Выбор буфера

ВЫБОР БУФЕРА ДЛЯ ПОСАДКИ ВЕЩЕСТВА [c.404]

Другая возможность использовать негомогенность буфера для концентрирования молекул пробы состоит в выборе буфера и (или) растворов пробы с различными значениями pH. При этом подвижность ионов при прохождении скачка pH на приграничной поверхности между буфером и раствором пробы изменяется и [c.33]

Прямоугольный капилляр 9,5 500 мкм (50 мкм) То же Требует внимания в работе (выбор буфера, скорости потока) высокие загрузки проб производится на заказ [c.361]

Существенную роль в выборе буфера должны играть солевые эффекты и возможность температурных изменений. Нужно иметь в виду и химическую природу компонентов буферного раствора, поскольку добавляемые вещества могут образовывать нерастворимые соединения и комплексы или давать другие нежелательные реакции со средой. Выше (стр. 98) мы рассмотрели влияние типа буфера и его концентрации на буферную емкость, эффект разбавления, солевой эффект и температурный коэффициент. Обсуждение может служить руководством при выборе подходящей буферной системы. [c.114]

Тип противоиона может также оказывать действие и на селективность. Особенно значительные различия иногда наблюдаются для анионов [70]. Подобным же образом в условиях ионообменной хроматографии выбор буфера может оказать значительное воздействие на селективность. В качестве наиболее универсального компонента буферного раствора рекомендуют [c.112]

ВЫБОР БУФЕРОВ И БУФЕРИРОВАНИЕ ИОНИТОВ [c.270]

Выбор буфера обычно делается эмпирическим путем, так как механизм его действия далеко не во всех случаях ясен. [c.244]

Проблема выбора буфера заключается в том, что природные буферы трудно использовать в эксперименте альбумин — из-за опасности белковой ошибки при определении pH фосфат является участником или продуктом многих протекающих реакций. По этой причине получил распространение синтетический буфер трис-гид- [c.92]

Рассмотрим основные технические приемы приготовления и использования гелей для электрофореза. Это рассмотрение целесообразно провести отдельно для трех вариантов аналитического электрофореза вертикального в трубках, вертикального в пластинах и горизонтального в пластинах. Приемы препаративного электрофореза будут рассмотрены отдельно. Методы подготовки препаратов, выбора буферов и различных добавок к ним, а также условий протекания самого процесса электрофореза будут детально исследованы далее, в главах 3 и 4, посвященных описанию различных вариантов электрофоретического фракционирования белков и нуклеиновых кислот. [c.21]

Выбор буфера рабочего геля [c.40]

По существу, картина разделения белковых зон при электрофорезе в градиенте пористости ПААГ зависит только от соотношения размеров белков в препарате и характера градиента пористости. Выбор буфера и электрического рея има электрофореза играет второстепенную роль. Поэтому, в частности, можно [c.74]

Он проводится в буфере с таким pH, при котором разделяемые белки сохраняют стабильность и нативную форму молекул. Этот метод был первым, в котором были использованы различия как в заряде белков, так и в их размерах. Хотя выбор буфера определяется природой белков, чаще всего используют слабощелочные буферные растворы с pH 8—9 в этих условиях большинство белков заряжено отрицательно и движется к аноду, Анод обычно расположен в нижней части геля. Следует отметить, что в этих системах не предусмотрено разделение белков, движущихся в противоположном направлении (рис. 9.1 и и 9.2), т, е. основные белки в данном случае переходят в катодный буфер и утрачиваются для анализа. Поэтому если известно, что большинство исследуемых белков являются основными, [c.318]

Другими факторами, которые должны учитываться ири составлении фиксирующего раствора, являются pH, компенсирующие ионы и температура. Первые два фактора должны быть насколько можно ближе к исходным жидкостям, окружающим клетку и ткань. Фиксирование ткани млекопитающих обычно производится при температуре около 277 К. Необходимо также соблюдать осторожность при выборе буфера, так как важно, чтобы он был достаточно эффективным в диапазоне pH образца. Имеется несколько путей проведения фиксации образец может выдерживаться в паровой фазе фиксатора, погружаться или плавать на поверхности в фиксирующем растворе, а в случае больших животных опрыскиваться in vivo фиксирующим раствором. Фиксация в парах используется для сохранения хрупких воздушных структур, в то время как фиксация с помощью погружения и опрыскивания дает гарантию того, что фиксатор достигнет соответствующих частей образца настолько быстро, насколько это возможно. Фиксация при плавании на поверхности оказывается эффективной для листьев, лепестков и кожи. [c.229]

При выборе буфера следует обращать внимание на множество факторов. Как было показано, для достижения хороших результатов разделения необходимо совпадение подвижностей ионов пробы и буфера. Концентрация ионов буфера должна быть больше, чем концентрация ионов в растворе пробы. Это приводит к симметричным четким зонам, так как только тогда на ионы пробы не влияет электрическое поле. С другой стороны, высокая ионная сила при заданном падении напряжения означает высокую плотность тока и поэтому увеличение джоулева тепла. Этот эффект можно просто измерить как отклонение от закона Ома. Преимущество буфера на основе органического цвиттериона (например, 3(-циклогексиламино)-1-пропан-сульфокислотный буфер) с его очень маленькой электропроводностью является решающим при использовании капилляров с большим внутренним диаметром. [c.51]

Пептиды наносят на колонку в 0,1—0,2 н. уксусной или муравьиной кислоте, в 0,2%-ном карбонате или бикарбонате аммония. Тип геля выбирают так, чтобы пептид появлялся на выходе колонки вблизи свободного объема. Для этой цели наиболее всего подходят сефадексы 0-10, 0-15, 0-25 и биогели Р-2 и Р-6. Объем образца не должен превышать 7з—74 от объема столбика геля (например, в случае сефадекса 0-25). Элюировать удобно летучими буферными растворами, хотя выбор буфера зависит от растворимости пептида. В случае необходимости обессоливание ведут в дистиллированной воде, однако при этом происходит расширение зон, которое может привести к их перекрыванию. Для достижения полного обессоливания необходимо увеличить столбик геля. В зависимости от объема выхода пептида, нагрузки на колонку и объема образца скорость элюирования составляет примерно 7—20 мл/ч см . При работе на сильиосшитых гелях рекомендуется несколько увеличить высоту столбика геля (по сравнению с сефадексом 0-25). Пептиды обнаруживают в элюате колориметрически, спектрофотометрически, а выделяют упариванием при пониженном давлении или лиофилизацией. [c.397]

Таким образом, при выборе буфера следует остановиться именно на № 9 (кроме тех случаев, когда в опыте специально нужна измененная концентрация углекислоты). Однако в большинстве проведенных до сих пор манометрических определений фотосинтеза листьев наземных растений были получены в присутствии буфера № 9 ненормально низкие величины интенсивности фотосинтеза. Это привело некоторых исследователей к сомнению в целесообразности использования манометрической методики для определения фотосинтеза наземных растений. Действительно, сравнение фотосинтеза различных растений, в целях которого обычно применяется манометрическая методика, не имеет смысла, если в сосудике прибора нельзя получить высоких величин интенсивности фотосинтеза. У различных растений фотосинтез будет иметь одинаковую величину, если высокие интенсивности срезаются в приборе. Возможно, что именно этим и объясняются те близкие величины интенсивности фотосинтеза, которые получили Рихтер, Сухорукова и Остапенко (1945а) у различных растений. К сожалению, только в одной из опубликованных работ проверено, действительно ли фотосинтез листьев в манометрическом сосудике ограничен недостатком углекислоты. Автор этой работы ( а8-8т1с, 1946) сопоставил интенсивность фотосинтеза при двух различных температурах. Оказалось, что фотосинтез высечек из листа, погруженных в буфер № 9, не увеличивается при повышении температуры, что свидетельствует о недостаточном обеспечении клеток листа углекислотой. [c.73]

В настоящее время в практике экспериментальных работ широко используют синтетические буферы со значениями рК в области нейтральных значений pH — MES, PIPES, HEPES и др. Для того чтобы обезопасить себя от возможных ошибок, связанных с неудачным выбором буфера, следует сравнивать результаты экспериментов, полученные в разных буферных средах. [c.93]

Главное преимущество химии ТФ-анализа заключается в гибкости выбора буферов, растворителей, режимов промывок, реагентов, различных добавок, температуры. Потери образца с экстракциями, а также летучесть или растворимость вещества в ходе анализа налагают очень незначительные ограничения на рабочие параметры, за исключением тех случаев, когда пептиды присоединены адсорбционными связями или когда реакции проводят в газотвердофазной системе. [c.448]

Небиоспецифические взаимодействия (например, образование ионной пары между подвижным компонентом и матрицей), приводящие к нежелательному дополнительному удерживанию, должны быть исключены соответствующим выбором буфера и условий проведения эксперимента [5]. Природа неспецифического взаимодействия определяет в конечном счете условия, необходимые для его исключения. [c.221]

Пористость, длина и выбор буфера для нижнего (рабочего) геля определяются точно такими же соображениями, что и для простого непрерывного электрофореза. Единственное, что здесь своеобразно — это обязательное использование в составе рабочего буфера быстроподвижных ионов, мигрирующих в том же направлении, что и белки, например иона С1 для щелочных буферов или иона К" — Для кислых. Выше отмечалось, что использование таких ионов невыгодно, так как приводит к ограничению напряженности поля и скорости миграции белков. Однако в данном случае использование быстрых ионов диктуется самим существом метода, как это будет ясно из дальнейшего изложения. Заметим, кстати, что если концентрация этих ионов и зависит от pH буфера, то их электрофоретическая подвижность от pH совершенно не зависит. [c.66]

Для каждого конкретного белка такую зависимость легко получить экспериментально. Удобно, напри ер, в разные карманы одной пластины геля последовательно, через известные промежутки времени, вносить аликвоты раствора исследуемого белка. К моменту прекращения опыта для каждого трека на пластине будет известна продолжительность электрофореза, а расстояние миграции легко измерить. Это можно сделать даже для смеси нескольких белков. Дал е по экспериментальным точкам строят график зависимости у/ от О, имеющий вид прямой линии. Тангенс угла наклона этой прямой —значение коэффициента а в написанном выше уравнении. Ясно, что этот коэффи-цие.нт должен зависеть от молекулярной массы белка чем он крупнее, тем медленнее мигрирует в геле. Оказывается, что соотношение между логарифмами коэффициента а и молекулярной массы белка имеет тоже приблизительно линейный характер в широком интервале молекулярных масс — от 20 до 950 тыс. дальтон. Коэффициенты в этом втором линейном уравнении зависят от выбора буфера. Авторы дают их значения для трех стандартных буферов фосфатного (pH 7,2), Трис-боратно-го (pH 8,2) и Трис-барбитуратного (pH 9,8). Так, для 0,01 М Ыа-фосфатного буфера (pH 7,2) имеет место зависимость lgЛi=l,93 lga- -6,99. Точность определения молекулярной массы невысока — в среднем 20%. Однако важное достоинство метода состоит в возможности оценивать суммарную молекулярную массу белков, состоящих из субъединиц, которые диссоциируют при обработке ДДС-Ыа. Таким образом, комбинируя результаты определения молекулярной массы некоего белка описанным методом с тем, что дает для него же электрофорез с использованием ДДС-Ыа, можно выяснить субъединичное строение белка. [c.76]

Выбор буфера геля и напряяеенности электрического поля [c.120]

Для решения такой же задачи другие авто-эы использовали 1%-ный [Barnes, 1977] и, 2%-ный гели агарозы [Fantoni et al., 1979]. Очевидно, что концентрацию агарозы можно варьировать в зависимости от ожидаемого размера плазмид. Выбор буфера, как уже указывалось, не играет больщой роли. [c.126]

Для каждого конкретного белка такую зависимость легко получить экспериментально. Удобно, например, в разные карманы одной пластины геля последовательно, через известные промежутки времени, вносить аликвоты раствора исследуемого белка. К моменту прекрашения опыта для каждого трека на пластине будет известна продолжительность электрофореза, а расстояние миграции легко измерить. Это можно сделать даже для смеси нескольких белков. Далее по экспериментальным точкам строят график зависимости 1 от В, имеющий вид прямой линии. Тангенс угла наклона этой прямой—значение коэффициента а в написанном выше уравнении. Ясно, что этот коэффициент должен зависеть от молекулярной массы белка чем он крупнее, тем медленнее мигрирует в геле. Оказьшается, что соотношение между логарифмами коэффициента а и молекулярной массы белка имеет тоже приблизительно линейный характер в широком интервале молекулярных масс—от 20 до 950 тыс. дальтон. Коэффициенты в этом втором линейном уравнении зависят от выбора буфера. Авторы дают их значения для трех стандартных буферов фосфатного (рН 7,2), Трис-боратно-го (pH 8,2) и Трис-барбитуратного (pH 9,8). Так, для 0,01 М Ка-фосфатного буфера (pH 7,2) имеет место зависимость [c.76]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология