Аминокислотные анализаторы буферные растворы

Аминокислотный анализатор — это сложный прибор, требующий постоянного ухода даже при аккуратном обращении с ним. Анализатор не должен выключаться на длительное время (1—2 дня). Буферные растворы являются прекрасными средами для размножения грибов и других микроорганизмов.Даже при 1—2-дневной остановке прибора возможно бактериальное прорастание растворов, искажающее результаты анализа (см. источники ошибок).Если прибор постоянно не используется, то следует каждый день включать его на несколько минут для циркуляции растворов и менять при этом положение всех кранов. Когда прибор выключают на длительное время, необходимо удалить буферные растворы и промыть его дистиллированной водой. Смола должна храниться в щелочном растворе в колонке или в каком-либо сосуде. [c.174]

При уравновешивании обычно применяют цитратный буферный раствор, имеющий концентрацию Ыа" 0,02 М и pH 3, используемый в 10-кратном разведении в качестве первого буферного раствора (А) в аминокислотном анализаторе. Во время уравновешивания пластинки нижняя часть слоя (погружаемая в буферный раствор) может расслоиться, сползти с подложки или полностью отделиться от нее. Поэтому при уравновешивании следует погружать конец пластинки не более чем на 1 см, а после высушивания целесообразно снимать с пластинки эту полоску слоя ионообменника. [c.247]

Одномерная тонкослойная ионообменная хроматограмма дает почти те же значения аминокислот, что и диаграмма, полученная на аминокислотном анализаторе. Разделение аминокислот от Асп до Ала в анализаторе также чувствительно к изменению pH и молярности буферного раствора и ухудшается при увеличении pH. В то же время разделение аминокислот от Вал и далее уже нечувствительно к изменению pH и молярности. [c.256]

В последнее время появилась возможность определять аминокислотный состав белков с помощью автоматических аминокислотных анализаторов. Когда в 1948 г. Мур и Стейн [551 в дополнение к классическим методам органической химии, а также манометрическому и бактериологическому анализу ввели ионообменную хроматографию, наступил поворотный момент в развитии химии аминокислот. В основу работы созданных сотрудниками Рокфеллеровского института современных автоматических аминокислотных анализаторов была положена ионообменная хроматография. Принцип работы этих приборов заключается в следующем. Исследуемый белок гидролизуют, затем гидролизат подвергают хроматографии на смоле типа дауэкс 50 х8 в Na-форме. Элюирование производят с помощью непрерывной подачи буферного раствора. Выходящий из колонки элюат попадает в пластмассовую ячейку особой формы, где он смешивается с раствором нингидрина. Подачу нингидрина осуществляет специальный насос, работающий синхронно с насосом, подающим буферный раствор на колонку. Затем смесь элюата с нингидрином проходит через тефлоновый капилляр, который погружен в кипящую баню. В этих условиях в растворах происходит нингидриновое окрашивание, интенсивность которого измеряется в проточной кювете спектрофотометрически. Поглощение света регистрируется самописцем. Применение сферических смол [80] позволило сократить время исследования одного образца примерно в четыре раза, а использование особых ячеек сделало вполне допустимыми для анализа очень малые количества исследуемого вещества — порядка 0,01—0,05 мкмоля [38]. Введение одноколоночной процедуры значительно упрощает метод [9, 29, 43, 60]. С помощью этой методики в одной и той же пробе можно определить кислые, нейтральные и основные аминокислоты, что не только экономит исследуемый материал, но и повышает точность и сокращает время исследования. Работая на стандартном аминокислотном анализаторе и пользуясь некоторыми модификациями известных методов, можно полностью закончить анализ одного вещества в течение 3 ч [91. [c.32]

Ароматические и основные аминокислоты на пластинке Фик-сиоц 50 X 8 разделяются при одномерной хроматографии в цитратном буферном растворе pH 5,23 с концентрацией Ыа" 0,35 М (буферный раствор В, табл. 10), который используется в двухколоночной системе аминокислотного анализатора. Типичная хроматография такого разделения представлена на фиг. 49. Колебания pH и концентрации буферного раствора не существенны для фракционирования. Хроматографию проводят при комнатной температуре без предварительного уравновешивания. В камеру наливают слой буферного раствора высотой примерно 1 см. При хроматографии фронт буферного раствора должен подняться на высоту 15 см. Если пластинка не уравновешена, на это уходит около 2 ч. На уравновешенной пластинке (см. буферный раствор для уравновешивания, табл. 10) это происходит за несколько ми-нут. На примере разделения ароматических и основных аминокислот можно оценить Лиз высокую разрешающую спо-Гис обность ионообменной хроматографии в тонком слое по сравнению с соответствующей колоночной техникой. Известно, что на малой колонке в этом же буферном растворе (т. е. 0,35 М Ыа+, pH 5,23) ароматические аминокислоты не отделяются друг от друга. [c.250]

Нингедриновое окрашивание аминокислот и других аминов широко используют в автоматических аминокислотных анализаторах. В смесительную камеру подают 2—4%-ный раствор реактива в смеси (3 1) метилцеллозольва или дн-метилсульфоксида с 4 Л1 ацетатным буферным раствором (pH = 5,5) к раствору добавляют также гидриндантин до концентрации 0,6 г/л (или хлорид олова, хлорид титана). После смешивания элюата с реактивом поток пропускают через капилляр, погруженный в кипящую водяную баню (90—100 С). Фотометрирование проводят при 440 и 570 нм. Чувствительность определения аминокислот — до 10 моль. [c.380]

Однако существует настоятельная необходимость резкого увеличения чувствительности аминокислотных анализаторов (до 10 — 10" ° моль) и сокращения продолжительности анализа. В связи с этим проводился ряд работ по усовершенствованию процесса Штейна и Мура. Здесь следует отметить работу Наббарда [28], предложившего экспрессный вариант этого процесса за счет применения сульфополнстирольной смолы (с 7,5% поперечной сшивки) со сферическими зернами малого размера и увеличения скорости элюции до 70 мл час, потребовавшего увеличения давления до 24,5 ат на длинной колонке (52x0,9 см) с зерном 16 + 6 мк и до 5 а/ге на короткой колонке (4x0,9 см) с зерном 13+6 лек. Одновременно в состав буферных растворов pH 4,14 и 5,18 было введено 3 и 5% пропанола. В результате время анализа кислых и нейтральных аминокислот сократилось до 1 час 50 мин, а основ- [c.150]

Бенсон и Паттерсон [15] описали методику быстрого хроматографического анализа аминокислот, входящих в состав физиологических жидкостей. Они использовали гранулированные иониты и иониты со сферическими зернами и вели анализ по слегка модифицированному варианту двухколоночной методики Спакмана и сотр. [186] с применением аминокислотного анализатора Be kman Spin o Model 120 С (см. гл. 8). Позднее Бенсон и сотр. [14] приспособили эту методику для анализа соединений нейтрального и кислотного характера в присутствии литиевых буферных растворов, которые обеспечивают хорошее разделение глутамина и аспарагина. Авторы работы [15] применили эту методику для разделения соединений основного характера, а авторы [14]—для разделения соединений с нейтральными и кислотными свойствами. В обоих случаях применялись иониты со сферическими частицами и нингидриновый реагент [186]. [c.306]