Сыворотки поликлональные

ИС - неочищенная сыворотка крови МАТ - моноклональные антитела ПАТ - поликлональные антитела [c.301]

Для получения поликлональных антисывороток, используемых в повседневных иммунологических методах исследования, особенно в реакциях преципитации, применяют более крупных животных, в частности лабораторных кроликов. Кроликов можно содержать в клетках, они хорошо размножаются в неволе, выносливы и долго живут. Уход, иммунизация и взятие Крови у этих животных не представляют труда. Полученные от кроликов антисыворотки обладают хорошими преципитиру-ющими свойствами и стабильны при хранении, иммуноглобулиновая фракция легко поддается очистке. Кроме того, такие антисыворотки, обладая высокой авидностью/аффинностью пригодны для использования в чувствительных иммунологических тестах. В течение нескольких месяцев в период максимального ответа можно получить не менее 100 мл антисыворотки и еще 150 мл при аутопсии. Аутбредные кролики отвечают на иммуноген по-разному, поэтому следует использовать для иммунизации несколько животных, протитровать их сыворотки по отдельности, затем смешать отобранные пробы, если требуется максимальное разнообразие антител. Кролики достаточно хорошо отвечают на широкий спектр ммуногенов в сочетании с адъювантом Фрейнда образованием IgG. [c.41]

Для скрининга можно использовать моноклональные антитела или поликлональную сыворотку. [c.188]

Принципиально важным является то, что поликлональные антитела даже против одной-единственной антигенной детерминанты гетерогенны как по структуре активного центра, так и по физикохимическим свойствам. В том случае, если антиген поливалентен, например белок, то в сыворотке крови образуются антитела, направленные против каждой индивидуальной детерминанты (эпитопа), что еще более усложняет состав антител. Состав антител зависит от вида животного, а также стадии иммунного процесса. [c.11]

Используя специфические связывающие свойства антител, исследователь может выбирать между двумя различными формами реагента, приготовленного на их основе это обычные поликлональные антисыворотки (или иммуноглобулиновые фракции, полученные из сыворотки) и моноклональные антитела (МКА). Препараты и тех, и других получают различными путями с различной целью выбор между ними осуществляется зачастую не произвольно, а в большой степени зависит от соответствия специфических свойств антител требованиям теста. [c.21]

Эпитопная библиотека позволяет идентифицировать лиганды для антител в сложной поликлональной сыворотке. Поэтому аффинный отбор слитых фагов при использовании сывороток крови пациентов, инфицированных вирусами, бактериями или паразитами, дает возможность идентифицировать пептиды, пригодные для использования в тест-системах для диагностики соответствующих патогенов. [c.199]

В сыворотке иммунизированных животных всегда накапливаются продукты, секретируемые многими клонами В-лимфоцитов. Сывороточные антитела при любых схемах иммунизации представляют собой смесь молекул антител, гетерогенных по специфичности, аффинности и классовой принадлежности, вследствие чего имеется неизбежная перекрестная реактивность иммунных сывороток с разными антигенами. Перекрестная реактивность делает трудным или невозможным идентификацию уникальных антигенов. Моноклональные антитела, в отличие от поликлональных, являются продуктами потомков всего лишь одной В-клетки, и поэтому препараты моноклональных антител имеют особые свойства, вытекающие из небывалой степени биохимической гомогенности моноклональные антитела высокоспецифичны. Они направлены против одной и той же антигенной детерминанты моноклональные антитела стабильны как эталоны в отношении специфичности и аффинности (прочности связи с антигеном). Исследователь может целенаправленно подобрать моноклон, вырабатывающий антитела только нужного сорта , т. е. класса, подкласса, специфичности, аффинитета. [c.309]

Сыворотка с единственным эпитопом специфичности представляет моноклональную систему. На соответствующем графике Скэтчарда наблкщается прямая линия (рис. 7.9-2,о). Для поликлональной системы график Скэтчарда имеет более сложный вид. Он характеризуется набором многих прямых линий (рис. 7.9-2,б). [c.567]

Основной принцип ELISA — специфическое связывание первого антитела с мишенью. Если молекула-мишень представляет собой белок, то его очищенный препарат обычно используют для получения антител, при помощи которых затем и выявляют данную мишень. Антитела, которые образуются в сыворотке (антисыворотке) крови иммунизированного животного (обычно кролика), связываются с разными антигенными детерминантами (эпитопами) моле-кулы-мишени. Такую смесь антител называют поликлональным препаратом. Использование поликлональных антител имеет два недостатка, существенных для некоторых методов диагностики 1) содержание отдельных антител в поликлональном препарате может варьировать от одной партии к другой 2) поликлональные антитела нельзя применять, если необходимо различить две сходные мишени, т. е. когда патогенная (мишень) и непатогенная (не-мишень) формы различаются единственной детерминантой. Однако эти проблемы вполне разрешимы, поскольку сейчас научились получать препараты антител, выработанных к одной антигенной детерминанте, т. е. препараты моноклональных антител. [c.184]

Рис. 84. Пример иммуноэлектрофоретического титрования серийные разведения нормальной сыворотки человека и поликлональной сыворотки, взятой у больных гиперглобулинемией. [С любезного разрешения д-ра J. Jako (Будапешт).]

Специфические эффекты, обусловленные наличием RF или lq в пробах сыворотки [11] или антиидиотипических антител в поликлональных антисыворотках, можно устранить различными приемами. Соответствующие примеры представлены на рис. 16.4 и 16.5. Схема последовательного устранения различных эффектов в случае пробы неопределенного состава при определении ферритина представлена на рис. 16.4. Известен ряд операций, позволяющих упростить методики (например, операция добавления к пробе одного или двух реагентов). Во многих случаях, например при определении тироксина (Т ), триио иронина (Т3), поверхностного антигена гепатита В, иммуноглобулина Е (IgE) и гонадотропина человека (h G), предварительная обработка пробы пепсином устраняет побочные э екты сыворотки, не разрушая определяемое вещество или превращая его в соединения, сохраняющие иммунологическую активность. На рис. 16.5 в качестве примера представлена схема определения тиротропина (TSH), в которой для устранения влияния белков сыворотки на результаты анализа применен этот подход. [c.227]

Могут быть использованы животные в возрасте 3—4 мес любого пола. Используемая схема иммунизации зависит от природы иммуногена в такой же степени, как и при получении поликлональной антисы воротки. Важно установить, что у Мышей, клетки которых предполагается ис пользовать в экспериментах по слиянию, в ответ на введение данного иммуногена образуются антитела. Забор крови для контрольного исследования производят из хвостовой вены спустя неделю после заключительной иммунизации. Если в сыворотке обнаруживают антитела в адекватном титре, то за 3—4 дня до извлечения селезенки для слияния клеток производят последнее введение иммуногена. Иногда трудно интерпретировать результаты тестирования крови, поскольку сыворотка содержит сло жную смесь антител. Неоднозначно, что все данные антитела были образованы секретирующими клетками селезенки, а также, что именно эти антиген-реактивные клетки будут преимущественно синтезировать 1 в ходе иммунного ответа [c.121]

Колонки с иммобилизованными поликлональными антителами, выделенными из сыворотки продуцентов, иммунизированных частично очищенным антигеном, все же оказывались полезными в ряде случаев. С помощью таких колонок удалось увеличить степень очистки некоторых вирусных ферментов [4] и интерферона человека [5], они использовались для первичной очистки антигенов клеточной поверхности Thy-1 и HLA. Тимо-цитарный антиген Thy-1 был аффинно очищен на колонке с антителами к полуочищенному мозговому Thy-1 [6], а нативная димерная форма HLA была выделена с помощью иммобилизованных антител к 2-2-микроглобулину, который представляет собой легкую цепь этого димера и может быть в свою очередь получен из мочи при патологии почек [7]. [c.164]

Присутствие внутриядерного Т-антигена можно легко выявить иммунофлуоресцентным окрашиванием. С помощью этого метода можно, в частности, определить долю инфицированных клеток в культуре, которая отражает титр вирусной заготовки. Данный метод можно использовать и в экспериментах по трансфекции, в которых переносу подвергается участок ДНК, содержащий ранние гены вируса, присоединенные к чужим или мутантным промоторам. В этих случаях экспрессия Т-антигена показывает эффективность функционирования встроенных промоторов. Фиксированные клетки обрабатывают вирусоспецифической противоопухолевой сывороткой. Сыворотку получают от хомяков, крыс или мышей, у которых развились опухоли в результате инъекции вируса или синген-ных трансформированных клеток. Вместо противоопухолевых поликлональных сывороток можно использовать моноклональ- [c.241]

Клетки осторожно промывают PBS, а затем в каждую лунку добавляют по 10 мкл антивирусных антител, разведенных в PBS до нужной концентрации. В работе можно использовать мышиные моноклональные антитела [15] или поликлональные антитела к очищенным вирусным компонентам, например гексонам. В последнем случае необходима предварительная адсорбция сыворотки клетками HeLa (см. ниже). [c.268]

Для реализации потенциальных преимуществ системы анализа с использованием меченых антител необходимо работать в условиях избытка связывающих реагентов. В связи с этим поликлональные антисыворотки, доступные в ограниченном количестве, представляют собой далеко не идеальные компоненты иммунометрической системы анализа. Для выделения из поликлональной сыворотки антител, строго специфичных к определенному участку структуры, как правило, необходим достаточна громоздкий процесс очистки, причем очистка может влиять на активность антител и приводить к значительным потерям материала. [c.388]

Нарушения иммунных функций под влиянием ВИЧ состоят в истощении субпопуляции Т-клеток С04+ и угнетении их реакций на антигены, митогены, аллоантигены и антитела анти-СОЗ с параллельным снижением продукции ИЛ-2 и другими изменениями продукции цитокинов. В результате этих нарушений утрачиваются способность цитотоксических Т-клеток к ВИЧ-специфичному ответу и некоторые антигенпрезентирующие клеточные функции. При этом возрастает число активированных и ареак-тивных Т-клеток С08 , повышается содержание р2-микроглобулина и неоптерина в сыворотке, происходит поликлональная В-клеточная акти- [c.411]

Иммунологические методы. Эти методы применяют для выявления определенных клонов с рекДНК, если клонируемые гены экспрессируются. Напомним, что молекулы белков имеют по несколько антигенных детерминант (эпитопов), на каждый из которых в организме животных вырабатывается свое антитело (специфический иммуноглобулин). Сыворотки, получаемые стандартными методами, поликлональны, т. е. содержат антитела ко многим эпитопам данного белка. Возможно получение и моноклональных антител, если использовать гибридомы (см. рис. 5.8). Хотя моноклональные антитела при скрининге дают небольшой фон ошибочных положительных ответов, используют обычно поликлональные антитела. Это связано с тем, что детектируемым белок может иметь в чем-то измененную структуру или присутствовать в виде фрагмента. [c.283]

Клинико-иммунологические исследования показали, что IL-6 играет роль в патогенезе аутоиммунных заболеваний, для которых характерна гиперпродукция аутоантител. Гиперпродукция IL-6 нередко сопутствует поликлональной активации В-лимфоцитов. Отдельные наблюдения свидетельствуют в пользу вовлечения IL-6 в патогенез множественной миеломы. Усиленный синтез IL-6 сопутствует воспалительным процессам, опережая рост RP. Высокие уровни IL-6 в сыворотке крови и синовиальной жидкости обнаруживаются у больных ревматоидным артритом, причем его уровни в синовиальной жидкости в 100 раз выше, чем в сыворотке крови. Показано участие IL-6 и в патогенезе некоторых острых бактериальных инфекций, например, менингита. Очень высокой концентрации достигает IL-6 в сыворотке крови у больных септическим [c.177]

После иммунизации, даже монодетерминантным антигеном, в пуле иммуноглобулинов, синтезируемых совокупностью клеток, содержатся антитела, различающиеся между собой, т. е. сыворотки содержат поликлональные антитела. Эта гетерогенность антител обусловлена тем, что каждый плазмоцит вырабатывает только один тип, вид, класс, подкласс антител. Следовательно, каждая клетка или ее потомство, клон вырабатывают свой тип антител, получивших название моноклональных. Принципиально моноклональные антитела можно получить искусственно, культивируя каждую антителопродуцирующую клетку, т. е. получая моноклональную культуру клеток. Однако практически это трудно осуществимо. Поэтому гибридную клетку получают путем слияния иммунного антителопродуцирующего В-лимфоцита, т. е. лимфоцита, взятого от иммунного животного и раковой миеломной клетки. Такая гибридома приобретает свойства ро- [c.156]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология