Дальнейшая очистка препаратов вируса

ДАЛЬНЕЙШАЯ ОЧИСТКА ПРЕПАРАТОВ ВИРУСА [c.44]

В качестве продуцента при производстве вакцин используют особые, адаптированные на специальных питательных средах культуры вирусов и бактерий. Работая с живыми вакцинами надо следить за тем, чтобы под воздействием мутагенных факторов культура не восстановила свою вирулентность или не потеряла свои антигенные свойства. Важно подобрать такую питательную среду, чтобы облегчить дальнейшую очистку препарата. В производстве вакцин широко используют среду, приготовленную из гидролизата казеина с добавками глюкозы, дрожжевого автолизата или кукурузного экстракта. При получении дифтерийного токсина или вакцин кишечных заболеваний, культивируя глубинным методом аэробные бактерии, используют обычные системы аэрации. При культивировании анаэробных бактерий, например возбудителя столбняка, для удаления кислорода из среды через нее пропускают инертный газ, например азот. [c.125]

Иногда как эффективный этап дальнейшей очистки частично очищенных препаратов вируса используют хроматографические методы. Например, для очистки вируса некротического пожелтения салата-латука Мак-Лин и Франки [1127] использовали метод хроматографии на колонках с кальций-фосфатным гелем в фосфатном буфере. При элюции фосфатным буфером (pH 7,6) вирус проходит через колонку, в то время как большая часть примесей остается адсорбированной на геле. В таких условиях с колонки элюировали 50—80% инфекционного вируса, что составляло лишь 10% нанесенного на колонку материала, поглощающего при 260 нм. [c.46]

Необходимая степень очистки вируса определяется тем, какие биофизические или биохимические методы будут применены для его исследования в дальнейшем. Очевидно, что препараты, используемые для анализа вирусных нуклеиновых кислот или капсидных белков, должны быть очищены от клеточных примесей более тщательно, чем препараты, предназначенные для электронной микроскопии или седиментационного анализа. [c.19]

В 1935 г. Стенли [759], применяя это вещество, впервые получил препарат вируса табатаой мозаики в кристаллическом состоянии. Впоследствии этим методом успешно подучали высокоочищенные препараты многих вирусов растений [528, 643, 784], Но для концентрирования и очистки вирусов животных он может быть применен только в качестве предварительной обработки. Дальнейшая очистка препарата, концентрированного сульфатом аммония, достигается более сложными методами. Этот метод успешно применяли для предварительного концентрирования вируса ящура, энтерита норок, Коксаки А9 и А10, полиомиелита, реовирусов, гриппа, болезни Ньюкасла, саркомы Рауса, лейкемии Раушера, везикулярного стоматита и лимфоцитарного хорио менингита [79, 230, 254, 295, 373, 452, 544, 571, 582, 629, 689, 833]. [c.46]

Для люминесцентной метки белков применяют флуорохромы изоцианат и изотиоцианат флуоресцеина, некоторые производные родамина, в том числе изоцианат тетраметилродамина, хлорид диметил-нафтил-ами-но-сульфокислоты и ядерный красный прочный. Наиболее широко используется изоцианат флуоресцеина. Его растворяют в смеси диоксана с ацетоном и в таком виде соединяют с белком (обычно глобулиновой фракцией в количестве 5 мг флуорохрома на 100 мг белка) при температуре О—5° С, перемешивая в течение 18 часов. Полученный коньюгат белка с флуоресцеином освобождают от несвязавшегося красителя сначала с помощью диализа против забуференного при рН=9,0 физиологического раствора. Дальнейшая очистка от избыточного красителя производится переосаж-дением белка сульфатом аммония (4—5 раз), пока надосадочная жидкость не перестает люминесцировать. Препараты (мазки, суспензии, замороженные срезы), как фиксированные ацетоном, так и нефиксированные, приводят в соприкосновение с люминесцентно-меченым белком в течение 30 минут, промывают в физиологическом растворе (рН=7ч-7,5) и заключают в забу-ференный глицерин. Исследовать такие препараты лучше при ультрафиолетовом возбуждении. Соответствующие антигены при этом люминесцируют очень ярко светло-зеленым светом. Этот метод позволяет определять внутриклеточную локализацию чужеродных полисахаридов и белков, ферментов и гормонов, устанавливать антигенное родство тканей и клеток, быстро идентифицировать под микроскопом бактерии й вирусы. [c.317]

Получение ультрафиолетовых спектров поглощения вирусов — метод в наши дни весьма доступный, так как регистрирующие спектрофотометры имеются сейчас почти во всех лабораториях. Для регистрации спектра требуется всего лишь 0,05—0,2 мг вируса, причем материал этот может быть использован повторно. По характеру кривой поглощения можно судить о содержании в вирусе белков и нуклеиновых кислот. Отношение величины поглощения при 260 и 280 нм ( 260/ 280)1 а также отношение ыакс/ мин характеризует относительное содержание нуклеиновых кислот и белков в пробе, а отсутствие изменений в характере спектра после дальнейшей очистки и фракционирования препаратов вируса служит дополнительным указанием на чистоту выделенного вируса (см. гл. IV, разд. В). [c.48]

Методы выделения вирусов простого герпеса довольно сложны по сравнению с другими вирусами. Более того, метод, хорошо зарекомендовавший себя при работе с одним штаммом вируса на определенной клеточной линии, может оказаться неприемлемым для других штаммов на той же линии или того же штамма вируса на других клетках. Поэтому мы опишем два метода. Мы показали, что первый метод можно успешно применять для получения штамма HFEM и некоторых других при условии, что для выращивания вируса используют клетки Нер-2. Данный метод прост и позволяет получать вирусные препараты высокой степени чистоты. Второй метод позволяет достигнуть удовлетворительных результатов со всеми штаммами вируса и различными типами клеток. Для выбора оптимальных условий получения высокого выхода вируса и качественного исходного материала для дальнейшей очистки следует вначале изучить кривую роста исследуемого вирусного штамма на различных линиях клеток. На рис. 10.4 показана кривая роста штамма HFEM на клетках Нер-2 при высокой множественности инфекции и культивировании клеток при 32 °С. Оптимальные условия, которые требуются для приготовления исходного материала, в общих чертах описаны в разд. 2.5.1. [c.279]

Электронно-микроскопическое исследование концентрированных препаратов вирусов показало, что подобная процедура не приводит к нарушению структуры вирус-ных частиц Дальнейшая очистка концентрированных препаратов может быть достигнута с помощью ультрацент-рифугироваиия, гельфильтрации, ионообменной хроматографии или экстракцией органическими растворителями, [c.96]

Если после проведения очистки биологическая активность вирусного препарата возросла на два и о ряд да в пе ресчете на 1 мг белка (с 10 единиц до 10 единиц), то считают, что очистка по белку произведена на 99%. Увеличение биологической активности вируса на три порядка в пересчете на 1 мг белка соответствует очистке по белку на 99,9% [48 а]. Подобные показатели кажутся весьма убедительными. Но следует помнить, что сами по себе эти цифры ни в коем случае не характеризуют степень чистоты подученного вирусного препарата, даже если это вышеупомянутое соотношение будет иметь тенденцию оставаться постоянным при дальнейшей очистке. Показатели так на- [c.149]

Вирусные препараты, прошедшие одну стадию очистки и концентрирования, еще содерншт некоторое количество низко- и высокомолекулярных веществ, происходящих из ткани хозяина. Большая часть этих примесей может быть удалена иа дальнейших стадиях очистки. Метод, который следует при этом использовать, в значительной степени зависит от стабильности вируса, количества выделенного препарата и цели, для которой требуется препарат. [c.44]