Скоростной зональный метод

Материал, полученный одним из описанных выше методов, обычно контаминирован клеточными компонентами. Однако в тех случаях, когда высокая степень очистки не обязательна (например, для постановки RIA или ELISA), его можно использовать уже на этой стадии. Тем не менее для большинства исследований необходима дальнейшая очистка вируса с помощью зонально-скоростного или изопикнического центрифугирования в градиенте. При скоростном центрифугировании положение вируса в градиенте определяется его коэффициентом седиментации, а при изопикническом — плавучей плотностью. Для достижения максимальной степени очистки вирусных частиц от примесей изменение концентрации образующего градиент вещества должно быть плавным в то же время на промежуточных стадиях очистки нередко используют ступенчатые градиенты. В некоторых случаях принципы скоростного и изопикнического центрифугирования совмещаются примером может служить использование градиентов глицерина — тартрата калия [14]. В таких градиентах концентрация тартрата калия возрастает в направлении дна пробирки, достигая плотности, соответствующей плавучей плотности вируса концентрация глицерина, наоборот, максимальна на мениске, что препятствует продвижению медленно седиментирующего материала в направлении дна. Все типы градиентов обычно центрифугируют в бакет-роторах, но в случае изопикнических градиентов такие же или даже лучшие результаты можно получить в угловых или вертикальных роторах с помощью приспособлений для медленного разгона и остановки, обеспечивающих переориентацию градиента без перемешивания. При очистке конкретного вируса часто приходится проводить целую серию последовательных стадий центрифугирования в разных типах градиентов, чтобы добиться нужной степени очистки. [c.100]

Скоростной зональный метод, или метод движущейся зоны, состоит в наслаивании смеси на мениск жидкости в ячейке или пробирке и последующей седиментации компонентов в виде зон, движущихся в соответствии с величиной 5 содержащегося в зоне компонента. В данном случае имеются в виду коэффициенты седиментации, отвечающие условиям проведения препаративного опыта. Поскольку для предотвращения конвекции здесь используется градиент плотности, коэффициенты седиментации изменяются за счет изменений плотности, вязкости, осмотических эффектов и т. д., происходящих по мере движения частиц в градиенте. [c.193]

Зональный скоростной метод. В пробирке или ячейке создают градиент плотности и на верхний слой раствора наносят исследуемый образец. Компоненты смеси седиментируют в виде отдельных зон со скоростями, приблизительно отвечающими коэффициентам седиментации этих компонентов. Градиент плотности создается для предотвращения конвекции. [c.181]

Существуют два варианта этого метода. В первом проводят зонально-скоростное центрифугирование, при этом используют градиент с небольшим диапазоном концентраций. Его функция состоит главным образом в предотвращении перемешивания фракций при центрифугировании вследствие конвекции. Нанесенный на градиентный раствор гомогенат или грубую фракцию мембран центрифугируют непродолжительное время. Частицы распределяются в соответствии со скоростями их седиментации. При достаточно большом времени центрифугирования все фракции поочередно осаждаются на дно пробирки. [c.66]

Осветленный и концентрированный вирус еще недостаточно чист для большинства биохимических и биофизических исследований. Дополнительной очистки достигают зональным (скоростным) или равновесным (изопикническим) центрифугированием. Теоретические и практические аспекты центрифугирования детально изложены в другом руководстве [7]. Для вирусов растений можно использовать следующие методы дополнительной очистки. [c.16]

Зонально-скоростное центрифугирование используют т только для разделения (фракционирования) частиц, но и для определения их характеристик — размеров и плотности. С этой целью удобно ввести величину, зависящую только от этих двух параметров частицы и поддающуюся количественному определению методом ультрацентрифугирования. В интересах сопоставления различных экспериментальных данных эта величина должна иметь универсальный характер, т. е. не зависеть от условий ее определения. Такой величиной служит константа седиментации частицы. [c.203]

Трение влияние формы 299 Молекулярная масса 300 Метод точного измерения коэффициента седиментации 301 Примеры использования скоростной седиментации 302 Зональное центрифугирование в предварительно подготовлен ном градиенте плотности 306 Определение коэффициента седиментации с помощью зонального центрифугирования в предварительно приготовленном градиенте плотности ЗП [c.578]

Для HBV разработано несколько методов получения поверхностного антигена в клетках эукариот. Стимулом для этих разработок послужила острая необходимость в дешевой вакцине. Хотя имеющаяся в настоящее время разрешенная вакцина против HBV, содержащая (22 нм)-поверхностный антиген гепатита В (HBsAg), который получен из плазмы хронически инфицированных носителей, защищает от заболевания, высокая стоимость препятствует ее использованию в развивающихся странах, где нужда в эффективной иммунопрофилактике особенно велика. Возможно, эта ситуация скоро будет исправлена, поскольку в настоящее время антиген HBsAg получают из дрожжей в количествах, очевидно, достаточных для его поступления в продажу. Его экспрессия достигается при трансфекции дрожжей рекомбинантом, который содержит ген поверхностного антигена HBV, встроенный в плазмиду за индуцируемым промотором [ИЗ, 186]. Продуцируемый дрожжами HBsAg, очевидно, не гликозилирован, но иммуногенен в организме шимпанзе. После разрушения дрожжевых клеток антиген очищают с помощью изопикнического и скоростного зонального центрифугирования в комбинации с иммуноаффинной хроматографией [16, 186, 189]. [c.156]

Роторы для умеренных скоростей вращения, но с относительно длинными пробирками объемом от 13,2 до 17 мл. Они особенно удобны для разделения близких по массе частиц методом зонально-скоростного центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. К этой группе относятся роторы SW 28.1 (SW 27.1), SW 40Ti и SW 41 Ti. [c.191]

Ознакомившись достаточно подробно с используемой техникой, перейдем к рассмотрению основных методов ультрацентрифугирования, применяемых для очистки и фракционирования белков, нуклеиновых кислот и субклеточных органелл дифференциального, зонально-скоростного и равновесного (изопикни-ческого). Они будут рассмотрены в этом же порядке. Под частицами будем, как и прежде, понимать не только молекулярные агрегаты, но и макромолекулы. [c.199]

Метод зонально-скоростного, или, как его еще называют, 5-зонального центрифугирования, заключается в наслаивании исследуемого образца на поверхность раствора с непрерывным градиен- [c.47]

Зональное центрифугирование оказывается полезным при определении наличия очень маленьких количеств быстро седимен-тирующего вещества в образце В стандартном методе скоростной седиментации быстро осаждающийся компонент движется через седиментирующий медленно, при этом скорость его движения замедляется за счет эффекта Джонстона — Огстона это часто не позволяет его заметить. В зональной седиментации такие небольшие фракции седиментируют в области нулевой концентрации, поэтому их легко можно идентифицировать. [c.319]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология