком рано ввести новый буферный раствор, медленно мигрирующая часть белков из предыдущей ступени элюирования выйдет из колонки, имитируя новый пик. [c.23]

Г. Подбор условий хроматографии. Можно применять как ступенчатое, так и градиентное элюирование. Ступенчатое элюирование удобно только в тех случаях, когда компоненты фракционируемой смеси элюируются при существенно различающихся значениях pH и молярности элюента. [c.212]

При ступенчатом элюировании применяют последовательно несколько растворителей, причем каждый следующий растворитель является более эффективным элюирующим агентом. Такой метод может ускорить элюирование компонентов, прочно удерживаемых сорбентом. [c.456]

Для того чтобы повысить скорость движения медленно движущихся зон, элюирующую способность элюента можно повысить скачкообразно (ступенчатое элюирование) или непрерывно (градиентное элюирование). Принципы ступенчатого и градиентного элюирования, а также принципы разнообразных устройств для градиентного элюирования обсуждаются в обзоре Снайдера [24]. Для специалистов, использующих колоночную экстракционную хроматографию, может представлять интерес планирование эксперимента при градиентном элюировании. Этот вопрос рассмотрен Снайдером и Саундерсом [25]. [c.89]

В общем, как в случае градиентного, так и в случае ступенчатого элюирования (при условии, что при ступенчатом элюировании предусматривают достаточно большое число стадий) результаты получаются аналогичные. Поэтому возможности обоих методов одинаковы. [c.89]

Ступенчатое элюирование это метод, который чаще всего выбирают при массовых анализах, когда возникает необходимость в анализе образцов, содержащих компоненты, сильно различающиеся по скоростям движения. Если разделение проводят в условиях линейной изотермы, объемы элюентов не будут зависеть от [c.89]

Если состав образца неизвестен или если возникает необходимость анализировать образцы в условиях нелинейной изотермы, при ступенчатом элюировании необходимо обращать особое внимание, в какой момент хроматографирования следует изменить состав элюента. Если элюент надо менять слишком часто, то методика становится довольно утомительной. Все эти трудности можно обойти при использовании элютивного метода с градиентным элюированием. [c.90]

Рис. 24.4. Ступенчатое элюирование смесей кислот мукополисахаридов [13].

В основе разделения нуклеиновых кислот на гидроксиапатите лежит взаимодействие между отрицательно заряженными фосфатными группами полинуклеотида и положительно заряженными ионами кальция в кристаллах сорбента [60]. Следовательно, элюирование нуклеиновых кислот с гидроксиапатита можно проводить либо в градиенте концентрации фосфат-иона, либо увеличением температуры колонки при постоянном значении pH и концентрации солей в элюенте [61]. При ступенчатом элюировании иногда наблюдается появление артефактов (рис. 38.3), вероятно, из-за неправильно подобранных колонок или вследствие нарушения оптимального соотношения ДНК — сорбент [62]. [c.72]

Нативную ДНК можно отделить от денатурированной ДНК и комплексов ДНК-РНК хроматографией на нитроцеллюлозе, причем порядок выхода нуклеиновых кислот при ступенчатом элюировании будет обратным порядку выхода из колонки с гидроксиапатитом [57, 78]. Путем модификации существующей техники хроматографии на нитроцеллюлозе [79] достигнута почти 100-кратная очистка меченой ДНК [80]. [c.75]

ЖТХ Метаболиты фу-радана (группа карбаматов) в растениях Кремневая кислота, флоризил Диэтиловый эфир—н-гексан, хлороформ, этилацетат, метанол, ступенчатое элюирование 64 [c.257]

При определении ММР полиэтилена методом ГПХ получено хорошее соответствие с результатами обычного ступенчатого элюирования [59]. В этих экспериментах насадкой служил коммерческий стирогель, а фракционирование вели в ТХБ при 135 °С. Для анализа полиэтилена необходима колонка с высокой разрешающей способностью в диапазоне молекулярных масс более 10 , поскольку кривая распределения этого полимера сильно асимметрична и простирается в область чрезвычайно [c.288]

Недостаток элюентной хроматографии состоит в том, что в некоторых случаях кривые элюирования имеют значительную ширину. Это затрудняет разделение и делает неточным определение площади под кривой. Выбор элюента сильно влияет на величину объема раствора, необходимого для элюирования данного иона, и косвенно — на форму кривой элюирования. Сильнее всего размываются полосы, соответствующие тем ионам, которые наиболее прочно удерживаются ионитом. Чтобы избежать нарастающего размывания полос, для многих анализов целесообразно применять ступенчатое элюирование. В этом случае сначала элюируют один или несколько сортов ионов одним элюентом, а затем завершают элюирование другим элюентом, более эффективно выделяющим ионы, оставшиеся в колонке. В рассмотренном выше примере разделение достигается быстрее, если после элюирования ионов натрия увеличить концентрацию соляной кислоты. Можно применять также непрерывное увеличение концентрации элюента (град и-е н т н о е э л ю и р о в а н и е, гл. 10. 9). [c.109]

Как правило, состав элюента нужно выбирать с таким расчетом, чтобы коэффициент разделения, равный отношению коэффициентов распределения, достигал высоких значений. Следует, однако, отметить, что на практике оптимальный состав элюента не всегда совпадает с составом, соответствующим максимальному значению коэффициента разде,ления. Причина этого обстоятельства состоит в расширении кривых элюирования, возникающем при высоких коэффициентах распределения (т. е. при высоких значениях объемов элюента, отвечающих максимумам на кривых элюирования) (ср. уравнение 6.5). При этом время, требуемое для разделения, даже увеличивается (ср. также [42]). Поэтому желательно использовать такой элюент, который дает высокий коэффициент разделения, но не слишком высокие коэффициенты распределения. Такое компромиссное решение удается найти достаточно часто. Если это возможно, то элюент нужно выбрать так, чтобы он обеспечивал высокий коэффициент разделения при коэффициентах распределения не выше 30. Иногда удобно последовательно применять несколько элюентов с возрастающей элюирующей способностью (ступенчатое элюирование), чтобы более прочно удерживаемые ионы элюировались по возможности малыми объемами раствора. Градиентное элюирование также можно применять для предотвращения излишнего расширения кривых элюирования. [c.183]

При работе методом ступенчатого элюирования, когда применяются два (или более) элюента, удобно иметь устройство, обеспечивающее автоматическую перемену элюента в ходе элюирования. Такое устройство описано Гамильтоном и Андерсоном [49]. [c.192]

Рис. 10. 19. Разделение переходных элементов от Мп до 2п ступенчатым элюированием соляной кислотой [67].

Ацетат аммония успешно применяют для разделения магния, кальция и стронция методом ступенчатого элюирования. Описано также полное разделение кальция, стронция, бария и радия при градиентном элюировании раствором уксусной кислоты и ацетата аммония [17] (ср. также [54]), Барий элюируется раствором ацетата аммония очень медленно, тогда как свинец, находящийся в комплексной форме, элюируется легко. Селективное элюирование достигается, например, М раствором ацетата аммония. Барий элюируется другим раствором, например хлоридом аммония [33, 46]. [c.311]

Во избежание чрезмерного расширения полос элюирования, соответствующих наиболее прочно удерживаемым ионам, используют ступенчатое элюирование, т. е. после вытеснения первого иона из колонки меняют концентрацию элюирущего раствора. [c.704]

Ступенчатое элюирование проводят различными растворителями так, что новый растворитель поднимается по пластине выше уровня предыдущего. При этом методика элюирования может быть различной сначала пластину помещают в более полярный, а затем в менее полярный растворитель нли наоборот. Это и отличает ступенчатое элюирование от градиентного, в условиях которого свойства элюента изменяют в определенном направлении. Чаще всего компоненты движутся от менее к более полярным элюен-там. Зачастую разделение компонентов смеси значительно улучшается при элюировании в двух взаимно перпендикулярных направлениях. Этот метод называют двумерной ТСХ. В том случае, когда пластины покрыты тонким плотным слоем сорбента с однородными сферическими частицами небольшого размера (5—10 мкм), можно достичь лучшего разделения компонентов смесн на более коротких пластинах. При этом хроматографируют меньшие пробы. Такой вариант получил название в1.1сокоэффективной ТСХ (ВЭТСХ). [c.612]

Фракционирование белков сыворотки крови на КМ-целлюлозе осуществляют с помощью ступенчатого элюирования, подавая на колонку последовательно следующие растворы 0,02 М натрий-ацетатный буфер, pH 4,6 ( стартовый буфер), затем 0,05 М натрий-ацетатный буфер, pH 5,2 0,08 М натрий-ацетатный буфер, pH 6,0 0,1 М фосфатный буфер, pH 7,0 и, наконец, 0,1 М фосфатный буфер, содержащий 0,5 М Na l, pH 8,3. Каждый новый раствор подают на колонку только после того, как полностью элюируется пик, вымываемый предыдущим раствором. Скорость тока приблизительно составляет 50 мл/ч. Элюат собирают порциями по 2—3 мл. Обработку результатов см. на с. 108. Идентификацию белков осуществляют методом электрофореза на бумаге или в полиакриламидном геле (с. 112). Регенерацию КМ-целлюлозы проводят вне колонки. [c.113]

У большей части белков в процессе хроматографии сразу происходит изменение величины К[От О до 1.Это вызвано тем, что белки либо прочно сорбируются на ионообменнике, либо выходят с элюирующим буферным раствором, поскольку происходит одновременная взаимная нейтрализация многочисленных реакций взаимодействия между белком и ионообменником при данных pH и ионной силе раствора. Поэтому важно тщательно подбирать буферный раствор для ионообменной хроматографии белка. Ионообменную колонку обычно загружают при низкой ионной силе раствора. Для катионообменника оптимальная величина pH равна 4—5, для анио-нообменника 7—8- Элюирование с колонки катионообменника происходит при увеличении pH буферного раствора, а с колонки анионо-обменника — при уменьшении pH. В том и другом случае с изменением pH можно увеличивать ионную силу. Изменение pH и ионной силы элюирующего буферного раствора можно производить поэтапно (ступенчатое элюирование) или непрерывно (градиентное элюирование). [c.22]

Б. Хроматография. На колонку размером 1x50 см пипеткой осторожно наносят 2 мл сыворотки, диализованной в течение суток против стартового буферного раствора. После того как нанесенная сыворотка войдет в Ф-целлюлозу, ее остатки смывают тремя порциями буферного раствора по 2 мл. Фракционирование белков производят с помощью ступенчатого элюирования, подавая на колонку следующие растворы 0,02 М NaHzPO (стартовый буферный [c.214]

Когда способные к обмену ионы элюента (Н+) имеют мень-,шее сродство к иониту, чем разделяемые ионы (N3+ и Ы+), в элюате в течение всего процесса элюирования обнаруживаются ионы элюента (Н+). Поэтому важно выбирать элюент так, чтобы его ионы легко отделялись от разделяемых ионов. В этом особенность элюентной хроматографии — когда все разделяемые ионы можно в принципе получить в виде отдельных фракций (в отличие от метода фронтального анализа). Однако полосы некоторых элементов могут быть сильно размытыми, и чистыми такие элементы можно получить лищь в виде очень разбавленного раствора. В этом случае полезно применять ступенчатое элюирование. Так как наибольшее размазывание наблюдается для наиболее сорбируемых ионов смеси, сначала элюируют не-, сколько ионов одним элюентом, а затем завершают элюирование другим раствором, более эффективно выделяющим ионы, оставшиеся в колонке. Можно применять непрерывное повышение концентрации элюента (градиентное элюирование). [c.159]

Разделение проводили на колонках 44X0,9 см, наполненных дауэксом 1-Х2(С1-). Приме-ВЯЛИ ступенчатое элюирование растворами хлорида натрия возрастающей концентрации от 0,6 до 2,0 М. Указаны концентрации хлорида натрия, при которых элюировались вещества, а также номера колонок, в элюатах которых находились вещества. [c.138]

Высаливающая хроматография на катионитах бы а также использована для разделения хлорбензойных кислот [25]. Анализы смесей терефталата—бензоата калия описал Скоггинс [26]. Для этих целей был использован амберлит XAD-2 смеси кислот разделяли ступенчатым элюированием насыщенными растворами хлорида натрия и воды. Для анализа смесей указанных выше солей кислот и терефталевой кислоты высокой чистоты использовали стеклянные колонки размером 1,2x25 см и 1,8X3,5 см соответственно с резервуаром для растворителя наверху. [c.159]

Смесь MOHO-, ди- и трихлорацетатов можно количественно разделить путем ступенчатого элюирования соответственно 0,05 0,1 и 2 н. растворами хлорида натрия аналогичным образом можно разделить также смеси монохлор ацетата 2,4-дихлор-феноксиацетата и трихлорацетата [63]. [c.178]

В случае колонки с силикагелем элюирование проводят в градиенте я-гексан—бензол—диэтиловый эфир—метанол или смесью -гексан—диэтиловый эфир с последовательно возрастающей (0,5 3 10 и 20%) концентрацией эфира [22]. Ступенчатое элюирование проводят в системах изооктан, изооктан— хлороформ (88 22), изооктан—хлороформ (1 1) [26] или смесью скеллозольв F—диэтиловый эфир (98 2) [25]. Для колонок с флоризилом также используют ступенчатое элюирование в системе скеллозольв F—диэтиловый эфир (199 1, 99 1 и 39 1) [25]. В случае колонки со смешанным сорбентом окись алюминия—карбонат цинка—целит элюирование проводят смесью бензол—циклогексан (1 4). [c.182]

Весьма поучительным примером является разде.ление никеля (И), кобальта (И), железа (III) и цинка (И) по Краусу и Моору [67] этот пример необходимо изучить каждому, кто собирается работать в этой области. В основе методики лежит ступенчатое элюирование из сильноосповного анионита с помощью соляной кислоты. Перед началом опыта колонку с анионитом заполняют концентрированной (12 М) соляной кислотой затем вводят металлы в малом объеме (1 мл) концентрированного солянокислотното раствора. В этих условиях никель (II) не удерживается анионитом и немедленно проходит через колонку. Для удаления остатков никеля колонку промывают концентрированной кислотой. Затем элюируют кобальт (II) 4 М соляной кислотой. В этих условиях железо (III) и цинк (II) лишь немного перемещаются вниз по колонке. Третья стадия состоит в элюировании железа (III) 0,5 М кислотой. Затем в виде отдельной фракции элюируют цинк (И), для чего снижают концентрацию кислоты до 0,005 М. Подобрав подходящие условия, можно добиться количественного разделения всех ионов в растворе, содержащем, кроме перечисленных выше ионов, еще марганец (II) и медь (II) (рис. 10. 19). [c.207]

Ионит обычно применяют в Н-форме. Если присутствуют элементы с большой разницей в коэффициентах распределения, а также в том случае, когда анализируемый раствор содержит все щелочные металлы, удобно применять методы ступенчатого элюирования или градиентного элюирования с повышающейся концентрацией элюента. Первые опыты проведены в 1948 г. [17]. Затем метод был значительно улучшен. Раймап с сотрудниками [68 ] сообщают, что разделение можно выполнять за В ч. [c.302]

Б результате подробного исследования Мильтон и Груммит [45 ] разделили все щелочноземельные металлы. Бериллий, магний, кальций, стронций и барий присутствовали в количестве нескольких миллиграммов, а радий — в виде следов. Лактат аммония дал лучшие результаты, чем цитрат аммония и соляная кислота. Разделение выполнялось методом ступенчатого элюирования при 78° С. Вначале элюировали бериллий 0,55М раствором лактата аммония при pH 5, а затем все остальные щелочноземельные металлы — 1,5М раствором лактата аммония при pH 7. Все шесть элементов можна количественно разделить из одной навески за 5 ч. Результаты разделения показаны на рис, 15, 11. Метод был применен для определения стронция-90 в молоке и в воде [35]. [c.311]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология