Иммунизация схема

СХЕМЫ ИММУНИЗАЦИИ С АДЪЮВАНТАМИ [c.118]

Схема иммунизации. Для получения антисывороток к мышиным IgG животным внутримышечно (в бедро) и подкожно (в области живота) в нескольких точках вводят 2 мл эмульсии из растворенного в физиологическом растворе IgG (1 мг/мл) и 1 мл адъюванта Фрейнда. Через месяц иммунизацию повторяют, вводя 500 мкг lgG в виде эмульсии с равным объемом адъюванта Фрейнда. Затем каждую вторую неделю в течение 6—8 нед вводят по 200 мкг IgG с адъювантом. Через 2 нед после последней иммунизации из краевой вены уха берут пробы крови и определяют титры антител методом иммуноферментно- [c.307]

СХЕМЫ ИММУНИЗАЦИИ БЕЗ АДЪЮВАНТА [c.116]

Таблица 6.5. Схема иммунизации

Для реакции преципитации необходимо иметь специфические антисыАоротки достаточно высокого титра. В лабораторных условиях кролик — наиболее удобный продуцент таких антисывороток. Существует два типа схем иммунизации животных-продуцентов 1) иммунизация без введения адъювантов (вещества, стимулирующие образование антител) и 2) иммунизация с адъювантами. [c.116]

В продаже имеются готовые препараты полного и неполного адъюванта Фрейнда. Весьма хорошо себя зарекомендовала следующая схема иммунизации белковыми антигенами. 0,1—1,0 мг антигена растворяют в 0,25—0,5 мл физиологического раствора хлористого натрия и гомогенизируют с равным объемом полного адъюванта Фрейнда. Эмульсию вводят внутримышечно в четыре места. Спустя 3—4 нед у животного берут кровь и определяют активность антисыворотки в иммуноэлектрофорезе. При необходимости эту процедуру повторяют. Если через 2—3 нед после повторной имму- [c.118]

В. Для получения кроличьей антисыворотки к белкам сыворотки человека рекомендуется описанный ниже метод иммунизации, позволяющий приготовить, по-видимому, наилучшую иммунную сыворотку для выявления многих белковых компонентов, в том числе иммуноглобулинов. В этом методе совмещены две схемы иммунизации по Мильгрому и по Проому. [c.117]

В литературе описано очень много разных способов иммунизации. Вряд ли можно рекомендовать какую-либо одну универсальную схему иммунизации, так как ее эффективность определяется множеством факторов. Иммунный ответ зависит от свойств вводимого антигена, вида животных-продуцентов, индивидуальных различий иммунизируемых животных и т. д. Ниже мы приводим несколько схем иммунизации. [c.116]

Конкретная схема иммунизации сильно зависит от природы антигена и его иммуногенности. Антигены клеточной поверхности являются сильными иммуногенами, тогда как большинство растворимых белков — слабые иммуногены. В последнем случае необходимо применять различные адъюванты, усиливающие иммунный ответ. Среди адъювантов наибольшее распространение получил полный адъювант Фрейнда (ПАФ). Помимо этого используют введение антигена, преципитироваиного на квасцах, и введение вместе с антигеном убитых клеток Bordetella Pertussis. Обычно антиген вводят неоднократно, что необходимо для развития сильного иммунного ответа, хотя чрезмерная иммунизация [c.100]

Первое, что обращает на себя внимание, — это ограничения в использовании иммунизации. На человеке недопустимо применять те схемы иммунизации, которые у грызунов вызывают максимально интенсивный иммунный ответ. Для получения клеток-предшественников нужной специфичности в большинстве случаев приходится рассчитывать на случайную иммунизацию. Однако это ограничение, по крайней мере в качественном аспекте, оказывается не таким уж строгим, как это может показаться на первый взгляд. Дело в том, что иммунный ответ на многие антигены, к которым требуется получить МКА, возникает естественным образом. Например, при беременности организм матери вырабатывает антитела к отцовским антигенам, плода, которые используются для типирования и определения групп крови. Можно найти иммунные В-клетки и у больного раком, если в его крови циркулируют противоопухолевые антитела. Аналогичным образом иммунный ответ возникает в результате вирусных и бактериальных инфекций. И в этом случае можно получать иммунные клетки. Наконец, можно рассчитывать на весь спектр специфичностей нормальных антител индивидуума, включая и аутоантитела. Получение МКА человека, специфичных к собственным антигенам, намного упростило бы изучение патогенеза аутоиммунных заболеваний. [c.154]

При такой схеме иммунизации доля положительных клонов достигала 40% (для сравнения — при иммунизации сильными антигенами доля положительных клонов равна 1 —10%). Очевидно, что далеко не всегда можно использовать эту схему, так как для нее требуется большое количество антигена (несколько миллиграммов). [c.101]

Второй цикл иммунизации осуществляется после месячного отдыха животных по схемам 45, 46 и 47 дней. [c.152]

Для антигенов клеточной поверхности может быть использована следующая схема иммунизации. Выбор процедуры может о пределяться количеством клеток, доступных для иммунизации. [c.122]

Независимо от схемы иммунизации одним и тем же антигеном следует одновременно иммунизировать группу животных, так как обычно наблюдаются весьма большие индивидуальные различия в иммунном ответе. Чем больше группа иммунизируемых животных, тем выше вероятность получения антисыворотки достаточно высокого титра в наиболее короткий срок. Это особенно важно при получении антисыворотки к смеси белков, например при иммунизации кроликов белками сыворотки крови для получения антисыворотки, используемой в] иммунселектрофорезе. Именно в этом случае можно ожидать образования антител к ряду компонентов смеси. Для получения антисыворотки к белковым антигенам вполне достаточно иммунизировать 1%-ными белковыми растворами. Белок обычно растворяют в 0,15 М растворе ЫаС1 этим же раствором разбавляют сыворотку крови для иммунизации. [c.116]

Авторы предпочитают соблюдать следующую схему за 3—4 нед до гибридизации внутрибрюшинно вводят первичную дозу (10 целых клеток), а затем проводят последующие иммунизации за 7 и за 3 дня до слияния. За неделю до второго введения иммуногена кровь мышей тестируют. [c.122]

В сыворотке иммунизированных животных всегда накапливаются продукты, секретируемые многими клонами В-лимфоцитов. Сывороточные антитела при любых схемах иммунизации представляют собой смесь молекул антител, гетерогенных по специфичности, аффинности и классовой принадлежности, вследствие чего имеется неизбежная перекрестная реактивность иммунных сывороток с разными антигенами. Перекрестная реактивность делает трудным или невозможным идентификацию уникальных антигенов. Моноклональные антитела, в отличие от поликлональных, являются продуктами потомков всего лишь одной В-клетки, и поэтому препараты моноклональных антител имеют особые свойства, вытекающие из небывалой степени биохимической гомогенности моноклональные антитела высокоспецифичны. Они направлены против одной и той же антигенной детерминанты моноклональные антитела стабильны как эталоны в отношении специфичности и аффинности (прочности связи с антигеном). Исследователь может целенаправленно подобрать моноклон, вырабатывающий антитела только нужного сорта , т. е. класса, подкласса, специфичности, аффинитета. [c.309]

Таблица 9. Схема иммунизации, предложенная для получения моноклональных антител против хорионного гонадотропина человека

Как только титр антиглобулиновых антител достигает указанной величины, иммунизацию продолжают по схеме Проома. Для этого белки человеческой сыворотки адсорбируют на алюминиевокалиевых квасцах 25 мл стерильной сыворотки разбавляют 80 мл дистиллированной воды и к полученному раствору прибавляют 90 мл 10%-ного раствора алюминиево-калиевых квасцов. С помощью 5 н. МаОН подводят pH раствора до 6,5. Образовавшийся осадок собирают центрифугированием и, отбросив надосадочную жидкость, дважды промывают его 200 мл физиологического раствора, содержащего мертиолат (I 10 ООО). Конечный объем суспензии доводят до 100 мл физиологическим раствором и хранят при +4°С не более 14 дней. По 5 мл этой суспензии вводят животным внутримышечно в область бедра 2—3 раза с интервалом в 14 дней. На 9— 10-й день после последней иммунизации у животных берут кровь. [c.117]

В целях получения лимфоиддых клеток животному (мыши) вводят внутримышечно или внутрибрюшинно антиген в дозе примерно 5- 200 мг в расчете на чистый белок. В ответ на сильный антиген в селезенке 0,05% клеток секретируют IgM и IgG в соотношении, близком 10 1 из примерно 1% всех секретирующих клеток. Через 3—4 недели повторно вводят 10—100 мкг антигена. В течение последующих 2—4 недель проверяют титры антител и затем перед экстирпацией селезенки в течение нескольких дней вводят внутривенно небольшие дозы антигена для активации В-лимфоцитов. Могут быть приняты и другае схемы иммунизации. [c.573]

Самые сильные реакции не всегда получались с гаптенами, имеющими концевую часть, идентичную той, которая была у антигена, использовавшегося для иммунизации. Например, когда Ландштейнер приготовил антисыворотку к полипептидам, у которых концевая карбоксильная группа была превращена в амид (схема XI), то он установил, что антисыворот- [c.55]

Схемы, изображенные на фиг. 47 и 48, показывают, что каждая молекула антитела, даже в том случае, если для иммунизации используется многовалентный антиген, обладает только одной специфической группой, способной связываться с антигеном. Представление о том, что антитела являются одновалентными [67, 79], подкрепляется следующим наблюдением. Дифте- [c.340]

Для большинства растворимых антигенов можно использовать следующую схему иммунизации (J. Kearney, 1984). [c.101]

Иногда для получения гибридов приходится прибегать к очень массированным схемам иммунизации. В качестве примера можно привести схему, предложенную Стели и сотр. (1980). Авторам не удавалось получить гибридомы против хорионного гонадотропина человека, применяя обычную схему иммунизации, несмотря на то что титр антител в сыворотках животных был высоким. Тогда авторы предположили, что для гибридизации важно, чтобы клетки находились в стадии активной бласттрансформации под действием антигена. Ими была выявлена высокая степень корреляции между числом больших бластных клеток в популяции клеток селезенки и образованием специфических антителообразующих гибридов. Максимальный выход гибридов получался при схеме иммунизации, представленной в табл.. 9. [c.101]

Схема постановки отштов, разработанная Ландштейнером, включала иммунизацию кроликов гаптенбелковым комплексом и последующий анализ антисывороток от иммунизированных животных с тем же самым или иным гаптеном, но конъюгированным с другим неродственным белком. Подобный прием позволял работать только с антителами к гаптену и исключал те антитела, которые образовывались к эпитопам белка, взятого для иммунизации (рис. 1.3). В результате удалось показать решающую роль тонкой конфигурации Гаптена в определении специфичности. Другой пример, иллюстрирующий это основное положение, представлен в табл. 1.4. [c.40]

Процесс введения животном) антигена по разработанной схеме называется иммунизацией, а сыворотка крови иммунизированных животных — антисывороткой. В литературе описано большое разнообразие способов иммунизации, зависящих от структуры антигена, его доступных количеств, вида животного и т. д. По этим причинам условия получения йммунных сывороток подбираются эмпирически. Тем не менее имеются общие закономерности,, которые позволяют выбрать условия получения высокоактивных антисывороток. [c.146]

В процессе иммунизации у животных отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства растворимых антигенов (белков, полисахаридов и т. д.) достигается через 40—60 дней после первой инъекции. В том случае, когда иммуногеном являются клетки микроорганизмов, максимально высокий уровень антител наблюдается гораздо раньше (через 12—20 дней). После окончания первого цикла иммунизации животному в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию (2-й цикл иммунизации), включающую 1—3 внутривенные инъекции. Ниже приводятся схемы иммунизации морских свинок и кроликов инсулином и конъюгатом тироксин — бычий сывороточный альбумин (ВСА). [c.152]

Иммунизацию кроликов конъюгатом тироксин — БСА (T — БСА) проводят многоточечными инъекциями вдоль позвоиочиика и внутримышечно в область микроузлов задних лап по следующей схеме 1-й день — 1—2 мг конъюгата [c.152]

Описанная выше схема исследования по ряду причин недостаточно эффективна. Во-первых, таким способом нельзя решить важный вопрос о расположении в субчастице РНК, прежде всего ее концевых участков, так как получить к ним антитела при иммунизации собственна РНК невозможно. Во-вторых, достаточно трудно получить в иммунохимически чистом виде различные белки, входящие в состав рибосомы, что позволило бы иметь антитела к строго определенному белку. Обе эти трудности можно обойти в случае модификации рибосомной РНК и белков гаптенами и последующей димеризации рибосомных частиц антителами против этих гаптенов. В качестве примера подобного исследования можно привести работу, выполненную И. Шатским, М. Кожухаро-вой, Л. Мочаловой и А. Богдановым (1978—1982). [c.264]

Основная проблема использования цельной сыворотки или плазмы в качестве иммуногена заключается в получении эффективного ответа на а-глобулины. Наилучший подход — электрофоретическое разделение белков сыворотки на горизонтальной пластине агарозного геля. Полос. геля затем можно разрезать поперек и заморозить, и компоненты собирать в ходе оттаивания. После этого можно иммунизировать овец различными фракциями в соответствии с их электрофоретической подвижностью. Можно добавить антитела к отдельным компонентам цельной сыворотки, например компонентам комплемента. На рис. 2.7 приведена электрофоре-грамма хорошо сбалансированной овечьей антисыворотки к белкам сыворотки человека, полученной данным методом. Общая схема иммунизации аналогична той, что р-екомендована для отдельных белков. [c.80]

Могут быть использованы животные в возрасте 3—4 мес любого пола. Используемая схема иммунизации зависит от природы иммуногена в такой же степени, как и при получении поликлональной антисы воротки. Важно установить, что у Мышей, клетки которых предполагается ис пользовать в экспериментах по слиянию, в ответ на введение данного иммуногена образуются антитела. Забор крови для контрольного исследования производят из хвостовой вены спустя неделю после заключительной иммунизации. Если в сыворотке обнаруживают антитела в адекватном титре, то за 3—4 дня до извлечения селезенки для слияния клеток производят последнее введение иммуногена. Иногда трудно интерпретировать результаты тестирования крови, поскольку сыворотка содержит сло жную смесь антител. Неоднозначно, что все данные антитела были образованы секретирующими клетками селезенки, а также, что именно эти антиген-реактивные клетки будут преимущественно синтезировать 1 в ходе иммунного ответа [c.121]

Для растворимых антигенов известны разнообразные схемы иммунизации. Например, первую инъекцию 100 мкг антигена, эмульгированного в полном или неполном адъюванте Фрейнда, осуществляют подкожно (в 0,1 мл), а последующие инъекции (оо 100 мкг в PBS объемом 0,5 мл) проводят в/б с интервалом в месяц. Отбирают пробу крови, чтобы убедиться в наличии адекватного титра антител в сыворотке, а затем осуществляют последние инъекции антигена (в/б утром и в/в днем), за 3—4 дня до гибридизации. [c.123]

Процесс созревания клона занимает около 6 суток, а срок жизни зрелых плазматических клеток, синтезирующих антитела, составляет 8—48 часов. Приведенная схема изменения состава клеточной популяции при синтезе антител отражает, по-видимому, лишь самую общую закономерность. И хотя эта схема хорошо согласуется с кривыми титров антител в сыворотке, в ней, очевидно, не учтены многие важные детали дифференцировки антителосинтезирующих клеток. Действительно, в ходе гистогенеза не все клетки клона созревают синхронно. В частности, после иммунизации некоторое количество зрелых плазматических клеток, синтезирующих антитела, появляется значительно раньше, чем проходит время, нужное для 8—9 клеточных делений (8а1п1е-Ма-г1е, 1966). Кроме того, среди зрелых плазматических клеток имеется небольшая часть с жизненным циклом, намного превышающим 48 часов. [c.112]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология