Градиентное элюирование непрерывное

Жидкостная адсорбционная хроматография. Жидкостная адсорбционная хроматография применяется для группового разделения углеводородов на алкано-циклоалкановую и ареновую фракции, а также для разделения аренов по степени цикличности. Хроматографические колонки заполняют силикагелем или двойным адсорбентом — оксидом алюминия и силикагелем. В качестве десорбентов при анализе керосиновых и масляных фракций для вымывания насыщенных углеводородов используют н-алканы С5 — С7, для десорбции ароматических и гетероатомных компонентов — бензол, спиртобензольные смеси, ацетон, хлороформ. Применение ступенчатого или непрерывного увеличения полярности подвижной фазы позволяет значительно уменьшить время удерживания веществ. Этот метод называется градиентным элюированием. [c.130]

Имеются несколько методов автоматического определения аминокислотных остатков в продуктах гидролиза пептидов, которые основаны на ионообменных методах с градиентным элюированием [43—45]. Соответствующие устройства, обеспечивающие создание непрерывных градиентов буферного раствора, применяли также и в анализе остатков сахаров [48, 49]. [c.388]

Фракционирование полисахаридов на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой (31] проводят следующим образом. В колонку полисахариды вводят в виде водного раствора максимальной концентрации. Вначале ДЭАЭ-целлюлозу в колонке промывают водой, чтобы определить, удерживаются ли полисахариды этой целлюлозой. После этого проводят ступенчатое или непрерывное градиентное элюирование. Непрерывное градиентное элюирование позволяет определить число фракций и концентрации электролитов, необходимые для ступенчатого элюирования каждой из этих фракций. Ступенчатое вымывание позволяет лучше разделить полисахариды на фракции, чем непрерывное градиентное элюирование. Скорость протекания элюента через колонку не должна превышать 1,5 мл в минуту. Фракции объемом 10—20 мл собирают обычно с помощью автоматического коллектора. [c.47]

Устройство для градиентного элюирования. Как уже указывалось, значительного эффекта разделения смесей, состоящих из. близких ио свойствам компонентов, можно достичь при помощи непрерывно изменяющегося состава элюента в сторону возрастания его элюирующей способности. Для этой цели применяются специальные устройства, которые сводятся в основном к двум типам. [c.86]

Изменение перечисленных условий хроматографии можно вести либо скачкообразно ступенчатое градиентное элюирование), либо непрерывно непрерывное градиентное элюирование). [c.556]

Непрерывное градиентное элюирование [c.558]

В некоторых случаях, в частности, в опытах, имеющих целью определение оптимального состава растворителя для метода, который затем будет использоваться повседневно, удобна методика градиентного элюирования. Состав смеси растворителей, входящих в подвижную фазу, во время хроматографирования непрерывно меняют с предварительно установленной скоростью, что дает возможность решать при помощи одной хроматограммы проблему разделения сложной смеси веществ, имеющих совершенно различные коэффициенты распределения. Коэффициент распределения К, как указано в разделе Газовая хроматография (см. ниже), является мерой количества растворенного вещества в неподвижной фазе то отношению к концентрации вещества в подвижной фазе. [c.104]

Подготовка системы для градиентного элюирования. В качестве смесителя используют колбу на 0,5 л со стартовым буферным раствором (0,02 М фосфатный буфер pH 8,0). Резервуар, образующий замкнутую систему со смесителем, представляет собой сосуд объемом 1 л, заполненный О,ЗМ буферным раствором. Непрерывную подачу буферного раствора на колонку осуществляют с помощью насоса. Открыв выходное отверстие, понижают уровень буферного раствора в колонке до уровня геля. Затем на ионообменник аккуратно, стараясь не взмутить верхний слой геля, наносят фракционируемую сыворотку, которую предварительно в течение суток диализуют против стартового буферного раствора. Нанесенный образец смывают тремя порциями стартового буферного раствора по 2 мл и приступают к хроматографии. Для фракционирования 3 мл сы- [c.216]

Взаимосвязь жидкостной хроматографии высокого давления с другими хроматографическими методами иллюстрирует рис. 7.19. Преимуществами жидкостной хроматографии высокого разрешения являются высокая скорость разделения, возможность многократного использования колонок, автоматическая непрерывная подача растворителя, возможность с высокой воспроизводимостью осуществлять программы изменения состава смешанного растворителя в процессе разделения (градиентное элюирование) и [c.447]

Градиентное элюирование — процедура элюирования, в которой состав подвижной фазы изменяется непрерывно или ступенчато в течение процесса разделения. [c.181]

Для того чтобы повысить скорость движения медленно движущихся зон, элюирующую способность элюента можно повысить скачкообразно (ступенчатое элюирование) или непрерывно (градиентное элюирование). Принципы ступенчатого и градиентного элюирования, а также принципы разнообразных устройств для градиентного элюирования обсуждаются в обзоре Снайдера [24]. Для специалистов, использующих колоночную экстракционную хроматографию, может представлять интерес планирование эксперимента при градиентном элюировании. Этот вопрос рассмотрен Снайдером и Саундерсом [25]. [c.89]

Техника проведения такого ступенчатого элюирования может быть очень проста и состоять в последовательном введении в колонку с адсорбентом определенных объемов растворителей увеличивающейся полярности. Иногда это осуществляют вручную, а при наличии соответствующего оборудования - насосами-дозаторами. Вторую модификацию градиентного элюирования осуществляют путем непрерывного увеличения элюирующей силы растворителя ао заранее заданной программе. Это достигается смешением двух или более растворителей разной силы в определенном соотношении с помощью специальных дозирующих устройств [2-5]. [c.40]

Градиентная хроматография, градиентное элюирование. Перемещение компонентов смеси происходит при одновременном воздействии потока элюента и движущейся концентрационной волны вытеснителя. Например, к азоту при проявлении углеводородов добавляют диоксид углерода, концентрация которого непрерывно или скачкообразно возрастает во времени. Этим достигается более эффективное разделение [219—221]. [c.93]

Выше описано разделение путем восходящего элюирования. Возможны иные варианты элюирования [244] нисходящее элюирование горизонтальное элюирование (круговая хроматография [250]) — пробу наносят по кругу на квадратную пластинку с тонким слоем сорбента (на пересечение диагоналей), в центр подают растворитель, вещества разделяются с образованием концентрических зон многократное элюирование одним и тем же растворителем (после элюирования пластинку высушивают и операцию повторяют со свежей порцией элюента) ступенчатое элюирование — многократное элюирование разными растворителями центрифужное элюирование — под действием центробежной силы движение потока растворителей ускоряется в 2—3 раза градиентное элюирование — состав элюента непрерывно изменяется. [c.103]

Подвижная фаза. Подвижной фазой может служить чистый растворитель или смесь растворителей, которые в заметной степени не смешиваются со стационарной фазой. Повысить эффективность разделения иногда можно непрерывным изменением состава смешанного растворителя по мере продвижения элюента (градиентное элюирование). В некоторых случаях разделение улучшается, если элюирование проводят рядом разных растворителей. Подвижную фазу выбирают главным образом эмпирически. [c.280]

Подвижную фазу с постоянным значением pH можно применять лишь в случае ионита, обладающего различными селективными свойствами по отношению к разным ионам. Это бывает редко, поэтому обычно применяют метод, аналогичный методу градиентного элюирования, т. е. ступенчато или непрерывно повышают концентрацию ионов водорода в растворе. Часто применяют и добавку комплексантов для повышения селективности подвижной фазы. Действенность этих методов можно показать на примере разделения ионов калия и натрия. Ионы натрия при pH 9 образуют устойчивый комплекс с диацетоурамилом в отличие от ионов калия. Раствор анализируемой пробы вместе с комплексантом в буферном растворе пропускают через катионит и промывают раствором комплёксанта. В результате происходит четкое разделение ионов натрия и калия при проведении обмена в небольших колонках с небольшим количеством элюата [54]. [c.381]

Если компоненты разделяемой смеси имеют близкие значения к хроматографируют одним элюентом (изократич режим), если отдельные компоненты смеси сильно удерживаются сорбентом, используют серию элюентов возрастающей силы (ступенчатое или непрерывное градиентное элюирование) [c.153]

Градиентный элюентный анализ. Альм, Вильямс и Тизелиус разработали способ градиентного элюирования для уменьшения размывания, наблюдаемого при обычном элюировании. Принцип этого способа состоит в том, что силу элюента постепенно увеличивают посредством изменения его состава, что облегчает десорбцию. Это достигается непрерывным смешиванием, осуществляемым во внешней смесительной камере. Возможно большое число методов, зависящих от способа смешения. [c.560]

В некоторых случаях целесообразно проводить градиентное элюирование, при котором содержание более полярного растворителя в менее полярном повышают непрерывно. Градиентное элюирование проще всего осуществить, возвращая отогнанный от каждой фракции растворитель на колонку с добавлением к нему каждый раз одного и того же объема второго, более полярного растворителя. Если ход хроматографического разделения известен заранее, то можно использовать автоматическое гpaJ диентное элюирование, описанное в главе, посвященной ионообменной хроматографии. [c.364]

Существуют два вида элюирования — изократическое и градиентное. При изокрйтическам методе работают с одним растворителем постоянного состава, например, 30% метанола и 70% воды. Лучшее разделение достигается с использованием градиентного элюирования. При этом состав элюента непрерывно изменяется по опреде та1ной программе. Обычно используют растворители различной полярности. Например, в водно-метанольном элюенте доля метанола увеличивается с 30 до 70% (об.) линейно или по другой программе (см. рис. 5.3-3). Эффект градиента растворителя сравним с эффектом температурного градиента, известного в ГХ. Достигается сокращение времени анализа, а пики можно обрабатывать с одинаковой точностью по всей хроматограмме. [c.267]

В области разделения малых молекул с помощью аналитической ЖХ градиентное элюирование стало ценным средством при исследовании сложных смесей или групп соединений с неизмеримой хроматографической полярностью. Успехи приборостроения, в частности создание систем подачи растворителя и систем смешения, совершенствование конструкции детекторов, а также контроль работы приборов на основе микропроцессоров сделали возможным высокий уровень воспроизводимости в схемах разделения с непрерывным градиентом. Микропрепаративное ЖХ-разделение, выполняемое на аналитическом оборудовании, может реализовать эти возможности. Однако при переходе в область препаративной и макропрепаративной хроматографии значительно уменьшаются возможности создания сложных градиентов и контрольных устройств, пригодных для работы с большими объемами и высокими скоростями подвижной фазы, которые бы воспроизводили точно градиенты, характерные при работе с аналитическими приборами. В таких ситуациях обычно рекомендуют использовать подходящую последовательность изокра-тического и ступенчатого градиентного элюирования, если оно вообще возможно (см. разд. 1.6.2.2.5). Выгоды такого подхода [c.67]

У большей части белков в процессе хроматографии сразу происходит изменение величины К[От О до 1.Это вызвано тем, что белки либо прочно сорбируются на ионообменнике, либо выходят с элюирующим буферным раствором, поскольку происходит одновременная взаимная нейтрализация многочисленных реакций взаимодействия между белком и ионообменником при данных pH и ионной силе раствора. Поэтому важно тщательно подбирать буферный раствор для ионообменной хроматографии белка. Ионообменную колонку обычно загружают при низкой ионной силе раствора. Для катионообменника оптимальная величина pH равна 4—5, для анио-нообменника 7—8- Элюирование с колонки катионообменника происходит при увеличении pH буферного раствора, а с колонки анионо-обменника — при уменьшении pH. В том и другом случае с изменением pH можно увеличивать ионную силу. Изменение pH и ионной силы элюирующего буферного раствора можно производить поэтапно (ступенчатое элюирование) или непрерывно (градиентное элюирование). [c.22]

Термин градиентное элюирование применим для методов, в которых состав элюирующего раствора непрерывно изменяется в процессе элюирования (концентрация элюирующего агента повышается). Вдоль колонки создается таким образом определенный градиент концентрации [21 — 23]. Повышение концентрации элюирующего раствора сопровождается улучшением ряда параметров. [c.61]

В ионообменной хроматографии градиентное элюирование осуществляют с помощью градиента концентрации (концентрация элюирующего раствора непрерывно изменяется) или градиента pH (pH элюирующего раствора непрерывно изменяется). [c.61]

Когда способные к обмену ионы элюента (Н+) имеют мень-,шее сродство к иониту, чем разделяемые ионы (N3+ и Ы+), в элюате в течение всего процесса элюирования обнаруживаются ионы элюента (Н+). Поэтому важно выбирать элюент так, чтобы его ионы легко отделялись от разделяемых ионов. В этом особенность элюентной хроматографии — когда все разделяемые ионы можно в принципе получить в виде отдельных фракций (в отличие от метода фронтального анализа). Однако полосы некоторых элементов могут быть сильно размытыми, и чистыми такие элементы можно получить лищь в виде очень разбавленного раствора. В этом случае полезно применять ступенчатое элюирование. Так как наибольшее размазывание наблюдается для наиболее сорбируемых ионов смеси, сначала элюируют не-, сколько ионов одним элюентом, а затем завершают элюирование другим раствором, более эффективно выделяющим ионы, оставшиеся в колонке. Можно применять непрерывное повышение концентрации элюента (градиентное элюирование). [c.159]

Для разделения конденсированных фосфатов применяют ионообменную хроматографию [947]. Орто- и пирофосфаты, содержащиеся в виде примесей в перекристаллизованном триполифосфате, разделяют путем градиентного элюирования 0,002 N HG1, к которой непрерывно добавляют 0,6 М R 1. Последовательно элюируются орто-, пирО и триполифосфат в элюатах объемом 100, 200 и 300—350 мл соответственно. Фосфат в элюатах определяют фотометрически в виде фосфорномолибденового комплекса. В качестве ионита применяют смолу дауэкс-1Х8. Для анализа более конденсированных фосфатов используют элюент с большей концентрацией KG1 (1 М или 2М раствор KG1). Выход фосфатов составляет >95%. [c.166]

Для нормальной работы жидкостного хроматографа жела тельно, чтобы соединение его с масс спектрометром не накла дывало слишком сильных ограничений на виды растворителей, применяемых для элюирования, величину потока растворителя не препятствовало возможности градиентного элюирования, при менения летучих и нелетучих буферов, реагентов в виде ион ных пар Для поддержания вакуума в масс спектрометре поток газа пе должен превышать 20 мл/мин, желательно иметь воз можность использовать разные методы ионизации, прежде все го ЭУ и ХИ, должна быть обеспечена возможность сканирова ния полного масс спектра и непрерывного детектирования вы бранных ионов, возможность выбора разных газов реагентов при ХИ, возможность анализа как положительных, так и отри нательных иоиов для обеспечения высокой чувствительности шумы и фон должны быть минимизированы а наложения от растворителя и от примесей в нем малы Интерфейс должен обеспечивать высокую степень обогащения образца по отношению к растворителю высокую эффективность переноса образца из колонки в ионный источник, отсутствие расширения хрома тографических пиков возможность испарения малолетучих об разцов [c.34]

Для элюирования аминов из колонки с амберлитом ЩР-64 применяют сначала градиентное элюирование, осуществляемое непрерывным смешиванием буферного раствора фосфата калия с pH 7,1 (концентрация фосфат-ионов 0,1 М), который одновременно содержит хлорид калия в количестве 3,2 М, с дистиллированной водой (колонка 0,9X30 см, скорость элюата 30 мл/ч). Для обеспечения требуемого градиента разделения применяют 200 мл дистиллированной воды. После вытекания из колонки 500 мл элюата элюирование продолжают раствором хлорида калия, чтобы выделить спермин (рис. 30.3). [c.272]

Градиентное элюирование. В этом методе в процессе проявления непрерывно изменяется состав подвижной фазы. Виланд и Детер-ман /17/ предложили камеру (рис. 6.9), в которой добавляемая для [c.150]

Граоивнтное элюирование является наиболее ценным методом в жидкостной хроматографии. Этим термином называют процесс, предполагающий изменение состава элюента во времени. Элюирующая способность подвижной фазы при этом должна прогрессивно возрастать, так, чтобы из колонки за приемлемое время элюировались сильно удерживаемые разделяемые вещества. Градиентное элюирование можно рассматривать как аналог программирования температуры в газовой хроматографии. Изменение состава подвижной фазы обычно осуществляется непрерывно и бопее или менее линейно. Однако в определенных обстоятельствах может быть полезным резкое изменение состава элюента. [c.199]

Как указывалось в гл. 5. 6, градиентное элюирование позволяет избежать чрезмерного расширения кривых элюирования. Теория этого процесса разработана рядом авторов [2, 32, 38, 70, 90, 115]. Два различных элюента (из двух сосудов) непрерывно смешиваются либо в одном сосуде, либо в отдельной камере смешения. Состав смешанного элюента может варьироваться в широких пределах путем надлежаш его выбора концентраций и. регулирования скоростей, с которыми растворы поступают в смесительный сосуд и вытекают из него. Перемешивание удобно осугцествлять маг-нитно " мешалкой. Простое устройство показано на рис. 10. 9. Раствор из воронки можно с желаемой скоростью по каплям подавать в колбу. Если раствор в воронке имеет большую концентрацию, чем раствор в колбе, то концентрация элюента будет непрерывно возрастать. В этом случае зависимость концентрации элюента от объема раствора, вытекшего из колбы, имеет экспоненциальный характер. Бы.ли предложены и другие устройства, в частности, система, обеспечиваюш ая линейное возрастание концентрации элюента с объемом элюата [9, 76, 104]. Аналогичным способом получают элюент с переменным значением pH для этого достаточно иметь два резервуара, содержащие растворы с различными значениями pH [83, 90]. [c.195]

Майер и Фрейлинг [55 ] установили, что аналитическое разделение иттрия, тербия, европия и самария легче осуществить в лактат-ном растворе, чем в цитратном (см. также [22, 62]). Катионный обмен в лактатных растворах изучали также другие авторы [2, 12, 28, 62, 69, 70, 98, 104]. Чтобы сократить продолжительность элюирования, Нервик [61] применил метод градиентного элюирования лактатными растворами с непрерывно повышающейся величиной pH. Разделение следовых количеств радиоактивных элементов происходит лучше, чем разделение миллиграммовых количеств. Метод градиентного элюирования оказался более совершенным по сравнению с другими ранее известными методами разделения смесей редкоземельных элементов, не содержащих носителя. В. К. Преображенский, А. В. Калямин и О. М. Лилова [68] также применили метод градиентного элюирования и добились успешного и [c.322]

Последующее развитие ионообменной методики связано с применением автоматических устройств, описанных Лундгреном и Лёбом 136 ]. Метод, рекомендованный для производственных анализов смесей конденсированных фосфатов в составе детергентов, основан на градиентном элюировании и непрерывном анализе элюата с помощью автоанализатора. Прибор программируется для проведения кислотного расщепления полифосфатов, присутствующих в элюате. Образующийся при этом ортофосфат выделяется путем диализа и взаимодействует с молибдатом аммония. Фосфорномолибденовая кислота восстанавливается гидразинсульфатом голубая окраска восстановленного раствора используется для непрерывных колориметрических измерений, результаты которых регистрируются автоматически. Прибор калибруется с помощью смесей известного состава. Образцы, содержащие только орто-, пиро- и три(поли)фос-фат, могут быть проанализированы в течение 1 ч. В присутствии триметафосфата для анализа требуется обычно 2 ч. Точность метода 3% от количества основного компонента. Для компонентов, присутствующих в меньших количествах, точность определения несколько ниже. [c.394]

В особенности хорошие результаты получают при использовании обращенных фаз. При этом подлежащая разделению смесь хроматографируется на гидрофобных неподвижных фазах (например, на силикагеле, пропитанном углеводородами или содержащем на поверхности химически закрепленные гидрофобные остатки). Подвижной фазой служит сначала вода, затем ее смеси с другими растворителями постепенно уменьшающейся полярности. Состав смесей автоматически непрерывно варьируется (градиентное элюирование). Отдельные фракции автоматически регистрируют по изменению свойств злюата (например, показателя преломления или поглощения). [c.95]

Проявление тонкослойных или бумажных хроматограмм может осуществляться путем восходящего, нисходящего, горизонтального или радиального движения растворителя. При восходящей хроматографии ослол непия, связанные с образованием каналов при движении растворителя, сводятся к минимуму. При непрерывном проявлении растворитель продвигается до конца бумаги или тонкого слоя в одном опыте. При многократном проявлении после того, как фронт растворителя достигает края листа, растворителю дают испариться и повторяют проявление при том же направлении движения растворителя. Ступенчатое проявление включает проявление на пластинке в неполярном растворителе, испарение растворителя и второе проявление в более полярном растворителе. При двухмерном проявлении также последовательно применяют два растворителя сначала проводят хроматографирование в одном направлении, затем высушивают пластинку для испарения первого растворителя, поворачивают пластинку на 90° и проводят проявление вторым растворителем. При градиентном элюировании состав растворителя меняется в ходе проявления [94]. Эта методика, однако, сложна, в ней теряется простота тонкослойной или бумажной хроматографии. [c.553]

На рис. 9.6 доказана выпускаемая фирмой Phaгma ia камера для нисходящего хроматографирования [2], предназначенная для тонкослойной гель-хроматографии. Для горизонтального элюирования ири различных, но точно устанавливаемых условиях предварительного насыщения слоя сорбента можно использовать К5-жамеры (рис. 9.7). Оптимальные условия разделения в этих камерах можно быстро установить. Другие типы камер, используемые для специальных методов, например проточного (непрерывного) элюирования, градиентного элюирования или круговой хроматографии, описаны в монографиях по ТСХ ([2Э, [c.95]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология