Скэтчарда график

РИС. 4-3. График Скэтчарда, построенный по тем же точкам, что и кривые рис. 4-1 и 4-2. Это самый удобный линейный график для анализа данных по связыванию. [c.252]

График Скэтчарда является наилучшим из всех линейных преобразований уравнения насыщения, н в частности графика двойных обратных координат (рнс. 6-3). [c.252]

РИС. 15.1. График Скэтчарда для случая идентичных и независимых центров связывания. [c.12]

Однако в случае представленного на рис. 15.4 выпуклого графика Скэтчарда нельзя предположить наличие независимых центров отдельных типов, так как уравнения (15.32) и (15.33) описывают только вогнутые кривые. Следовательно, выпуклые кривые являются окончательным доказательством того, что существует взаимодействие между центрами связывания ф(р) уменьшается по мере увеличения р. Такие системы рассматриваются в следующих разделах. [c.16]

График Скэтчарда >/(Ь) от > во многих случаях оказывается нелинейным. Это может означать, что макромолекула имеет центры связывания более чем одного типа. Предположим, что существует л, независимых центров связывания, характеризующихся микроскопической константой диссоциации Агр Л2 центров, характеризующихся константой диссоциации Аг2 и т.д. в таком случае для каждого типа центров связывания справедливо [c.12]

Данные, полученные в эксперименте, представляют в виде графика Скэтчарда, откладывая по оси абсцисс значения v, а по оси ординат — v/[A]. При связывании лиганда в равноценных и невзаимодействующих участках экспериментальные точки образуют прямую, экстраполяция которой на ось абсцисс дает значение N, а наклон равен - /k [c.343]

НЕЛИНЕЙНЫЕ ГРАФИКИ СКЭТЧАРДА [c.12]

Построение графиков Скэтчарда показало [98], что Н-диазепам связывается синаптосомами мозга крыс в одном участке (с константой диссоциации комплекса 2,6 10 моль/л), а общее количество связывающих участков на 1 г исходной ткани равно 18. При данном взаимодействии кооперативность отсутствует. При определении связывания диазепама с десятью различными областями мозга крыс установлено, что лобная и затылочная доли обладали наибольшим, а ствол мозга — наименьшим сродством к соединениям. Изучение степени вытеснения диазепама, связанного с синаптосомами, другими бенздиазепинами и медиаторами позволило сделать вывод, что участок, связывающий диазепам, обладает высокой специфичностью. [c.262]

Уравнение (11.74) может быть решено аналитически относительно R, что позволяет найти связь R с La, Qia, Q20. Kai, Каг в явном виде. Большой интерес представляет связь R с Вр, Qi , Рга, поскольку именно эту зависимость откладывают на графике Скэтчарда. Для нахождения ее вида подставим в (11.71) вместо Lp его выражение через R и Вр [c.280]

График этого уравнения в координатах ([В]/[Р], [В]) представляет собой прямую. Экспериментальные данные по связыванию радиоактивных лигандов часто представляют именно в координатах Скэтчарда, полагая, что [ ] [Д], т.е. [Р] и [ ]. Параметры равновесного связывания получают, продолжая прямую до пересечения с осями на оси абсцисс отсекается отрезок, равный [Д], на оси ординат К[Я], тангенс угла наклона соответствует К. [c.264]

АНАЛИЗ ГРАФИКА СКЭТЧАРДА, СОСТОЯЩЕГО из ДВУХ УЧАСТКОВ [c.13]

Уравнения (15.44а) и (15.446) показывают связь между параметрами они могут быть использованы при анализе кооперативного связывания с помощью графиков Скэтчарда, иногда в широком диапазоне значений v и (L). Эти графики заметно отличаются от ранее обсуждавшихся графиков для связывания лиганда в независимых и невзаимодействующих центрах. Согласно уравнению (15.446), при > 1 кривая действительно проходит через начало координат, потому что, когда v = О [или (L) = 0], v/(L) тоже равна 0. В области низких значений р или (L) величина p/(L) растет по мере увеличения р и достигает предельного значения при р = п (а, — а затем уменьшается, и кривая пересекает ось р в точке р = п. [c.20]

РИС. 15.2. График Скэтчарда, состоящий из двух участков. [c.13]

НЕЛИНЕЙНЫЕ ГРАФИКИ СКЭТЧАРДА КАК СЛЕДСТВИЕ СТАТИСТИЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ [c.34]

Точка пересечения графика Скэтчарда с осью V дает величину N/1, которая соответствует л в уравнении (13.29). Однако точка пресечения кривой с осью 1точка пересечения графика с осью ординат согласно уравнению (15.29). Это обстоятельство следует учитывать при расчете из графика Скэтчарда параметров связывания лиганда с кристаллоподобными структурами. [c.35]

Согласно уравнению (15.105), точка пересечения графика Скэтчарда с осью v/ L) дает N/k. Эту же величину получают в случае системы с невзаимодействующими лигандами, описываемой уравнением (15.100). Кроме того, точка пересечения кривой с осью v по-прежнему дает величину N/1. Однако, когда ш > 1, насыщение решетки прн любом данном значении п достигается легче, чем в случае невзаимодействующих лигандов (ш = 1). где насыщение затрудняется из-за наличия энтропийных эффекте [c.38]

Взаимодействия макромолекул с лигандами широко распространены в биохимических системах. Для анализа равновесных свойств разнообразных систем разработан обширный и удобный математический аппарат. При таком анализе очень важно учитывать различие между микроскопическими и макроскопическими константами и связанные с этим статистические особенности систем. В простейших системах лиганды связываются в идентичных независимых центрах одного типа такие системы удобно анализировать, используя график Скэтчарда. Модифицированный метод анализа с использованием графиков Скэтчарда может быть полезен и в случае связывания лиганда с макромолекулой, имеющей независимые центры нескольких типов. [c.38]

Это выражение вместе с соотношением (23.96) позволяет вычислить > и таким образом построить график Скэтчарда для Г 7(т) в зависимости от й при любых значениях параметров и А . [c.369]

На рис. 23.26 изображены изотермы связывания, построенные согласно уравнениям (23.101) и (23.102) для трех разных значений . При = 1 мы получаем простой линейный график Скэтчарда. При > 1 график Скэтчарда обычно имеет максимум при некотором промежуточном значении V. Это обусловлено кооперативностью, которая приводит к большему заполнению мест связывания при промежуточных концентрациях лигандов, чем в отсутствие взаимодействия между лигандами. [c.369]

На графике Скэтчарда строят зависимость отношения [Ab-Ag]/[Ag] от IAb-Ag], где /Гравн определяется наклоном, а отсекаемый на оси х отрезок — АЬоб . [c.567]

Сыворотка с единственным эпитопом специфичности представляет моноклональную систему. На соответствующем графике Скэтчарда наблкщается прямая линия (рис. 7.9-2,о). Для поликлональной системы график Скэтчарда имеет более сложный вид. Он характеризуется набором многих прямых линий (рис. 7.9-2,б). [c.567]

Такого рода графики были использованы для вычисления значений —большого числа 1,1-валентных электролитов из многочисленных -опытных данных Скэтчарда и Прентиса. Эти данные приведены в табл. 123 и будут рассмотрены в гл. ХП. [c.282]

Заметим, что наличие линейной зависимости в координатах Скэтчарда (рис. 91, а) еще недостаточно для утверждения о протекании процесса по схеме (8.1), хотя и является существенным на это указанием. Дело в том, что прямолинейные зависимости в координатах Скэтчарда могут экспериментально наблюдаться и в более сложных случаях. Например, когда в процессе комплексообразования по схеме (8.1) имеет место инактивация центров связывания, то значения Ка, получаемые из графика Скэтчарда, имеют эффективный характер,-зависят от времени проведения процесса комплексообразования, однако резко отличаются от значений константы Ка, получаемой из кинетических экспериментов (Aranyi, 1979 Yeakley et al., 1980). Кинетические же эксперименты позволяют определить ki, k- и Ka=kilk-i в условиях, когда инактивацией центров связывания можно пренебречь (начальные времена проведения процесса), и, следовательно, дают возможность найти истинные значения констант. [c.205]

В простом случае идентичных и независимых центров уравнение (15.29), в которое входят величины V и (Ь), является особенно удобным для анализа экспериментальных данных. График зависимости р/(Ъ) от V называют иногда графиком Скэтчарда (см. 8са1сЬагс1, 1949). Эта зависимость является линейной наклон соответствующей прямой равен —к , и она отсекает на оси ординат отрезок, равный по величине п/к, а на оси абсцисс отрезок, равный л, как показало на рис. 15.1. Таким образом, построение подобного графика дает простой и удобный способ определения двух параметров, характеризующих равновесное связывание лигандов с макромолекулами. [c.12]

Уравнения (15.32) и (15.33) являются параметрическими и могут быть использованы для определения параметров n и к- из графика Скэтчарда. На рис. 15.2 представлен график Скэтчарда, состоящий из двух участков, который иллюстрирует случай связьшания лиганда с макромолекулой, имеющей независимые центры двух типов. [c.13]

Возникает вопрос являются ли однозначными параметры, полученные на основании янапичя графика Скэтчарда, состоящего из нескольких участков Например, можно ли с использованием других значений n и k так же хорошо описать экспериментальные дан- [c.14]

Возникает вопрос только ли с помошью предположения о наличии центров связывания разных типов и уравнений (15.32) и (15.33) можно объяснить нелинейность графиков Скэтчарда Ясно, что не только. Вполне вероятно, например, что связывание одной молекулы лиганда изменяет сродство макромолекулы к следующей молекуле лиганда и, таким образом, действительно вызывает непрерывное изменение микроскопической константы диссоциации. [c.15]

Итак, уравнения (15.28) и (15.29) можно использовать, заменив к на к (i>), определяемое соотношением (15.35). Если ф 1>) уменьшается при увеличении v, то k(v) увеличивается по мере насыщения. В этом случае, согласно уравнению (15.29), график Скэтчарда будет не линейным, а вогнутым. Вместе с тем, если ф (у) увеличивается при возрастании р, то на графике Скэтчарда будет наблюдаться горб , т.е. соответствующая кривая будет вьщу-клой, так как последующие молекулы лиганда будут рвязываться все более прочно (уменьшение констант диссоциации). Эта ситуация соответствует случаю, когда при увеличении [c.15]

Поскольку ф(р) является совершенно произвольной функцией, ее всегда можно задать так, что с помошью уравнений (15.28) и (15.35) можно описать любые эффекты. В идеальном случае нужно иметь об исследуемой системе такие данные, которые позволили бы с достаточным основанием сделать выбор, каким образом лучше объяснить нелинейность графика Скэтчарда используя уравнение (5.35) или опираясь на предположение о наличии независимых типов центров. Если мы решим, что для описания лучше использовать урав- [c.15]

При отсутствии точных доказательств (или очевидности) отрицательного взаимодействия центров, которое описывается уравнением (15.35), для объяснения графика Скэтчарда, представляющего собой выпуклую кривую, лучше опираться на предположение о наличии центров независимых типов [уравнения (15.32) и (15.33)]. Это, по крайней мере, дает полезное феноменологическое описание системы. Кроме того, в некоторых случаях наличие центров истинно разных типов самоочевидно. Например, на рис. 15.3 приведены данные исследования макромоле1сулы, которая содержит как одноцепочечные, так и двухцепочечные участки. Так как известно, что участки этих двух типов существенно различаются по сродству к лиганду (Мп +), физически обоснованной является модель, включающая центры по крайней мере двух типов. Если, как и в этом случае, данные можно количественно объяснить наличием центров разных типов (существование которых не вызывает сомнений), то нет причин привлекать для объяснения возможное взаимодействие центров, описываемое ф (i>). [c.16]

На рис. 15.6 приведен пример графика Скэтчарда такого типа. На этом рисунке представлены данные о кооперативном связывании с тРНК. Выпуклый характер кривой очевиден. Параметры, характеризующие взаимодействие, можно получить, выразив А н через [c.20]

Вначале рассмотрим однородную кристаллическую решетку, которая построена из N идентичных повторяющихся элементов. Например, в спиральной нуклеиновой кислоте повторяющимися элементами служат фосфатные группы или остатки сахара. Допустим, что одна молекула лиганда L занимает / расположенных последовательно элементов решетки насыщение решетки лигандом L приводит к связыванию N/1 молекул лиганда на молекулу, играющую роль решетки. Предполагается, что лиганд может занять любые / последовательных элементов решетки, поэтому на полностью свободной решетке имеет-сяЛ — / + 1 потенщ1альных центров, которые может занять первая связывающаяся молекула лиганда. Таким образом, в начале титрования число потенциальных центров связывания L много больше, чем число центров N/I, которые могут быть заняты при насыщении. Из-за этой особенности данная ситуация резко отличается от приведенного ранее случая идентичных и независимых центров [уравнение (15.12)], в котором число свободных центров (л) на Мр соответствует числу центров, занятых на М . Благодаря этому связывание на кристаллоподобных структурах приводит к графику Скэтчарда, который значительно отличается от получаемого в случае простой системы [уравнение (13.12)]. [c.32]

Уравнение (15.100) можно сравнить с соответствующим уравнением (15.29) для связывания L на л идентичных, независимых центрах макромолекулы, для которых не действует эффект перекрывания . Когда/ = 1, уравнение (15.100) сводится к уравнению (15.29). (Отметим, что при / = 1 л в уравнении (15.29) равно N в уравнеиин (15.100) а вообше п = N/1.) Однако, когда / > 1, последний множитель в уравнении (15.100) всегда меньше единицы и изменяется в зависимости от величины v. Это приводит к заметной нелинейности графиков Скэтчарда, отражающих зависимость v/(L) от к в данном случае графики для / > 1 всегда расположены ниже прямой для / = 1. [c.34]

На рис. 15.11 представлены некоторые расчетные графики Скэтчарда для значений I от 1 до 20 при А = 1 М. Для того чтобы кривые легче было сравнивать, абсцисса дана в единицах 1//. Во всех случаях полное насыщение решетки достигается при v = п = N/I. Однако по мере увеличения / вогнутость кривых становится все более очевидной. Это объясняется тем, что при насыщении решетки возникают затруднения энтропийного характера, которые становятся все более отчетливо выраженными по мере увеличения /. Таким образом, статистически большое число микросостояний, которые образуются при данной степени частичного насыщения, определяет сильный энтропийный вклад в свобопную энергию [c.34]

На рис. 15.12 показаны некоторые экспериментальные данные график Скэтчарда для связывания е-динитрофенильного производного олиголизина [е-ДНФ-Ьу5-(Ьу8)5] со спиралью ро1у(г1) ро1у(гС). Сплошная кривая рассчитана по уравнению (15.100) для / = 7,8 и к = 7,1 мкМ. Точка полного насыщения обозначена стрелкой. Из рисунка видно, что получено превосходное соответствие между расчетными и экспериментальными данными. Штриховые кривые показывают чувствительность расчетных кривых к изменению / при постоянном значении к. Ясно, что изменение / только на 1 от значения, соответствующего наилучшему совпадению, приводят к значительному отклонению расчетной кривой от экспериментальной. [c.35]

Можно показать, что при w = 1 уравнение (15.105) сводится к уравнению (15.100). Когда ш < 1 (антикоопфативное связывание), графики Скэтчарда, согласно уравнению (15.105), расположены ниже соответствующих кривых для случая невзаимодействующих лигандов [уравнение (15.100)]. Когда w О (бесконечно большая антикооперативность), уравнение (15.105) сводится к уравнению (15.100) для случая невзаимодействующих лигандов, состоящих из / + 1 частей. Когда ш > 1, графики Скэтчарда являются выпуклыми и расположены выше кривых, соответствующих случаю невзаимодействующих лигандов. На рис. 15.13 представлены такие графики для различных значений ы прн/ = 1нА = 1 М. [c.37]

РИС. 15.13. График Скэтчарда в случае связывания лиганда на однородной решетке при условии к = I М и / = 1 для различных значений параметра кооперативности и (M Ghee, von Hippel. 1974). [c.37]

Такой анализ связывания лиганда на однородной решетке применим к ряду ситуащЛ, встречающихся на практике. Хотя для анализа связывания лиганда на гетерогенных решетках, которые имеют лигандсвязывающие центры более одного типа, должен быть использован другой подход, приведенный выше анализ показывает, что нелинейные области на графиках Скэтчарда в значительной мере могут объясняться эффектом перекрывания . Гетерогенность решетки необходимо учитывать только тогда, когда наблюдаются эффекты, не предсказываемые уравнением (15.100) или (15.105). Такой анализ требует дальнейшего развития теории. [c.38]

Макромолекула имеет шесть центров связывания лиганда Ь. Исследователь может определить три макроскопические константы диссоциации, характеризующие связывание лиганда, К .К и Ку Он нашел, что = 15 /Г, и = 8/Г,. Ои утверждает, что этот результат ясно показывает отрицательное (антикооперативное) взаимодействие между центрами и что график Скэтчарда для этой системы, несомненно, представляет собой выпуклую кривую. Оппонент не соглашается с исследователем и говорит, что имеющиеся данные указывают на отсутствие взаимодействия между центрами и что он попытается предсказать относительные значения К. для других констант. Кто иэ них прав и почему Можно ли предсказать значения других X. Если да, то сделайте это. Если нет, то объясните, почему нельзя предсказать значения других констант. [c.39]

Это очень полезное уравнение является основой широко известного графика Скэтчарда. С его помошью можно определить как кажущуюся константу связывания К, так и число мест связывания в расчете на пару оснований Вд. График зависимости р/(т) от V представляет собой прямую. Ее наклон равен К,аВд равно значению V в точке, которая получается при экстраполяции р/(т) к нулю. Кривая I на рис. 23.26 представляет собой пример линейного графика Скэтчарда. [c.363]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология