Фиксаторы, фиксации методы

ГОТОВКИ ткани, и препарирование доводится до конца. Результаты, полученные при использовании данной методики, в качестве примеров приведены на рис. 11.10. В недавно опубликованной работе [347] метод излома в замороженном состоянии с большим успехом был использован для изучения хроматина эритроцита цыпленка. Процедура заключается в быстром замораживании пропитанных глицерином образцов, которые разламываются в жидком азоте. После излома в замороженном состоянии клетки тканей оттаивают в фиксаторе. Фиксация происходит очень быстро, поскольку фиксатор быстро диффундирует в разломанные клетки, ив то же время имеется достаточно времени для выхода растворяющих составляющих, позволяя за счет этого глубоко заглянуть в клетку, как показано на рис. 11.11. Методы изломов в замороженном состоянии имеют много преимуществ по сравнению с изломом в сухом состоянии, не последним из которых является уменьшение количества остатков на поверхности образца, которые могут не только завуалировать поверхность, но и заряжаться под электронным пучком. [c.236]

ВЫХ пунктов, которые должны проверяться с помощью, напри-мер, спектрометрии в пламени на фиксирующих жидкостях до и после фиксации. Было проведено очень мало систематических исследований для изучения влияния препарирования образца на концентрацию элементов тканей. В работе [404] исследовались воздействия ряда разнообразных фиксаторов на концентрацию ионов мышцы лягушки и ткани крысы >[405]. Подобные исследования на коже человека были проведены в работе [406], основные результаты которой показаны на рис. 12.3. Эти исследования являются убедительной демонстрацией того, что все методы фиксации оказывают некоторое воздействие на исход- [c.276]

В токсикологической лаборатории Института гигиены труда и профзаболеваний АМН СССР для проведения анафазного метода учета хромосомных перестроек используют костный мозг бедренной кости (мелких лабораторных животных), которую извлекают тотчас после обезглавливания животного и помещают в фиксатор, состоящий из трех частей 96° этанола и одной части ледяной уксусной кислоты. После 4-часовой фиксации препарат перемещают сначала в 96° этанол (на [c.260]

Многие красители дают хороший результат лишь после применения специальных методов фиксации (при изучении фиксированных формальдегидом проб успешное применение красителей возможно только после тш,а-тельного отмывания исследуемого материала дистиллированной водой). Самый лучший фиксатор для цитологического исследования водорослей, в том числе изучения их ультраструктуры,— 1—2%-ный раствор оксида осмия (раствор не подлежит длительному хранению). Водоросли, не имеющие настоящих клеточных оболочек, хорошо и быстро фиксируются метанолом. Раствор Лю-голя (1 г иодида калия и 1 г кристаллического иода в 100 мл воды) не только хорошо фиксирует водоросли, но и одновременно окрашивает крахмал в синий цвет. [c.22]

Адекватная фиксация гликогена, соответствующая его прижизненной локализации, весьма затруднительна. При помощи рекомендуемых методов получить постоянные результаты на различном материале весьма затруднительно. Частично это объясняется наличием различных легкорастворимых разновидностей гликогена. При обычной гистологической фиксации в срезах сохраняются лишь большие молекулы высокомолекулярного гликогена, тогда как гликоген меньшей степени полимериЗ Щии легко вымывается. Поэтому желательно для каждого материала подбирать наилучший фиксатор путем предварительных проб. С тем чтобы снизить потери гликогена и избежать артефактов его смещения, при выборе фиксирующей смеси следует по возможности согласовать ее состав и температуру фиксации. [c.46]

Содержание К в содранных кусочках эпидермиса листа определяли методом электронного микрозонда. Для этого кусочки эпидермиса быстро замораживали в жидком азоте и высушивали в замороженном состоянии. Этим методом пользовались вместо химической фиксации, потому что в большинстве химических фиксаторов калий растворим. Прибор создает электронный пучок высокой энергии, который, будучи сфокусирован иа ткань, возбуждает в ней рентгеновское излучение. Белые пятна иа нижних микрофотографиях В и Г) соответствуют рентгеновскому излучению атомов К белые участки иа верхних микрофотографиях, обусловленные обратным рассеянием электронов, выявляют морфологию ткани. Обратите внимание, что ионы К" ", сосредоточенные в прилегающих (околоустьнчиых) клетках, когда устьица закрыты, при открывании устьица переходят в замыкающие клетки. [c.188]

Общим методом подготовки ткани для электронной микроскопии является ее фиксация 2,5%-ным раствором тлутарового альдегида в 0,1 М фосфатном буфере, pH 7,4, в течение 1 ч при комнатной температуре. В некоторых случаях, например у голубей, первичную фиксацию осуществляют путем перфузии фиксатором всего животного. В других случаях, например у пчел, ткань выделяют препарированием и фиксируют погружением в среду. После первичной фиксации ткань извлекают из организма, промывают в буфере в течение 30 мин, а затем дополнительно фиксируют в 1%-ном растворе четырехоксида осмия в фосфатном буфере в течение 1 ч. При аналитической электронной микроскопии обработку осмием не производят. Ткань обезвоживают проволкой через ацетон и заключают в пластмассу Ро1уЬес1 (Ро1у8с1епсе8) или эпон 812. Эпон более предпочтителен для аналитической микроскопии, но он малодоступен в настоящее время. Для обычной микроскопии пригодны любые пластмассы, имеющиеся в продаже. [c.250]

Предшествующий опыт свидетельствует о том, что метод замещения в замороженном состоянии обеспечивает стабилизацию структуры тканей, особенно в сочетании с подходящей фиксацией. Очень, хорошими фиксаторами оказались четырехокись осмия и хлорид ртути (табл. 2). Метод замещения в замороженном состоянии, обеспечивающий прекрасную сохранность гликогена (табл. 2), можно рекомендовать также для выявления углеводов, белков и нуклеиновых кислот. Сульфгидрильные группы, связанные с белкам лучше всего выявляются после фиксации в 2,5%-ной трихлоруксусной кислоте в 95%-ном этаноле. Этот метод дает также хорошие результаты при выявлении неорганических веществ и ферментов. Весьма успешной оказалась фиксация при низкой температуре, которую можно проводить сразу же вслед за замоцшием [c.24]

Наиболее часто для изготовления давленых препаратов используют фиксаторы Кариуа (6 3 1), Ньюкомера (6 3 1 1 1), Баталья (5 5 1 1), уксусный алкоголь (3 1), ледяную уксусную кислоту и др. Когда трудно считать хромосомы или они длинные, применяют специальные методы предобработки, о которых было сказано выше (см. с. 60). Так, для кариологического анализа корни скерды зеленой перед фиксацией обрабатывают [c.97]

Фиксируют молодые листочки в фазе наиболее сильного роста. В качестве фиксатора используют уксусный алкоголь. Промывают и сохраняют материал в 70%-м растворе спирта. Для окрашивания листочки помещают в краситель (ацетокармин, ацетоорсеин или ацетолакмоид) и доводят до кипения несколько раз. Затем их переносят в 45%-й раствор уксусной кислоты на предметное стекло. От листочка отделяют основание, так как здесь чаще встречаются митозы, а остальную часть удаляют. Основание листочка разрезают на стекле, накрывают объект покровным стеклом и постукивают спичкой сверху. Метод используют в работе со злаками и картофелем. Можно обрабатывать листочка перед фиксацией 0,2%-м раствором колхицина в течение 1—2 ч. [c.103]

Ацетокарминовый метод. Фиксируют соцветия со зрелой пыльцой в фиксаторе Карнуа. Продоллсительность фиксации колеблется от 30 мии до нескольких часов. Материал промывают ихранят Б 80%-м растворе этилового спирта. После хранения пыльник выкладывают на предметное стекло и раздавливают Б капле ацетокармина. Убрав лишние ткани, препарат накрывают покровным стеклом и осторожно подогревают на спиртовке. [c.208]

Проводка материала для заливки в аралдит. Фиксирование исследуемого материала необходимо для того, чтобы свести к минимуму структурные изменения,, которые могут произойти на всех стадиях приготовления препарата. Наиболее широко распространенными фиксаторами в электронной микроскопии являются альдегиды и тетраокись осмия, действие-которых сводится к образованию поперечных связей между молекулами ткани и образованию в ткани прочной сети. Чаще всего применяется двойная фиксация, состоящая из первичной фиксации в глутар альдегиде и последующей фиксации в тетраокиси ОСМИЯ. Этот метод сочетает в себе преимущества обоих фиксаторов, поскольку альдегиды эффективнее связывают белки, а тетраокись осмия — липиды. [c.227]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология