Гибридизация матричная

Обычная анионообменная хроматография оказалась непригодной для очистки РНК, содержащих более 100—150 нуклеотидных остатков. Поэтому рибосомальные и матричные РНК обычно разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном или агарозном геле. К достоинствам этого метода относится высокая скорость процесса и высокая разрешающая способность по отношению к одноцепочечным молекулам, различающимся по своим размерам. Аффинная хроматография основана на том, что высокая степень специфичности может быть достигнута за счет гибридизации или химических взаимодействий между молекулами РНК, находящимися в растворе, и соответствующими соединениями, ковалентно связанными с твердым носителем. [c.176]

Молекулярная гибридизация. Рассмотрим следующее доказательство (рис. 13-12). Молекула ДНК состоит из двух цепей, которые удерживаются друг около друга слабыми связями, возникающими между парами оснований. Эти связи могут быть разрушены и две цепи разделены, если молекулы ДНК нагреть в растворе, а затем сильно встряхивать. При медленном охлаждении раствора цепи в конце концов соединяются с комплементарными и ДНК ренатурирует. Теперь предположим, что мы смешали молекулы двухцепочечной ДНК с молекулами РНК, которые с них транскрибировались. Напомним, что последовательность оснований этих РНК идентична последовательности одной из цепей матричной ДНК и комплементарна другой. Если нагреть смесь. [c.248]

В связи с гибридизацией зон отметим еще одно обстоятельство. Как следует из вида БФ (2.16), все матричные элементы определителя (2.18) представляют собой функции к. Поэтому возможны значения к, прп которых недиагональные элементы обращаются в нуль. В таких точках первой зоны разделение на чисто атомные полосы имеет место и в строгом смысле слова. [c.59]

При гибридизации РНК с денатурированной ДНК образуется гибрид РНК—ДНК, в состав которого входит матричная цепь. Другая цепь ДНК остается неспаренной. Обработка нуклеазой 81, специфически рас- [c.140]

После отмывки фильтров от несвязавшегося радиоактивного зонда их высушивают и анализируют с помощью авторадиографии с использованием чувствительной к радиоактивному излучению рентгеновской пленки. Образование специфических гибридов обнаруживают после проявления рентгеновской пленки по появлению на ней четких гибридизационных сигналов в виде темных пятен, положение которых точно соответствует таковому определенных колоний или бляшек на исходной чашке Петри. В результате проведения исследования идентифицируются бактериальные колонии или фаговые бляшки, содержащие искомые рекомбинантные ДНК. С этого момента с помощью обычных микробиологических и биохимических методов можно получать неограниченное количество идентичных копий клонированной последовательности нуклеотидов ДНК для дальнейших исследований. В ряде случаев, когда нет необходимости в скрининге большого числа клонов, гибридизацию с зондами можно заменить ПЦР. При таком подходе в качестве источника матричной ДНК используют суспензию бактериальных клеток или фаговых частиц отдельных клонов без специальной очистки матричных нуклеиновых кислот. [c.163]

Одним из типов двойных спиралей, которые получают искусственным путем, является гибрид ДНК—РНК. Оказалось, что молекулы информационной (матричной) РНК (мРНК) гибридизуются только с одной из двух разделившихся цепей ДНК, несущей участки, комплементарные мРНК. Метод гибридизации используется также для получения гетеродуплексов ДНК, в которых две цепи молекулы происходят от двух разных генетических линий одного и того же вида организмов. Известно, что некоторые мутации состоят в делеции (выпадении) или вставке одного или нескольких оснований в цепь ДНК. Гетеродуплексы, в которых одна из цепей нативная, а другая — со вставкой или делеци-ей, имеют по всей своей длине нормальную структуру по Уотсону—Крику, за исключением тех участков, где делеции или вставки нарушают комплементарность и образуются одноцепочечные петли (рис. 15-24). [c.143]

Введение условий (1.91) и (1.94) приводит к нарушению инвариантности приближения не только по отношению к преобразованиям локальных систем координат, но и к гибридизации АО. Для сохранения такой инвариантности приходится использовать при вычислении матричных элементов усредненные значения всех кулоновских одно- и двухцентрозых интегралов, зависящие только от природы атомов, к которым они относятся, но уже не от конкретного характера АО, входящих в интегралы [c.32]

Гибридизация ДНК - ДНК и ДНК - РНК. Если дуплексы ДНК, выделенные из клеток человека и мыши, денатурировать нагреванием по отдельности, а затем смешать и выдержать в течение многих часов при температуре ниже температуры плавления, то большая часть цепей мышиной ДНК отжигается с комплементарными цепями мышиной ДНК с образованием исходного дуплекса. Аналогичным образом большинство цепей ДНК человека воссоединяется с комплементарными цепями ДНК человека. Наряду с этим некоторое число одиночных цепей ДНК мыши будет связываться с одиночными цепями ДНК человека, в результате чего появляются гибридные дуплексы, в которых отдельные участки цепей ДНК мыши образуют двухцепочечные области с участками цепей ДНК человека (при наличии комплементарных пар оснований). Гибридные дуплексы возникают только при условии, что между ДНК двух разных видов существует комплементарное сходство в нуклеотидных последовательностях. Чем ближе родство двух видов, тем в большей степени их ДНК будут образовывать гибриды. Например, ДНК человека гораздо лучше образует гибриды с ДНК мыши, чем с ДНК дрожжей. При наличии комплементарных пар оснований возможно образование гибридных дуплексов ДНК — РНК. Например, в ходе транскрипции новосинтезируемая цепь РНК временно образует короткие отрезки гибридной двойной спирали ДНК — РНК (за счет спаривания ее оснований с основаниями матричной цепй ДНК). Гибридизационные тесты используют в биохимической генетике для определения того, насколько близки два вида для установления связи данной ДНК с какой-либо РНК для выделения и очистки генов и РНК и определения их нуклеотидных последовательностей. [c.300]

В уравнение (1.30) входят два кулоновских интеграла 2, и а2р, отвечающих энергиям 2s- и 2р-орбиталей в изолированных атомах Li, и три резонансных интеграла P2i,2s> f>2p,2p и 2s,2p- Интегралы P2s,2i и 2р,2р фигурирующие также в уравнениях (1.26) и (1.27), характеризуют силу а-взаимодействия между соседними в цепочке Ы(л,) 2s—2з)- и (2/)j.—2р .)-орбиталями. Интеграл 2 ,2 отвечает за степень гибридизации 2s- и 2 >-состояний. Нетрудно убедиться в том, что при P2j,2/) = О рсшением детерминанта (1.30) становятся известные нам функции (1.26) и (1.27), являющиеся дисперсионными кривыми для невзаимодействующих 2s- и 2 -состо-яний. Однако в общем случае при P2s,2p О решением (1.30) будут законы дисперсии elp ka) и е р ка), отвечающие связывающей и разрыхляющей лр-гибридным зонам. Поскольку все матричные элементы детерминанта (1.30) представляют собой функции аргумента ка, возможны такие значения волнового вектора, при которых недиагональные элементы 2s,ip обращаются в нуль. В таких точках зоны Бриллюэна электронные уровни кристалла действительно могут быть отождествлены с чистыми s- и / -атомными состояниями. Например, в рассматриваемой нами цепочке Ы(л,) существуют две такие особые точки Г (А = 0) и Z ка = п/а), в которых блоховские функции (1.28) и (1.29) представляют собой независимые комбинации атомных 25- и 2р .-орбиталей в точке Г ка = 0) [c.26]

Зонды и генные библиотеки. Главное условие такого анализа - наличие подходящего геноспецифического радиоактивного ДНК-зонда, который можно использовать для гибридизации (табл. 2.13). В тех случаях, когда имеется в распоряжении матричная РНК, например для р-глобина, специфический зонд можно получить при помощи фермента обратной транскриптазы. Этот фермент катализирует считывание нуклеотидной последовательности мРНК в комплементарную последовательность ДНК, [c.126]

Фильтр осторожно снимите с агара, чашку закройте и поставьте в термостат на 37 С. Через 1-2 суток матричную чашку достаньте из термостата, згшотайте парафильмом и храните в холодильнике до получения результатов гибридизации. [c.33]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология