Седиментация зональная

Чаще всего для разделения мембран применяют метод центрифугирования. Мембранные частицы разделяют по скорости их седиментации (зональное центрифугирование) или по плавучей [c.217]

Коэффициенты седиментации при помощи таких ячеек определяются также по графику зависимости IgA от t, как описано выше. Величина х и в этом случае соответствует расстоянию от вершины пика до оси вращения. Значения коэффициента седиментации, полученные зональным методом, близки к тем значениям, которые можно получить с помощью метода с седиментирующей границей [12]. [c.68]

Зональный скоростной метод. В пробирке или ячейке создают градиент плотности и на верхний слой раствора наносят исследуемый образец. Компоненты смеси седиментируют в виде отдельных зон со скоростями, приблизительно отвечающими коэффициентам седиментации этих компонентов. Градиент плотности создается для предотвращения конвекции. [c.181]

Скоростной зональный метод, или метод движущейся зоны, состоит в наслаивании смеси на мениск жидкости в ячейке или пробирке и последующей седиментации компонентов в виде зон, движущихся в соответствии с величиной 5 содержащегося в зоне компонента. В данном случае имеются в виду коэффициенты седиментации, отвечающие условиям проведения препаративного опыта. Поскольку для предотвращения конвекции здесь используется градиент плотности, коэффициенты седиментации изменяются за счет изменений плотности, вязкости, осмотических эффектов и т. д., происходящих по мере движения частиц в градиенте. [c.193]

Поведение воды на земной поверхности определяется гидрологическим циклом (рис. 5.1). Движущей силой цикла служит атмосферный перенос влаги за счет испарения с поверхности океана атмосферный гидрологический цикл оказывается определяющей частью климатической системы и ее зональности он служит связующим звеном океанической и континентальной систем. Гидрологический цикл работает как перколятор испаряющаяся вода приходит в равновесие с газами атмосферы, перераспределяется с потоками воздуха в атмосфере и, почти дистиллированная , выпадает на поверхность суши здесь она выщелачивает горные породы, создавая кору выветривания и приходя в неполное равновесие с минералами поверхностных пород, возвращается в океан в виде речного стока, обогащенного растворенными веществами и взвесью минералов ( твердым стоком ), перерабатываемыми в бассейнах седиментации -основной зоне формирования осадочных пород. Под действием [c.149]

Существуют два варианта этого метода. В первом проводят зонально-скоростное центрифугирование, при этом используют градиент с небольшим диапазоном концентраций. Его функция состоит главным образом в предотвращении перемешивания фракций при центрифугировании вследствие конвекции. Нанесенный на градиентный раствор гомогенат или грубую фракцию мембран центрифугируют непродолжительное время. Частицы распределяются в соответствии со скоростями их седиментации. При достаточно большом времени центрифугирования все фракции поочередно осаждаются на дно пробирки. [c.66]

Вирионы рабдовирусов имеют весьма характерную структуру в препаратах, окрашенных методом негативного контрастирования, обнаруживаются частицы вариабельной длины, имеющие закругленный и уплощенный концы (так называемые пулевидные частицы). Нормальные инфекционные вирионы имеют длину 170—180 нм и диаметр 70 нм. Дефектные интерферирующие частицы (ДИЧ) сохраняют характерную для инфекционных частиц пулевидную форму, но имеют меньшую длину. Они неинфекционны и накапливаются в возрастающем количестве при пассировании большинства типичных рабдовирусов без разведения благодаря их способности успешно конкурировать (интерферировать) с нормальными инфекционными частицами. ДИЧ имеют такой же химический состав, как и стандартные вирионы, но их геномная РНК имеет меньший размер. ДИЧ и стандартные вирионы данного вируса существенно различаются по коэффициентам седиментации, что используется для их разделения методом зонального центрифугирования. Метод, описанный ниже, эффективен для очистки вируса из культуральной среды. Хотя рабдовирусы высвобождаются из зара- [c.123]

На схеме 5 показан конечный момент зонально-скоростного центрифугирования. Ротор закрыт пробкой и вращается с большой скоростью. Частицы распределились вдоль градиента в соответствии с их константами седиментации. [c.195]

Зонально-скоростное центрифугирование используют т только для разделения (фракционирования) частиц, но и для определения их характеристик — размеров и плотности. С этой целью удобно ввести величину, зависящую только от этих двух параметров частицы и поддающуюся количественному определению методом ультрацентрифугирования. В интересах сопоставления различных экспериментальных данных эта величина должна иметь универсальный характер, т. е. не зависеть от условий ее определения. Такой величиной служит константа седиментации частицы. [c.203]

Это соотношение подсказывает простой способ определения константы седиментации исследуемых молекул путем сопоставления их с маркером — веществом такой же природы (белок, ДНК или РНК), но с известным значением Sjo.w. Оба эти вещества надо, предварительно смешав, разделить зонально-скоростным центрифугированием в изокинетическом градиенте плотности, а затем по соотношению расстояний, пройденных их зонами от мениска, рассчитать искомую величину S2o,w = S2o, m(///m). Буквой м обозначен маркерный препарат. Для цилиндрической части пробирки отношение расстояний от мениска можно заменить отношением соответствующих им объемов. Опорожнять пробирку в этом случае удобнее, начиная с мениска (см. ниже). Объемы нередко заменяют числом капель. При этом следует проявлять осторожность, так как объем падающей в коллектор капли зависит от поверхностного натяжения и плотности жидкости, а они неодинаковы на разных участках градиента плотности. [c.205]

В случае смеси макромолекул с различными значениями 5 при относительно высокой концентрации возникает особая проблема. В этом случае молекулы мешают седиментации не только себе подобных, но и других типов молекул. К тому же молекула с большим S и большей концентрационной зависимостью, должна седиментировать через раствор более медленно движущихся молекул. При высокой концентрации более быстро осаждаемые молекулы будут так задерживаться, что они седиментируют почти с той же скоростью, что и более медленно осаждаемые молекулы при этом может происходить маскировка того факта, что в действительности имеется смесь, и можно получить ошибочную информацию о гомогенности материала. Этот процесс носит название эффекта Джонстона — Огстона. На деле для разделения больших молекул нуклеиновых кислот часто приходится работать с очень низкими концентрациями, поскольку только в этих условиях происходит разделение двух компонентов. Однако даже при этих концентрациях полученные данные показывают меньшее содержание более быстро осаждаемого компонента, чем имеется в действительности. Пример этого дан на рис. 11-14. Как будет показано ниже (см. разд. Зональное центрифугирование в предварительно подготовленном градиенте плотности ), эта трудность сводится к минимуму при использовании метода зонального центрифугирования. [c.294]

Разделение двух компонентов методом зонального центрифугирования в градиенте плотности сахарозы (седиментация происходит справа налево). [c.308]

Определение коэффициента седиментации с помощью зонального центрифугирования в предварительно приготовленном градиенте плотности [c.311]

При определении 5 с помощью зонального центрифугирования часто используют стандартные образцы (маркеры), значения з которых предварительно были определены методом аналитического ультрацентрифугирования. Однако даже в том случае, когда концентрация достаточно низка, чтобы можно было не принимать во внимание концентрационную зависимость седиментации (которая может достигать большой степени, если материал недостаточно чист), определение с помощью зонального центрифугирования имеет подводные камни, которые не встречаются в аналитическом ультрацентрифугировании. Это можно объяснить тремя основными причинами. Во-первых, плотность и вязкость раствора увеличивается вдоль пробирки, поэтому суммарная сила, действующая на молекулу, здесь уже не является простой функцией расстояния. Во-вторых, стенки препаративных пробирок параллельны, поэтому они не совпадают с направлением седиментации, в результате чего происходит седиментация по стенкам с накоплением вещества. Это накопление приводит к локальным инверсиям плотности, вызывая некоторую конвекцию. В-третьих, значение 8 рассчитывается только по двум точкам, положению при времени, равном нулю, и после остановки центрифуги, так что истинная скорость движения остается неизвестной. Первая причина может быть рассмотрена очень сложным теоретическим путем, вторая теоретически описана, однако влияние ее на 5 до конца не установлено. Для избежания трудностей, связанных с первой причиной, обычно применяют изокинетические градиенты, т. е. концентрацию и плотность градиента подбирают таким образом, чтобы молекулы двигались с постоянной скоро- [c.311]

Зональная седиментация РНК, синтезируемой из матричной ДНК фага "К Е. соИ (градиент сахарозы 5— [c.314]

Зональная седиментация в самогенерирующемся градиенте плотности [c.317]

Материал, полученный одним из описанных выше методов, обычно контаминирован клеточными компонентами. Однако в тех случаях, когда высокая степень очистки не обязательна (например, для постановки RIA или ELISA), его можно использовать уже на этой стадии. Тем не менее для большинства исследований необходима дальнейшая очистка вируса с помощью зонально-скоростного или изопикнического центрифугирования в градиенте. При скоростном центрифугировании положение вируса в градиенте определяется его коэффициентом седиментации, а при изопикническом — плавучей плотностью. Для достижения максимальной степени очистки вирусных частиц от примесей изменение концентрации образующего градиент вещества должно быть плавным в то же время на промежуточных стадиях очистки нередко используют ступенчатые градиенты. В некоторых случаях принципы скоростного и изопикнического центрифугирования совмещаются примером может служить использование градиентов глицерина — тартрата калия [14]. В таких градиентах концентрация тартрата калия возрастает в направлении дна пробирки, достигая плотности, соответствующей плавучей плотности вируса концентрация глицерина, наоборот, максимальна на мениске, что препятствует продвижению медленно седиментирующего материала в направлении дна. Все типы градиентов обычно центрифугируют в бакет-роторах, но в случае изопикнических градиентов такие же или даже лучшие результаты можно получить в угловых или вертикальных роторах с помощью приспособлений для медленного разгона и остановки, обеспечивающих переориентацию градиента без перемешивания. При очистке конкретного вируса часто приходится проводить целую серию последовательных стадий центрифугирования в разных типах градиентов, чтобы добиться нужной степени очистки. [c.100]

Часто бывает желательно проводить зональную седиментацию на аналитической ультрацентрифуге с использованием ультрафиолетовой абсорбционной оптики. Этот метод предпочтителен в случае, когда имеется очень маленький образец, который нельзя метить радиоактивными изотопами и анализировать химическими или ферментативными методами. Чтобы избежать затруднений, связанных с получением градиента плотности в ячейках аналитической ультрацентрифуги, Джером Виноград разработал методику зонального центрифугирования без предварительной подготовки градиента. [c.317]

Метод зональной седиментации быстро становится популярным в аналитическом центрифугировании ДНК, однако для анализа белков он еще не получил распространения. [c.319]

Трение влияние формы 299 Молекулярная масса 300 Метод точного измерения коэффициента седиментации 301 Примеры использования скоростной седиментации 302 Зональное центрифугирование в предварительно подготовлен ном градиенте плотности 306 Определение коэффициента седиментации с помощью зонального центрифугирования в предварительно приготовленном градиенте плотности ЗП [c.578]

Пря улыпрацентрифугировании для разделения используется седиментация, зависящая от размера, плотности и формы молекулы белка. Центрифугирование в градиенте плотности (зональное центрифугирование) часто применяется для разделения белков, а также для разделения органелл и вирусов. Одной из характеристик белка служат данные седиментационного анализа в ультрацентрифуге (разд. 3.5.4). Положение возникающих белковых зон можно наблюдать с помощью оптических методов. [c.349]

Зональное разделение можно также проводить с помощью седиментации биополимеров в центробежном поле в ультрацентрифугах. Величиной, характеризующей подвижность частиц в центробежном поле, является константа седиментации 5, представляющая собой отношение скорости перемещения седиментиру-ющей частицы к величине центробежного ускорения ш г, где ш — угловая скорость вращения ротора ультрацентрифуги, г — расстояние частицы до оси ротора. Константа седиментации может быть экспериментально определена в специальных аналитических центрифугах, позволяющих фиксировать положение зоны, содержащей исследуемый биополимер, в произвольный момент времени непосредственно во вращающемся роторе и тем самым измерять скорость перемещения частиц. Константа седиментации выражается уравнением [c.242]

Для определения молекулярного веса ДНК (обзоры — см. наиболее широко используются методы, основанные на определении скорости седиментации макромолекул. Это определение может быть выполнено по различным методикам наиболее широкое распространение в последнее время приобрела методика, основанная на зональном центрифугировании в градиенте плотности сахарозы в препаративной ультрацентрифуге В данном случае распределение веществ по скорости осаждения можно контролировать по радиоактивной метке, что обеспечивает высокую чувствительность с другой стороны, методика практически без изменений может быть применена и для препаративного разделения нуклеиновых кислот. Предложен ряд эмпирических уравнений, связывающих скорость седиментации двухцепочечного комплекса ДНК со значением молекулярного веса определенным независимыми методами. Последнее из этих уравнений охватывает пределы мол. веса 0,2— 130 108. [c.30]

При описанном выше ультрацентрифугировании пики, наблюдаемые при помощи шлирен-системы, отвечают границам между раствором и растворителем. Первые, быстрые пики отвечают компонентам, движущимся в окружении более медленных компонентов (фиг. 8). В биохимических смесях некоторые из этих медленных компонентов (например, рибосомы при анализе бактериального экстракта) создают большую вязкость. Измеряемые коэффициенты седиментации могут при этом очень сильно отличаться от приведенного к стандартным условиям значения Поэтому полученные при помощи скоростной седиментации значения s не всегда можно непосредственно использовать при планировании и анализе данных препаративного зонального центрифугирования в градиентах плотности. При зональном ультрацентрифугировании анализируемая смесь наносится в виде слоя на раствор с увеличивающейся по направлению ко дну плотностью (что предотвращает конвекционное перемешивание) и различные компоненты седиментируют в градиенте плотности в виде отдельных зон. Для наслоения смеси можно использовать специальную аналитическую ячейку, в которой техника наслоения принципиально не отличается от обычного препаративного наслоения на градиент. Одна из таких ячеек (Be kman Instruments In .) приведена на фиг. 15. Преимущества применения такой ячейки, как отмечают Виноград и Брунер [11], состоят в том, что она требует меньше исследуемого материала, анализируемые компоненты в ней пространственно разобщены, медленные примеси отстают от быстрее движущихся зон и седиментацию последних можно осуществлять в любом растворителе, не прибегая к предварительному диализу. Растворитель должен быть более плотным по сравнению с [c.67]

Точно так же, как для оценки времени осаждения в ультрацентрифуге компонента с данным ко фициентом седиментации s используются параметры ST, Pi или k, можно предложить аналогичный параметр к для зонального центрифугирования в градиенте плотности. В табл. 7 (данные фирмы Be kman Instruments In .) приведены значения этого параметра для различных роторов, выпускаемых этой фирмой. С помощью фактора к можно определить время, необходимое для седиментации частиц с данным коэффициентом седиментации и данной плотностью в градиенте плотности от мениска до дна пробирки. В таблице приведены девять значений этого фактора для различных роторов и для частиц с плотностями от 1,1 до 1,9 г/мл, седиментирующих в линейном градиенте сахарозы (5—20% по массе) при 5°С. [c.198]

Зависимость константы седиментации от скорости вращения ротора. Уже при первых попытках использовать метод седиментации границы раздела ддя исследования образцов ДНК с молекулярным весом выше 30 ООО ООО были отмечены аномалии, связанные со скоростью вращения ротора [75, 76]. В настоящее время артефакты скорости достаточно подробно изучены данные самого последнего времени свидетельствуют в пользу того, что эти артефакты возникают в результате конвекции и обратимого образования межмолекуляриых агрегатов [44, 46]. На практике этих артефактов можно избежать, если работать при скорости вращения ротора ниже 15 ООО об мин и концентрациях ниже 20 мкг мл. Используя ЭТИ предосторожности, различные авторы получили хорошо совпадающие значения констант седиментации для самых высокомолекулярных из изученных ДНК, а именно для ДНК Т-четных фагов [26, 45, 46]. При использовании обоих методов зонального центрифугирования артефакты скорости отмечены не были. [c.224]

Если проводить опыт при 5° в присутствии высокой концентрации соли (например, 2,6 М Na l), то локальной денатурации удается избежать. Для того чтобы измерить молекулярный вес неизвестного образца ДНК, определяют для него критическую скорость перемешивания ири описанных выше условиях, используя различные постоянные скорости враш ения в течение одного и того же периода времени (например, 30 мин). Долю препарата, подвергшуюся разрушению, определяют методом хроматографии или зонального цептрифугировапия. За критическую скорость перемешивания принимают скорость, при которой разрушается 50% образца молекулярный вес неизвестного образца равен молекулярному весу стандартного образца, имеющего ту же критическую скорость. Таким способом было найдено, что молекулярный вес ДНК фага Т5 равен 84 ООО ООО, что соответствует данным седиментационного анализа. Ясно, что критическая скорость перемешивания не зависит ни от нуклеотидного состава, пи от степени глюкозилирования ДНК оказалось, что данным методом можпо уловить 5%-ное различие в массе образцов — чувствительность, сравнимая с чувствительностью метода определения скорости седиментации. [c.242]

Бурильон и сотрудники также показали, что -кислый гликопротеин может расщепляться протеолитическими ферментами. Изучая действие этих ферментов на препараты, выделенные из плевральной жидкости человека, эти авторы обнаружили, что трипсин наиболее активно расщепляет гликопротеин, а затем в порядке убывания активности идут пепсин, папаин и химотринсин [138]. Смесь, полученная в результате последовательного действия всех трех ферментов, разделялась при зональном электрофорезе на три компонента, а при хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе — на пять компонентов. При определении коэффициентов седиментации этих фракций были обнаружены очень небольшие различия. Найденные коэффициенты седиментации соответствовали молекулярным весам от 3000 до 3500, Содержание углеводных компонентов в них также было очень сходно, за исключением количества гексозамина. Все гликопептиды содержали одни и те же семь аминокислот (кроме валина), но их молярные соотношения сильно варьировали. На ]Ч-концах были обнаружены четыре различные аминокислоты [25]. [c.92]

Химия. Метод, использованный Сквайром и Ли [5] для очистки ГСИК овцы, состоял из фракционирования спиртом, сульфосалицилатом и сульфатом аммония, хроматографии на колонках со смолой амберлит IRG-50 и зонального электрофореза на крахмале. Было получено доказательство существования двух хроматографически различных фракций, обозначенных а- и fi-ГСИК. Одна из выделенных фракций, Р-ГСИК, была гомогенна по следующим критериям хроматографии на колонках со смолой амберлиг IR -50, зональному электрофорезу на крахмале и скорости седиментации в ультрацентрифуге. [c.236]

Для выделения различных мембранных структур из гомогената, имеющих разные величины коэффициента седиментации, применяют зональное центрифугирование в градиенте плотности определенных веществ. Исследуемый раствор наносят на предварительно приготовленный в центрифужной пробирке градиент плотности и центрифугируют. Градиент создается путем последовательного наслоения растворов градиентной среды уменьшающейся концентрации (плотности) в центрифужной пробирке. Субклеточные структуры разделяются на отдельные зоны в соответствии с их относительной плотностью. Для создания градиента плотности необходимо подбирать вещества в чистом состоянии, не взаимодействующие с компонентами суспензии и реагентами исследуемого раствора. Чаще всего для этого используют сахарозу, однако ее растворы с высокой концентарцией имеют большую вязкость, вследствие чего происходит дегидратация органелл или их лизис. Кроме того, серьезным недостатком этого метода является проницаемость многих органелл для сахарозы, что вызывает их осмотическое разрушение и изменение эффективной плотности. Поэтому в настоящее время для создания градиента плотности предпочитают применять другие среды фиколл, перколл и др. (табл. 16). [c.218]

Кольцевую ДНК другого рода впервые обнаружили у бактериофага X. При исследовании ДНК фага X на ультрацентрифуге оказалось, что она представлена набором компонентов с различными коэффициентами седиментации. Если вьщелить один из компонентов при помоши зонального центрифугирования и оставить его в покое на некоторое время, он медленно перейдет в равновесную смесь компонентов. Использование ферментов, а также исследования с помощью электронного микроскопа показали, что два наиболее медленно седиментирующие компонента, 21S- и 245-компоненты, представляют собой соответственно двухцепочечную линейную и двухцепочечную кольцевую формы молекулы. Более быстрые компоненты являются /i-мерами этих последних, например линейными или кольцевыми лвухцепочечными молекулами двойной длины. Чтобы объяснить способность ДНК фага X претерпевать все эти взаимные превращения, было высказано [c.383]

Из очищенных ядер РНП-частицы экстрагировали при 37 0,01 М Трис-H l (pH 8) с 0,1 М Na l и 1 мМ АТФ (АТФ способствует выходу частиц из ядра). Их собирали центрифугированием при 60 000 об/мик в течение 4 ч и предварительно очищали зонально-скоростным центрифугированием в градиенте сахарозы, собирая фракцию с константой седиментации около 40S. Эту фракцию переносили в полиалломерные пробирки ротора SW 41, фиксировали добавлением глутарового альдегида до 6% в течение 1 ч при 0°, а затем смешивали с концентрированным водным раствором s l с таким расчетом, чтобы исходная плотность при центрифугировании составляла 1,5 г/ м а объем смеси —5 мл. Остальной объем пробирки (8 мл) заполняли парафиновым маслом. Центрифугирование вели при 30 000 об/мии и 25 в течение 60 ч. Собирали 30 фракций. 40 S РНП-частицы выходили острым пиком в области р= 1,4 г/см . Аналогичным образом исследовали плавучую плотность рибосом, а по ней определяли содержание в них белка. Рибосомы фиксировали обработкой 6%-ным раствором формальдегида. [c.262]

В седиментационных экспериментах существует два типа начальных условий. В одном частицы равномерно распределены в растворе. При седиментации частицы движутся через раствор оставляя за собой зону чистого растворителя. Это носит название скоростной седиментации, в этом случае вся информация получа ется из параметров границы между растворителем и раствором Другой тип, зональная седиментация, отличается тем, что обра зсц наносится в виде слоя поверх более плотного растворителя В этом разделе будет обсуждаться только скоростная седимен тация. [c.283]

Принцип метода зонального центрифугирования показан на рис. 11-22. Небольшой объем раствора, содержащего молекулы, которые следует охарактеризовать, наносят в виде слоя на раствор предварительно приготовленного градиента концентрации, находящегося в центрифужной пробирке. Наносимый раствор всегда имеет плотность, меньшую, чем плотность верхнего слоя градиента (в противном случае он будет погружаться в градиент). Затем пробирку центрифугируют, при этом молекулы исходного слоя седиментируют через градиент. Если все молекулы ймеют одинаковый коэффициент седиментации, то они будут седиментировать в виде узкой зоны, как показано на рис. 11-23. Если же в образце присутствуют молекулы с различными коэффициентами седиментации, то в ходе седиментации они будут разделяться. Различные компоненты будут разрешаться в виде серии зон или полос, которые затем седиментируют только через растворитель отдельно одна от другой. После окончания центрифугирования содержимое пробирки фракционируют, чаще всего собирая фракции по каплям через отверстие в дне пробирки [c.308]

Пример 11-3. Измерение изменений величины мутантного фермента. Многие методы, применяемые для определения молекулярных масс ферментов, требуют образцов с высокой степенью очистки (например, метод седиментационного равновесия, который будет описан позже) или при использовании не очень чистых образцов дают массы субъединиц (например, ДСН-гель-электрофорез, гл. 9). Использование зональной седиментации позволяет определить молекулярную массу активного фермента непосредственно в неочищенном лизате при применении в качестве метода контроля анализа ферментативной активности. Например, ДНК-полимераза I Е. oli седиментирует при 5 = 5,4. Зоны полимери-зующей и 5 —З -экзонуклеазной активности, связанные с этим белком, седиментируют вместе, поэтому для локализации фермента в градиенте сахарозы можно использовать любую из них. Мутантная форма фермента не обладает полимеразной активностью, однако сохраняет 5 —З -экзонуклеазную. Как следует из рис. 11-26, мутантный фермент обладает значением s = 2,8. Поскольку данная мутация является терминирующей цепь белка, пониженное значение 5 указывает на то, что данный фермент является лишь небольшим фрагментом белка дикого типа и имеет только 0,4% активности. [c.314]

Зональная седиментация ДНК-полимеразы I Е. соИ, выделенной из дикого штамма (Л) и из штамма, синтезирующего только фрагмент фермента ( , в градиенте сахарозы 5--207о. [c.315]

Как отмечалось выше, при нанесении образца на более плотный раствор без предварительно созданного градиента граница будет разрушаться под действием конвективных токов. Виноград заметил, что если приготовить образец в растворе очень низкой плотности, то вследствие диффузии растворенного вещества, используемого для увеличения плотности более плотного раствора со временем, перепад плотности, генерируемый на поверхности раздела, будет медленно распространяться вдоль центрифужной пробирки, образуя пологий градиент. Под границей, образуемой распространяющимся градиентом, градиент отсутствует и имеет место конвекция. Однако в распространяющемся градиенте и над ним происходит стабилизация, предотвращающая конвекцию. Ясно, что в течение седиментации материала градиент будет двигаться перед ним, поэтому материал постоянно будет находиться в градиенте плотности, что дает возможность нормального хода седиментации. Кроме того, если растворенное вещество в более плотном растворе обладает особо высокой плотностью (для этого чаще всего используют s l), то соль будет также в незначительной степени седиментировать с образованием дополнительного стабилизирующего градиента. Этот метод известен под названием зональной седиментации в самогенерирующемся градиенте плотности. [c.317]

Зональное центрифугирование оказывается полезным при определении наличия очень маленьких количеств быстро седимен-тирующего вещества в образце В стандартном методе скоростной седиментации быстро осаждающийся компонент движется через седиментирующий медленно, при этом скорость его движения замедляется за счет эффекта Джонстона — Огстона это часто не позволяет его заметить. В зональной седиментации такие небольшие фракции седиментируют в области нулевой концентрации, поэтому их легко можно идентифицировать. [c.319]

Примеры использования зонального центрифугирования в препаративной ультрацентрифуге 313 Зональная седиментация в самогенерирующемся градиенте плотности 317 Седиментация ДНК при щелочных значениях pH 319 Определение молекулярной массы методом седиментации — диффузии 320 [c.578]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология