Зонды флюоресцентные

Липидная фаза биологических мембран при физиологических условиях (температуре, давлении, химическом составе окружающей среды) находится в жидком агрегатном состоянии. Это доказано методами флюоресцентного анализа (с использованием флюоресцентных зондов и меток), электронного парамагнитного резонанса (ЭПР), с использованием спиновых зондов и меток, и ядерного магнитного резонанса (ЯМР). [c.16]

Рис. 1.5. Структура некоторых флюоресцентных зондов, применяемых при изучении биологических мембран

Будет ли состояние данного бислоя жидким или твердым, зависит от химического состава липидов, формирующих бислой, числа заряженных групп, приходящихся на единицу поверхности мембраны, и температуры. Для изучения фазовых переходов в опыте обычно изменяют температуру образца и следят за изменением какой-либо характеристики, различающейся у твердой и жидкой мембраны. Такой характеристикой могут быть растворимость веществ в мембране, спектры комбинационного рассеяния, светорассеяние суспензии, форма сигналов ЭПР свободных радикалов в липидной фазе (спиновых зондов), интенсивность или спектр флюоресценции флюоресцентных зондов и т. д. [c.103]

Экспериментальное изучение поверхностного потенциала мембран и его изменения в патологии или при действии лекарственных препаратов, например местных анестетиков, может проводиться рядом методов, включая метод флюоресцентных зондов. [c.109]

Флюоресцентный зонд (рис. 42) представляет собой флюоресцирующую молекулу, которая находится в липидном слое мембраны или же адсорбируется на ее поверхности. Параметры флюоресценции зонда (см. с. 36) зависят от свойств непосредственного окружения молекул зонда в мембранах вязкости, полярности среды, близости заряженных групп, наличия различных молекул — акцепторов энергии электронного возбуждения, а также от диффузии молекул — тушителей флюоресценции, в частности воды. [c.109]

Основной недостаток метода флюоресцентных и спиновых зондов заключается в том, что хотя эти молекулы и невелики, все же, включаясь в липидный бислой, они несколько изменяют его свойства. Этого недостатка практически лишен более дорогой и сложный метод ЯМР. [c.118]

Проточная цитометрия (ПЦМ) — скоростной метод анализа отдельных клеток и клеточных структурных компонентов в потоке жидкости. Производительность анализа составляет 1000 клеток в 1 с и более, и это является главной технологической характеристикой метода. Другой уникальной особенностью ПЦМ является возможность сортировки клеток непосредственно сразу после измерения и, таким образом, получения для дальнейшего морфологического, биохимического или биотехнологического исследования фракций клеток, обладающих определенным значением измеряемого параметра. Техника ПЦМ — это главным образом техника флюоресцентных измерений с применением многочисленных зондов-красителей. Практически любой цитохимический прием, использующийся в флюоресцентной микроскопии для окраски клеток, может служить основой для проведения анализа методом ПЦМ. [c.136]

Спектроскопический анализ хромосом (SKY). Этот метод использует флюоресцентные красители, имеющие сродство к определённым участкам хромосом. При использовании набора специфических зондов с разными красителями каждая пара хромосом имеет свои уникальные спектральные характеристики. Особенность метода — использование интерферометра, аналогичного используемым для измерения спектра астрономических объектов. Незначительные вариации в спектральном составе, неразличимые человеческим глазом, учитываются при компьютерной обработке, и затем программа назначает каждой [c.256]

Для того чтобы визуально выявить нужные фрагменты (фиксированная на фильтре ДНК не видна), проводят гибридизацию со специфическим по нуклеотидной последовательности меченым радионуклидом или флюоресцентной меткой олигонуклеотидным синтетическим зондом (такой зонд состоит из 16—30 пар нуклеотидов) либо клонированным фрагментом ДНК. Нуклеотидная последовательность зонда должна быть полностью или частично комплементарна изучаемому участку геномной ДНК. [c.264]

Зонд генетический — короткий отрезок ДНК или РНК (16-30 пар нуклеотидов) известной структуры или функции, меченный каким-либо радиоактивным или флюоресцентным соединением. [c.353]

Расстояние между этими ассоциатами настолько велики, что между ними молекулы флюоресцентного зонда — пиррена обмениваются очень медленно. В области 9, 0,8 плотность распределения этих ассоциатов на поверхности уже настолько велика, что они объединяются в одну систему или образуют достаточно большие скопления, внутри которых диффузия молекул пиррена протекает столь же свободно, как в гомогенной среде. [c.130]

Поляризацию флюоресценции определяют, чтобы изучать микровязкость структур клетки. Если в мембранную систему поместить флюоресцентный зонд, например 4-диметиламинохалкон, 3-метоксибензантрон или 1-анили-нонафталин-8-сульфонат,- то он, как гидрофобная молекула, окажется внутри мембраны. Измерив Р для такого зонда, можно определять микровязкость мембраны (см. главу 5). [c.41]

Зависимость коэффициента поляризации Р от вязкости окружения т) описывается уравнением Перрена (2.12), приведенным в главе 2. Если известны другие параметры в этом уравнении, можно найти т), зная Р. Другой метод оценки микровязкости основан на измерении эксимериза-ции флюоресцентного зонда пирена (рис. 44). В достаточно концентрированном растворе этого зонда молекулы (А), перешедшие в возбужденное состояние (А ) в результате поглощения фотона, могут затем, сталкиваясь с невозбужденными молекулами зонда, образовывать коротко-живущие комплексы — эксимеры (АА ), максимум флюоресценции которых отличается от максимума мономерных молекул [c.113]

При работе с флюоресцентными метками и зондами можно использовать микроскопы ЛЮМАМ различных модификаций. Флюоресценция возбуждается лампой постоянного тока ДРШ-250-2, наиболее яркой из отечественных ламп. Существенным моментом является подбор оптимальных фильтров для возбуждения флюоресценции красителей при решении определенных задач эксперимента. Для создания наборов фильтров целесообразно пользоваться набором оптического стекла и наборами интерференционных фильтров отечественного производства или зарубежных фирм. При подборе фильтров необходимо учитывать слектр свечения ртутной лампы, спектр возбуждения флюоресцентной метки, спектральные характеристики фильтров, а также спектр собственной люминесценции клетки. В таблице представлены некоторые комбинации филь тров, сконструированные только из отечественных светофильтров. Кроме того, можно рекомендовать набор № 18, состоящий из интерференционного фильтра Кр 490 (К. Ц. Й.), фильтров СЗС-22-2 и ЖС-17-2 для создания узкого канала пропускания с длиной волны 490 нм и высокой эффективностью пропускания. В таблице указаны, кроме обычных светоделительных пластинок, Зеленая-2 и Зеленая-3 , включенные в комплект нового микроскопа ЛЮМАМ-Р8. Отметим, что при подборе комбинаций фильтров нельзя ограничиваться сведениями о характеристиках фильтров, представленными в описаниях необходимо получить кривые пропускания для каждого отдельного фильтра и для всего набора фильтров. [c.130]

В 1986 г в Ливерморской национальной лаборатории (США) разработан принципиально новый метод изучения хромосом — метод флюоресцентного выявления ДНК хромосом путем гибридизации in situ со специфическими молекулярными зондами (FISH). Он основан на способности хромосомной ДНК связываться при определенных условиях с фрагментами ДНК (ДНК-зонды), которые включают нуклеотидные последовательности, комплементарные хромосомной ДНК (рис. 6.20). ДНК-зонды предварительно метят специальными веществами (например, биотином или дигоксигенином). Меченые ДНК-зонды наносят на цитогенетические препараты подготовленных для гибридизации (денатурированных) метафазных хромосом. Предварительная обработка хромосом необходима для облегчения доступа ДНК-зонда к геномной ДНК. После того, как произошла гибридизация, препараты обрабатывают специальными флюоресцентными красителями, конъюгированными с веществами, спо- [c.159]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология