Нозерн-блоттинг

Метод также можно применять и для РНК. Для переноса РНК с агарозы в среду, пригодную для проведения гибридизации, его необходимо несколько видоизменить. Такой метод известен под названием Нозерн-блоттинга . [c.243]

Нозерн-блоттинг. Метод переноса РНК из агарозного геля на нитроцеллюлозный фильтр, на котором положение определенной молекулы РНК выявляют с помощью гибридизации с радиоактивным зондом. Обратная транскрипция. РНК-зависимый синтез ДНК, катализируемый обратной транскриптазой. Палиндром. Участок двухцепочечной ДНК, в которой последовательность одной из цепей идентична последовательности другой цепи, прочитанной в обратном направлении. [c.51]

Перенос ДНК из геля на фильтр носит название Саузерн-блоттинга в честь Эдвина Саузерна, который изобрел этот метод. Использующиеся в литературе термины Нозерн-блоттинг и Вестерн-блоттинг относятся к переносу РНК и белков соответственно. Эти названия - в переводе северный и западный -не имеют никакого отношения к сторонам света и были придуманы остроумными коллегами Саузерна (Southern - южный). Тем самым они как бы напутствовали Саузерна на разработку новых методов переноса макромолекул, а также четко обозначили, о переносе каких макромолекул идет речь. Кроме того, все увидели, что шутить умеют не только физики, но и биологи. [c.65]

Для визуализации специфического фрагмента ДНК или РНК среди тысяч других примесных молекул используется комбинация целого ряда экспериментальных приемов, которые в совокупности получили название блоттинг . На рис. 36.5 показаны схемы проведения Саузерн-блоттинга (для визуализации фрагментов ДНК), Нозерн-блоттинга (для РНК) и ] стерн-блоттинга (для белков). Первая процедура названа по имени автора методики, остальные возникли как лабораторный жаргон, но со вре- [c.43]

Использование основных приемов работы с рекомбинантной ДНК и методик анализа белков и нуклеиновых кислот позволяет клонировать гены и изучать их организацию (блоттинг-гибридизация по Саузерну), строение мРНК (нозерн-блоттинг),. а также следить за уровнем экспрессии генов в различных условиях окружающей среды и даже в процессе развития. Например, в некоторых случаях уровни транскрипции гена определяют методом дот-блот-гибридизации выделенной РНК (разд., 6.3). Более подробные качественные исследования транскрипционной активности осуществляют с помощью нозерн-блоттинга (приложение 6 [I]). 5 - и З -концы транскриптов определяют, используя Sl-картирование [2, 56]. Однако такие методы анализа позволяют установить только строение транскрибируемой области или гена, а также механизмы процессинга транскриптов и их трансляции. Функцию любых участков вне транскрибируемой последовательности в некоторой степени можно изучать, сравнивая гены, обладающие сходными механизмами регуляции. При этом большинство предположений о воздействии на экспрессию гена остаются исключительно в области догадок. В этом случае генетическая трансформация предоставляет исследователю, работающему с растениями, уникальную-возможность непосредственно отвечать на фундаментальные вопросы, касающиеся регуляторной функции последовательностей, расположенных как в непосредственной близости, так и на некотором расстоянии от 5 - и З -концов транскрибируемого-гена. Используя разнообразные методы мутагенеза in vitro и технологию рекомбинантных ДНК, удается, модифгщировать клонированные гены и затем после введения мутантного гена-путем генетической трансформации обратно в растения анализировать влияние изменения этого гена на его экспрессию.. Подобные методики способствовали изучению нуклеотидных [c.307]

Анализ экспрессии генов методом точечного нозерн-блоттинга [c.324]

Нозерн-блоттинг точечный 324, 328—331 [c.400]

Нозерн-блоттинг (Nothem blotting) Перенос молекул РНК, подвергнутых элктроферезу, с геля на твердую подложку (нитроцеллюлозный или найлоновый фильтр) с последующей ДНК—РНК-гибридизацией. [c.554]

Что происходит с удаленными интронными участками Эксперименты по гибридизации с популяцией ядерных РНК свидетельствуют о том, что концентрация овальбуминовых интронных последовательностей примерно в 10 раз ниже, чем концентрация последовательностей экзонов. Возможно, это означает, что удаленные из молекул интроны довольно быстро разрушаются, а предшественники, идентифицируемые при Нозерн-блоттинге или при электронно-микроскопическом анализе, представляют собой популяцию более стабильных ядерных молекул. Все промежуточные продукты, которые подвергаются более быстрому процессингу, будут присутствовать в относительно небольших количествах, так что обнаруживаемые предшественники-это промежуточные продукты, процессинг которых происходит медленно и которые поэтому присутствуют в более высоких концентрациях. [c.324]

Для анализа РНК. кодирующих альбумин, с помощью ДНК-зонда используется метод Нозерн-блоттинга. На первом этапе с помощью гель-электрофореза, фракционируют интактные молекулы РНК дефектных и контрольных клеток печени и пол чают набор полос. Для гого чтобы молекулы РНК, содержащиеся в геле, сделать более доступными ДНК-зонду, осуществляют перенос (блоттинг) фракционированных молекул РНК из геля на лист нитроцеллюлозы. На следующем этапе лист нитроцеллюлозы инкубируют с раствором, содержащим меченый ДНК-зонд. Полосы РНК, гибридизующиеся с зондом, выявляют методом радиоавтографии (рис. 4-72). Известно, что скорость движения молекул нуклеиновых кислот в геле зависит от их размера при электрофорезе малые молекулы перемещаются быстрее, чем большие. Сравнивая [c.239]

Обычно для изучения транскрипции перенесенных генов выделяют РНК, и содержание в препаратах специфических транскриптов определяют путем гибридизации с соответствующими меченными пробами (клонированными кДНК или ядерными генами) методом дот-блоттинг-гибридизации (разд. 6.3). Метод нозерн-блоттинга (приложение 6[1]) можно использовать для получения более подробной информации о размерах определенного транскрипта. [c.238]

Для анализа препаратов ро1у(А)+-мРНК методом нозерн-блоттинга достаточно промыть колонку 10 мл буфера для наиесения (см. приложение 6[1]). В случае синтеза кДНК это следует делать тщательнее, используя до 100 мл буфера для нанесения. [c.273]

Точечный нозерн-блоттинг (dot blotting) очень удобен для количественного определения равновесной (постоянной) кон- [c.324]

В следующем разделе описано использование нозерн-блоттинга для изучения равновесной концентрации транскриптов семейства генов ab в горохе после различной световой обработки. Нозерн-блоттинг можно использовать для количественного определения РНК, если есть основания полагать, что существует ряд гомологичных транскриптов, или же при необходимости определить размеры транскрипта. Общая методика представлена в приложении 6 [I]. Следует отметить, что но- [c.325]

В приведенном ниже эксперименте изучали регулируемую фитохромом транскрипцию собственных генов ab у этиолированного растения гороха. РНК из гороха, выращенного в разных режимах освещения, выделяли, как описано в разд. 4.7. Цель эксперимента — определение в каждом образце уровня транскрипции мРНК с генов ab методом количественного точечного нозерн-блоттинга. В качестве пробы для гибридизации использовали клоны кДНК гена ab. [c.328]

Рис. 6.7. Контроль транскрипции гена ab под действием фитохрома в этиолированных проростках гороха. Точечный нозерн-блоттинг тотальной мРНК, выделенной из растущих на свету растений и этиолированных проростков гороха через 16 ч после различных световых обработок. А —0,1 мкг мРНК Б —

Для нозерн-блоттинга пригодны и найлоновые фильтры, например Hybond-N. [c.385]

При селективном исследовании с использованием первичных антител против богатой лизином области дегидринов библиотеки кДНК, созданной из закаленных тканей коры персика, было обнаружено, что некоторые клоны обладают высокой степенью сходства с дегидринами. Нозерн-блоттинг с использованием клона 5А показал, что 1,8 кЬ участок экспрессировался сезонно и в листопадных, и в вечнозеленых генотипах, а таьсже индуцировался водным дефицитом. Вечнозеленые и листопадные [c.31]

Блоттинг. Почти во всех случаях, подобных описанным выще, ДНК перед гибридизацией переносят с геля на более подходящую подложку. Этот метод (блоггшг) широко используется, например, для идентификации специфических РНК и белков после их электрофоретического разделения (см. разд. 7.7 и 6.4 соответственно). Блоттинг ДНК назван по имени его изобретателя блоттингом по Саузерну (или саузерн-блоттингом) соответствующие методики для РНК и белков получили название нозерн-блоттинга и вестерн-блоттинга. [c.278]

Гены (1987) -- [ c.243 , c.324 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.239 ]

Биохимия человека Т.2 (1993) -- [ c.43 , c.51 ]

Биохимия человека Том 2 (1993) -- [ c.43 , c.51 ]

Гены и геномы Т 2 (1998) -- [ c.278 ]

Молекулярная биология клетки Сборник задач (1994) -- [ c.183 , c.272 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.239 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология