Буферы ионная сила

Рис. 31. Диаграмма Зимма для раствора казеина в боратном буфере (ионная сила 1 = 0,1 pH 8,5 20° С)

Положительная поправка ( + ) означает, что число необ.ходимо прибавить к экспери-ментальной величине, а отрицательная поправка (—) означает, что число необходимо вычесть, если сравнение производится с буфером ионной силы 0,1. [c.211]

Электрофорез зарекомендовал себя как полезный метод при анализе сложных смесей, например сыворотки крови, на содержание в них альбумина и различных фракций глобулина. Поскольку растворителем служит обычно вода и разделение ведется большей частью при температурах 1°, белки подвергаются в этом случае довольно мягкому воздействию. Электрофорез служит высокочувствительным методом определения чистоты препарата (при благоприятных обстоятельствах удается обнаружить примеси в количестве менее 1%). Для контроля чистоты используются два метода. Первый состоит в том, что электрофорез проводят в возможно более широкой области изменения pH, буфера, ионной силы и концентрации белка. Обычно pH выбирают вдали от изоэлектрической точки с тем, чтобы свести к минимуму взаимодействие белковых молекул. Вторым методом является метод обращения направления распространения границы при pH, соответствующем изоэлектрической точке. При наличии примесей в белке граница будет расплываться быстрее, чем это должно было бы происходить за счет одной лишь диффузии. Конвекция за счет градиентов температуры также будет обусловливать размытие границы, однако этот эффект не изменяется при перемене полярности электрического поля. [c.219]

Положительная поправка () означает, что эта величина должна быть прибавлена к экспериментально найденной величине отрицательный знак (—) означает, что ее необходимо вычесть, если сравнение производится с буфером, ионная сила которого равна 0,1. [c.71]

Для данной концентрации буфера ионная сила тем выше, чем больше [п] превосходит единицу. Наиболее существенно то, что п является важным показателем влияния ионной силы на величину р/Са- Параметр п входит в упрощенное уравнение [c.242]

Условия опыта pH 8,53 трис-буфер 25° С ионная сила 0,1 (СаС ) [c.122]

Условия опыта pH 5,5 25° С ионная сила 0,2 (ацетатный буфер) 3,17% ацетонитрила [c.148]

Хроматография в объеме уступает в эффективности колоночной хроматографии (даже в статическом варианте), но зато проще и удобнее для больших количеств вещества. Кроме того, не возникает проблемы сжатия и деформации обменника при любых изменениях pH и ионной силы элюента. Хроматография в объеме начинается с уравновешивания обменника в исходном буфере для сорбции препарата. Затем раствор последнего добавляют к суспензии обменника и время от времени осторожно перемешивают в течение часа. Сорбент промывают на фильтре исходным буфером и переносят обратно в стакан, где точно так н е осуществляют элюцию — периодическим перемешиванием в элюирующем растворе с последующей промывкой на фильтре. [c.285]

При выборе обменника решающую роль могут иногда сыграть факторы, на первый взгляд второстепенные. Например, жесткость обменника и сохранение объема при изменениях pH и ионной силы элюента могут играть очень важную роль в случае разделения смеси компонентов, сильно различающихся между собой по сродству к обменнику, когда для элюции может оказаться необходимым использование широкого диапазона концентраций соли или pH буфера, [c.288]

При фракционировании белков методом ионообменной хроматографии большое внимание уделяют выбору ионообменника (природе матрицы и емкости ионита) и буферного раствора, при котором осуществляется сорбция белков (величине pH и ионной силы, природе буфера и буферной емкости). [c.108]

Эффективная сорбция белков происходит при значениях pH, отстоящих не менее чем на единицу от р1. В области рН<р1—I белки можно хроматографировать на катионитах, а в области рН>р1 + 1 — на анионитах. Изменение pH в направлении к ИЭТ способствует десорбции белков. При работе с белками используют буферные растворы с низкой ионной силой, но высокой буферной емкостью. Для этого пользуются буферными растворами, рК которых отстоит от величины pH, используемой в эксперименте, не более чем на 0,3—0,5 единиц pH. Хроматографию на анионитах ведут в таких системах, где диссоциируемым компонентом является катион (буферы трис, пиридин, имидазол и др.), [c.109]

Скорость ферментативной реакции зависит от концентрации субстрата (субстратов), pH, температуры, присутствия активаторов или ингибиторов, природы буфера, его ионной силы и др. Ряд факторов оказывает влияние на стабильность фермента, вызывая необратимые-изменения его нативной конформации. Это необходимо учитывать, подбирая условия измерения активности (pH, температура, время инкубации). Подробное исследование стабильности ферментов описано, ниже. [c.206]

Фосфатный буфер, pH 7,0 (ионная сила 0,1). [c.217]

Ацетатный буфер, pH 4,5 (ионная сила 0,05). [c.217]

Степень удерживания образца снижается с увеличением ионной силы подвижной фазы и увеличивается с увеличением ионообменной емкости сорбента. Ионная сила подвижной фазы возрастает при возрастании концентрации буфера и сохранении неизменным pH или при добавлении соли. Важна также концентрация буферных растворов, так как в растворе наблюдается конкуренция между ионами образца и буфера. Уменьшение концентрации буферного раствора увеличивает сродство смолы к образцу, что приводит к увеличению времени удерживания. Концентрация буферного раствора колеблется от 0,001 до 6 моль/л, причем верхняя граница определяется растворимостью соли, используемой в качестве буфера, а нижняя — самой буферной силой, так как в слабом буферном растворе нельзя контролировать уровень pH. Сильных буферных растворов также следует избегать, так как возможно выпадение осадка и забивание колонок. Сила растворителя зависит от типа противоиона, причем степень удерживания образца увеличивается в ряду, обратном ряду активности ионов, приведенному выше. [c.36]

Кроме силы электрического поля, на движение ионов решаюш,ее влияние оказывают сопротивление среды, форма самих ионов и их гидратация. Количественная оценка этих факторов не входит в рамки этой главы. Однако необходимо иметь в виду, что воспроизведение электрофоретического разделения возможно лишь в тех случаях, когда строго соблюдаются все условия опыта (сила тока, напряжение, среда, в которой проходит разделение, концентрация веш,ества, температура, продолжительность опыта, ионная сила, качество применяемого буфера и т. д.). [c.529]

Изменение концентрации в зависимости от объема может быть либо линейным, либо нелинейным (рис. 501, б). В большинстве случаев выгодно, чтобы pH или ионная сила буфера при элюировании непрерывно возрастали. [c.559]

Смеси фумаровой и малеиновой кислот и их этиловых эфиров можно анализировать следующим образом [61]. 5 мл спиртового раствора образца (10—20 мМ относительно кислоты или эфира с наибольшей концентрацией) разбавляют до50жл аммиачным буфером (ионная сила 1,0, pH 8,2) и определяют полярографически концентрацию кислот. Эфиры гидролизуют в другой аликвотной части, нагревая ее на водяной бане в течение 20 мин с 2 мл 0,2 М раствора КОН. В полученном растворе вновь, определяют концентрацию кислот. Увеличение концентрации кислот дает количества присутствующих эфиров. Этот метод дает относительную ошибку 2—3% для малеиновой и фумаровой кислот и 5—6% для их диэтиловых эфиров. Методика применима и для других полярографически активных кислот и их эфиров. [c.382]

При умеренной (от 0,01 М Na l буфер) ионной силе для образца ВТМ значение анизотропии молекулы yi — Ya = = -j-1100 10 см . Эта большая (для гибкого цепного полимера) величина, если принять модель рис. 8.66, может слагаться, по крайней мере, из трех частей во-первых, из отрицательной анизотропии одиночных свернутых цепей молекулы (подобных полистиролу или -винилнафталину), во-вторых, из незначительной (вероятно, положительной) анизотропии, вносимой спиральными участками, оси которых ориентированы практически беспорядочно, и, в-третьих, из положительной анизотропии формы. При незначительных концентрациях соли (как в обсуждаемых случаях) для гибкой цепи полиэлектролита, как мы видели, эффект формы имеет решающее значение и приводит [c.702]

В работе [185] получены аналогичные результаты с образцами РНК различного происхождения и проведено изучение концентрационной зависимости эффекта при различных (но достаточно малых не более 0,01) ионных силах раствора. Характер концентрационной зависимости также схож с зависимостью для гибких полиэлектролитов в ионизованном состоянии. При умеренной (0,01 М Na l, буфер) ионной силе для образца из ВТМ значение анизотропии молекулы yi — Y2 = "г1100 х X Ю 25 сж . Эта большая (для гибкого цепного полимера) величина, если принять модель рис. 312, может слагаться по крайней мере из трех частей из отрицательной анизотропии одиночных свернутых цепей молекулы (подобных полистиролу или -винилнафталину), незначительной (вероятно, положительной) анизотропии, вносимой спиральными участками (оси которых ориентированы практически беспорядочно), и положительной анизотропии формы. При незначительных концентрациях соли (как в обсуждаемых случаях) для гибкой цепи полиэлектролита эффект формы имеет решающее значение [186, 257] и приводит к положительному суммарному двойному лучепреломлению (сравнить с данными табл. 52). [c.480]

Таким образом, 7 пл данной ДНК линейно зависит от логарифма концентрации соли или удельной электропроводности [23—25]. Следовательно, ПО величинам, полученным в каком-то определенном буфере, можно путем экстраполяции установить, каких значений можно ожидать при работе с SS или любым другим буфером, ионная сила которого находится в указанном диапазоне (при pH, близком к 7) [26]. Тепловую денатурацию ДНК с высоким содержанием ГЦ-пар можно проводить, кроме того, в буфере, в котором концентрация солей в 10 раз меньше, чем в SS (0,1XSS ) для этого образцы ДНК (которые обычно хранят в SS ) разбавляют в 10 раз дистиллированной водой. 7 пл при этом понижается на 15,4° по сравнению с исходным препаратом [15], и поэтому для таких препаратов ДНК содержание ГЦ-пар рассчитывают по формуле [c.188]

Для специальных целей разработано много разных фиксаторов, применяемых в различных комбинациях и разной последовательности. К ним относятся перманганаты и различные альдегиды, принципы использования которых, включая эффекты, зависящие от pH, буферов, ионной силы, концентрации, температуры и длительно-си фиксации, обсуждаются в многочисленных книгах [34—39]. Для заливки применяют очень много сред [34—39] по отдельности или в смесях, причем выбор среды отчасти зависит от того, какая из них доступна. Чаще всего, вероятно, применяется эпон 812 (хотя есть сведения, что он вскоре не будет поставляться производящей его фирмой, а будет заменен подобными средами, выпускаемыми другими фирмами). Для заливки используются также дуркупан, аралдит, мараглас, весто-пал, для специальных целей различные метакрилаты и множество эпоксидных смол. Подробное описание свойств этих сред и советы по их применению читатель [c.111]

Одним из вариантов метода постоянной ионной силы является метод буферных растворов. Растворы сильных электролитов, применяемые для разбавления при получении стандартной серии, могут быть заменены так называемыми буферными растворами для регулирования общей ионной силы (БРОИС) или, иначе говоря, рХ-буфер-ными растворами (X — определенный вид ионов). Действие рХ-буфера обеспечивается соответствующими равновесиями, устанавливающимися в реакциях осаждения или комплексообразования. Например, р1- или pAg-буфер может быть приготовлен на основе раствора, насыщенного относительно Agi или КС1, для которого справедливо следующее равновесие с константой K = aija [c.113]

Рабочий интервал значений pH прц определении фторида находится в области pH 4,5—12 для 10 —10 М фторида, а для меньших концентраций фторида — в области pH 4,5—8. Положительный дрейф потенциала обусловлен протонизацией фторида с образованием НР и НЬ 2 . В щелочных растворах происходит отрицательное отклонение потенциала вследствие замещения ионов фторида в кристаллической решетке ЬаРз ионами гидроксила, так как величины их ионных радиусов близки. Эти помехи в случае необходимости можно устранить, используя специальные буферные смеси, например буфер регулирования общей ионной силы (БРОИС) с pH 5,0—5,5, содержащий 0,25 М СНзСООН 0,75 М СНзСООЫа 1,0 М КаС1 и 10 3 М цитрата натрия (для маскирования железа и алюминия). [c.121]

Кинетика установления равновесия при взаимодействии а-химотрипсина с Ы-ацетил-Ь-триптофаном. Условия опыта pH 2,3 (цитратный буфер) 25° С ионная сила 0,0Ш [Р о = 5,9410- М. Концентрация свободного фермента определялась титрованием его -нитрофениловым эфиром N-aцeтил-L-тpиnтoфaнa [c.155]

Для фракционирования белков сыворотки крови и многих других биологических жидкостей человека и животных чаще всего используют веронал-мединало-вый буфер (барбитуровая кислота и ее натриевая соль) с pH 8,6 и ионной силой 0,05. При этом значении pH белки заряжаются отрицательно и движутся к аноду. Концентрация электролита невысока и не оказывает коагулирующего воздействия на белок и не образует слишком плотной ионной атмосферы, замедляющей его движение. В то же время она достаточно велика, чтобы создать необходимую буферную емкость. [c.190]

Этот выбор определяется, в первую очередь, условиями растворимости и сохранности материала препарата. Эти соображения мoгy J диктовать pH и ионную силу буфера, наличие в нем мочевины и детергентоп. Одпако надо иметь в впду и возможное воздействие выбора элюента на ход самого хроматографического процесса. Во-первых, такое воздействие может проявляться в изменениях конформации пли плотности упаковки макромолекул, диссоциации белков па субъединицы, диссоциации кофакторов от ферментов и др. Во-вторых, следует проверить устойчивость материала матрицы к выбранному значению pH и диссоциирующим добавкам. Наконец, не следует упускать пз виду возможности влияния элюента на взаимодействие разделяемых веществ с материалом матрицы, т. е. [c.135]

Колонкп Оксиапатита обычно предварительно промывают 5 — 10 объемами слабого ( 0,05 М) нейтрального фосфатного буфера. Если стабильность белка требует определенной ионной силы, ее обеспечивают добавлением в буфер для промывки и элюент соли. Элюцию кислых белков ведут ступенчатым или линейным градиентом концентрации фосфатного буфера — вплоть до 0,8 М. Особо прочно сорбированные белки нередко снимают пирофосфатом. Емкость колонки оксиапатита обычно составляет примерно 1—5 мг белка па 1 мл объема колонки, выход белков — 8O —100%. Утрата ферментативной активности наблюдается редко — метод относительно мягок . I По-видимому, механизм сорбции (в частности, [c.228]

В современных аминекислотных анализаторах используются мелкозернистые катионообменники. Элюция идет при повышенном давлении, на большой скорости, так что весь анализ занимает около часа. Используются колонки длиной 20—30 см. Все фракционирование осуществляется на одной колонке при повышенной температуре (50— ТО ). Используются, как правило, три ступени смены элюента и ступенчатые изменения температуры элюцип, прпчем моменты изменения последней могут и не совпадать с моментами смены буфера. Десорбирующая способность элюента растет от ступени к ступени за счет увеличения pH от 3,2—3,5 (что обеспечивает отставание Glu от Asp п даже от Thr и Ser) и до 10, если ионная сила элюента остается неизменной. В других вариантах элюции от ступени к ступени увеличивается и концентрация соли (вплоть до 1 —1,5 М) тогда увеличение pH ограничивается заметно более скромными цифрами, как можно видеть из приведенных ниже примеров. Использование в качестве солп цитрата натрия (или лития) удобно для кислых значений pH кроме того, он прозрачен в УФ-области спектра. Титровать раствор цитрата натрия до нужного значения pH можно с помощью NaOH или НС1. Молярность соли надо оценивать по суммарной кон- [c.517]

Электрофорез сыворотки крови проводят в 1%-ном агаре в ме-динал-вероналовом буфере (pH 8,6) с ионной силой 0,05. Все белки сыворотки при pH 8,6 заряжаются отрицательно и перемещаются в электрическом ноле в сторону анода. Однако практически медленно продвигающиеся фракции белков сыворотки обычно движутся в сторону катода. Аномальное движение этих фракций объясняется наличием в агаровом геле электроэндоосмотического тока жидкости, направленного в описанных выше условиях от анода к катоду, а также тока жидкости, возникающего при неравномерном испарении воды с поверхности геля. Неравномерное испарение приводит к неравномерному распределению электрического поля в нем. Уменьшить испарение воды можно двумя способами 1) герметически закрывая электрофоретическую камеру во время электрофореза, 2) проводя электрофорез при низкой температуре (в холодильнике или холодной кОмнате, буферный раствор должен быть заранее охлажден). [c.92]

Мединал-вероналовый буфер (pH 8,6 ионная сила 0,1) в 500 мл воды растворяют 17,52 г мединала, добавляют 2,76 г веронала [c.93]

Смесь для полимеризации следует готовить в количестве, необходимом для опыта. Если используют, например, 12 трубочек, нужно приготовить 30 мл смеси. Осторожным вращением колбочки раствор перемешивают и вносят пипеткой в трубочки, укрепленные в подставке, следя за тем, чтобы пузырьки воздуха не попали внутрь полимеризуемого геля. Уровень вносимой жидкости должен находиться на расстоянии 1—1,5 см от верхнего края трубочки. Сверху осторожно наслаивают воду (0,2—0,3 мл) для образования ровной поверхности геля. Полимеризация обычно заканчивается через 20—40 мин, что определяют по образованию хорошо видимой границы между гелем и водой. По окончании полимеризации наслоенную воду удаляют фильтровальной бумагой. Трубочки снимают с подставки и ввинчивают в отверстия дна верхнего буферного резервуара (рис. 10, /). Верхний резервуар присоединяют к нижнему, предварительно заполненному электродным буферным раствором. Следят за тем, чтобы на концах трубочек не было пузырьков воздуха. На поверхность геля микропипеткой наносят растворы белков. Количество наносимого белка зависит от его гомогенности для индивидуального белка — 25—50 мкг, для гетерогенных смесей это количество может быть увеличено до 50—250 мкг. Плотность наносимых образцов белка повышают добавлением 40%-ного раствора сахарозы до конечной концентрации 0,5 М (20%,). Это необходимо для предотвращения смешивания белка с электродным буфером. Высокая ионная сила исследуемых образцов мешает четкому разделению белков, поэтому такие растворы следует предварительно обессолить. [c.96]

Так как величины Кт я V могут по-разному зависеть от pH, исследование, проводимое при ненасыщающих концентрациях субстрата, дает информацию, которую трудно интерпретировать. Поэтому необходима постановка экспериментов по определению влияния pH на Кт. и V. Следует помнить, что концентрация субстрата, являющаяся насыщающей при одном значении pH, при другом может йе быть ею. Выбирая буфер, нужно учитывать, чтобы его рК был по возможности близок к оптимуму pH реакции, а также иметь в виду, что при одном и том же pH в разных буферах каталитическая активность может различаться. Отдельные ионы могут оказывать активирующее или ингибирующее влияние на фермент. Поливалентные анионы (фосфат, сульфат, цитрат) могут конкурировать с отрицательно заряженным субстратом, вызывая ингибирование реакции. Отдельные компоненты буфера, например ЭДТА, гистидин, цитрат, могут связывать ионы металлов, важные для активности некоторых ферментов. Следует иметь в виду, что ионная сила раствора оказывает влияние на активность фермента. Поэтому, изменяя состав реакционной среды, необходимо обеспечивать постоянство ионной силы. [c.211]

Буферный раствор содержит 0,04 моля КТэ2НР04 и 0,02 моля NaH2P04 в 1 л. Рассчитать а) pH, используя значение р/С 6,84, которое соответствует р/С для данной ионной силы раствора б) изменение pH, если к 1 л буфера добавляют 1 см 1 М раствора НС1 в) изменение pH, которое произойдет, если это количество НС1 добавить к 1 л чистой воды при pH 7. [c.237]

Одним из самых важных применений электрофореза является использование его в анализе естественных смесей коллоидов, например белков, полисахаридов и нуклеиновых кислот, а также продуктов, полученных фракционной перегонкой. При электрофорезе между раствором белка и буфером в специальной У-образной трубке, снабженной электродами, образуется резкая граница, за движением которой можно проследить с помощью оптической шлирен-системы (разд. 11.10). Эти опыты обычно проводят при температуре 4° С, т. е. при максимальной плотности воды, так что температурный градиент в электрофоретической кювете, вызванный нагреванием током, сопровождается наименьшим градиентом плотности. Градиенты плотности горизонтально поперек кюветы стремятся вызвать конвекцию. На рис. 20.1 [1] показана электрофоретическая картина плазмы крови человека в буферном растворе (pH 8,6) диэтилбарбитурата натрия с ионной силой 0,10 (после 150 мин при 6,0 В/см и 1°С). Строится график зависимости градиента показателя преломления от расстояния в кювете (горизонтальная ось). Одна картина получена для той части кюветы, в которой белки опускаются вниз, а другая — для той части, где белки поднимаются вверх. Начальные положения границ указаны на рисунке тупыми концами стрелок. Различные виды белков представлены альбумином, аг, аг-, р-, у-глобу-линами и фибриногеном ф. Площадь под определенным пиком почти точно пропорциональна концентрации белка, дающего эту границу. Так, например, процент альбумина может быть получен делением площади пика альбумина на суммарную площадь всех пиков белков. е-Граница в спускающейся части и б-граница в поднимающейся части картины обусловлены не белковыми компонентами, а изменениями концентрации соли, которые возникают в опытах с обычным переносом вблизи начального положения границы. [c.603]

Плавное изменение ионной силы буфера или pH дсстигается различными способами [19, 27, 29, 32, 33, 43, 45, 46, 83, 92, 99, 102, 105, I20J. Из них мы отметим три основных [c.558]

Изоэлектрическая точка зависит от ионной силы и вида применяемого буфера, так как нейтральные соли оказывают влияние на степень иониза-Щ1И ноногенных групп боковых цепей. [c.357]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология