Синхронные культуры

За время клеточного цикла должны быть реплицированы не только ДНК и связанные с ней белки. Клетка должна между двумя последовательными делениями удвоить все свои компоненты, а значит, и свою массу. Не удивительно поэтому, что в отличие от ДНК подавляющее большинство клеточных белков и молекул РНК синтезируется в клетке на протяжении всей интерфазы. На рис. 11-30 показана типичная кривая, характеризующая в равной мере прирост массы, суммарного клеточного белка или суммарной РНК за время клеточного цикла. Поскольку биосинтетический потенциал клетки увеличивается по мере ее роста, скорость синтеза различных компонентов возрастает в период от Gl до Gj. Методом двумерного гель-электрофореза белков, синтезируемых в синхронных культурах клеток млекопитающих, было показано, что из более чем тысячи выявленных белков лишь очень немногие синтезируются в определенное время цикла (рис. 11-31). [c.169]

Рис. 37. Схема комбинированной химиотерапии в синхронной культуре, содержащей нормальные и трансформированные клетки. Нормальные клетки ЗТЗ и такие же клетки, трансформированные вирусом 5У40, могут быть разобщены по фазе митотического цикла с помощью веществ (кофеин и др.), которые блокируют развитие нормальных клеток в определенной фазе, после чего опухолевые клетки могут быть элиминированы токсическими агентами (оксимочевиной и т. п,) в последующей фазе интеркинеза.

Рис. 66. Кривая роста синхронной культуры

Синхронность культуры поддерживается в течение двух или трех циклов деления клеток в случае более длительного периода синхронность приходится устанавливать заново с помощью описанного выше метода. Проточное зональное центрифугирование в градиенте плотности позволяет получать большие количества инокулята для синхронизованного культивирования микроорганизмов. Оно представляется перспективным в обеспечении непрерывной синхронизации с помощью рассчитанной во времени инокуляции турбидиметрически регулируемой проточной культуры (турбидостат). На рис. 10.8 показана типичная кривая роста синхронизованной популяции бактерий видно, что после двух циклов кривая начинает выравниваться. [c.417]

Замечено, что клеточный цикл можно подразделить на несколько периодов. Так, для синхронной культуры Е. oli, растущей на минимальной среде с глюкозой (время генерации около 60 мин), можно выделить два основных периода С и D (рис. 3.10). [c.69]

Наряду с распределением микроорганизмов по возрастам исследователи большое внимание уделяют функциям распределения по размерам. Фактически индивидуальный возраст клетки не поддается непосредственному измерению (если не иметь дела с синхронной культурой), тогда как размеры клеток определяются достаточно точно. Существует несколько различных методик определения размеров клеток, простейшей из которых является измерение линейных размеров по микрофотографиям, снятым со специально" приготовленных мазков [15]. [c.90]

Помимо химических средств, гипотермии и гипоксии модификация радиорезистентности производилась с помощью фракционированного облучения в невысоких летальных дозах. На клетках асцитной карциномы было показано, что при увеличении времени между двукратным облучением одновременно с возрастанием радиорезистентности объектов общее содержание эндогенных тиолов увеличивается. Параллельное исследование радиорезистентности и уровня сульфгидрильных групп проводилось также на клетках, находящихся на разных стадиях роста и клеточного цикла. Так, Э. Я. Граевский (1969) привел сравнительные данные из работ по изучению изменения тиолов и радиорезистентности микроспор в процессе клеточного деления. Оказалось, что в процессе мейоза и митоза происходят однонаправленные изменения содержания тиолов в клетках и их устойчивости (устойчивость оценивалась по выходу хромосомных аберраций) к действию ионизирующей радиации. Динамика изменения уровня эндогенных сульфгидрильных групп в зависимости от изменения радиорезистентности прослежена также на синхронно делящейся икре морских ежей в различных стадиях клеточного цикла, на растущих клетках асцитной карциномы Эрлиха в процессе ее старения, на синхронной культуре клеток разных штаммов хлореллы в процессе клеточного деления, на клетках в различных фазах роста. Эти данные позволили авторам заключить, что изменения радиочувствительности в цикле связаны не только с изменением генетического аппарата в клетке, но и с варьированием содержания внутриклеточных тиолов, выполняющих функции эндогенных радиопротекторов. Эти представления получили дополнительное обоснование в работе Ю. В. Корогодиной и др. (1975). Так, на диплоидных дрожжах (штамм Мегри 139 В) было установлено, что клетки, находящиеся в логарифмической фазе роста, в отличие от стационарной фазы более радиорезистентны и содержат в полтора раза больше сульфгидрильных групп. Авторы считают, что именно высокий уровень тиолов почкующихся дрожжевых клеток может определять их повышенную радиорезистентность. [c.283]

Сопоставляя данные, полученные на синхронной культуре, и опыты с облучением, можно сделать вывод о том, что ионизирующая радиация, воздействуя на популяцию клеток в целом, переводит клетки в новое состояние, характеризующееся синхронностью обмена некоторых РНК, которое, возможно, предшествует синхронизации по стадиям митотического цикла. [c.194]

Для этого используют различные приемы получения синхронных культур [c.79]

Кривые роста, представленные в виде зависимости логарифма числа клеток от времени, иногда показывают необычно быстрое увеличение числа клеток сразу после лаг-фазы, вслед за чем скорость накопления клеток понижается. Это необычное значительное ускорение роста указывает на частичную или полную синхронизацию деления клеток в культуре. Не исключено, что такой синхронизованный рост обусловлен приспособлением культуры к новому питательному компоненту или прорастанием спор. Затем синхронность культуры быстро нару-щается, и через две генерации преобладает асинхронный рост. Однако разработаны специальные методы, с помощью которых можно синхронизировать деление кле [c.380]

Гые происходят в жизнениом цикле каждой клетки водоросли, а выявленная токсичность будет статистически верна лишь для части популяций клеток водорослей. Поэтому для исследования, безусловно, необходимо использовать синхронные культуры с одновозрастными особями, которые последовательно проходят различные фазы роста и развития от темновых Дн и Да до световых Лз, где Дн и Да — темновые рождающиеся активные клетки, Л],2,3—световые растущие и созревающие клетки. Последовательное развитие и рост клеток водорослей обусловлены воздействием на культуру света, температуры, минерального питания и другими факторами. Поэтому необходимо стаядартизи-ровать условия исходных культур, а также условия контроля и опыта, чтобы твердо быть уверенным в том, что изменения, происходящие в опыте, будут зависеть только от изучаемого фактора. Это в конечном счете даст возможность определить максимальное значение фактора токсичности и установить прямое его влияние на рост и развитие всей популяции клеток с учетом изменений, происходящих в цикле их жизни. [c.11]

Sp опытных пренаратов также 31гачительпо ни ке (в 2 раза) Sp контрольных и зеркальных препаратов. Это связано с токсическим действием колцемида, а также с тем, что митотические клетки имеют слабый контакт с подлои<кой и легко смываются при вращении в барабане (на этом явлении основан оди) из методов получения синхронной культуры). Так как ЦПЭ в зеркальной камере, по нашим данным, запаздывает на 10—12 ч, то митотические клетки еще дери атся па стекле и их в 2 раза больше, чем в колцемидной камере. [c.54]

Для ответа на этот вопрос проводились опыты с заражением синхронных культур клеток HeLa вирусом в различные моменты клеточного цикла [67, 68]. [c.62]

Что известно о синтезе отдельных белков, т. е. различных ферментов, компонентов мембран, гистонов, белков, рибосом и т. д. В одном из наиболее интересных исследований были использованы синхронные культуры дрожжей Sa haromy es erevisiae На про- [c.81]

Эти культуры синхроийзировапы в лаборатории с помощью специальной обрабо гки в течение ряда генераций их клетки делятся в одно и то же время и проходят абсолютно синхронно остальной цикл. Излюбленный метод получения синхронных культур — отбор из асинхронных культур нсех клеток определенного размера (самых мелких или самых крупных). Отобранные клетки — новую гомогенную популяцию — переносят на питательную среду. Они в течение нескольких генераций продолжают синхронно расти до тех пор, пока постепенно снова не становятся асинхронными. [c.81]

При изучении пролиферации используют, как правило, синхронные культуры микроорганизмов и изучают включение меченных радиоизотопами соединений (для мембранных белков — аминокислот, для мембранных липидов — глицерина, для мукопептида клеточной стенки — N-ацетилглюкозамина, диаминопимелино-вой кислоты или лизина и т.д.) путем равновесного (в течение длительного срока) или импульсного (кратковременного) введения этих соединений. [c.113]

А — авторадиограмма целой хромосомы Е. соИ, полученная при введении тритироваиного тимидина в синхронную культуру чувствительного к температуре, дефектного по инициации штамма, во время вступления в синхронный [c.150]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология